本发明涉及一种蓝莓组培苗生根的培养基及使用该培养基的培养方法。
背景技术：
蓝莓营养价值极高，富含多种维生素(例如VA、VB、VC、VE等)以及各种矿质元素(例如K、Fe、Zn、Ca等)、蛋白质、食用纤维、抗氧化剂、细菌生长抑制剂、鞣花酸、鞣花单宁、叶酸、花色素苷、类黄酮等化合物，具有提高免疫力、明目抗癌、改善循环、软化血管、延缓神经老化、缓解眼部疲劳、防衰抗突变等独特功效，被誉为“21
世纪功能性保健浆果”和“水果皇后”，并被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。伴随着人们对其营养保健功效认识的不断加深，蓝莓产业发展迅速，苗木需求量迅速扩大。组织培养具有高效和保存亲本优良性状等优点，适合蓝莓优良品种规模繁育，近年来蓝莓组培育苗技术有了不少的进展，但现有报道文献中，蓝莓组培多采用瓶外生根法，不仅存在生根率较低，生根时间长等问题，也影响了育苗效率。
因此，对于目前蓝莓组培苗生根的培养方法，有待于做进一步的改进。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种针对性强、适用性好的蓝莓组培苗生根的培养基，该培养基能有效提高蓝莓的生根率、缩短生根时间。
本发明所要解决的另一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种使用上述培养基的蓝莓组培苗生根的培养方法，该方法生根时间短、生根率高。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种蓝莓组培苗生根的培养基，其特征在于：包括营养液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，所述的营养液Ⅰ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅰ包含以下组分及含量：
(NH4)2SO4 375～385mg/L、K2SO4 445～455mg/L、KH2PO4 165～175mg/L、Ca(NO3)2.4H2O 145～155mg/L、MgSO4.7H2O 175～185mg/L、FeSO4·7H2O 27～28mg/L、EDTA·Na2 37～38mg/L、ZnSO4·7H2O 4～4.5mg/L、MnSO4·H2O 8～9mg/L、CuSO4.5H2O 0.05～0.15mg/L、Na2MoO4.2H2O 0.05～0.1mg/L、H3BO3 6～6.5mg/L、VB10.5～1.5mg/L、VB6 0.2～0.6mg/L、VC0.1～0.3mg/L、白糖18～22g/L；
所述的支持物Ⅰ为珍珠岩和琼脂，所述珍珠岩在上述营养液Ⅰ中的含量为55～65g/L，所述琼脂在上述营养液Ⅰ中的含量为3～4g/L；
所述的激素为IBA，该激素在营养液Ⅰ中的含量为0.05～0.5mg/L。
在上述方案中，所述营养液Ⅰ的pH值为5.2～5.5。
作为优选，所述营养液Ⅰ包含的组分及含量为(NH4)2SO4 380mg/L、K2SO4 450mg/L、KH2PO4 170mg/L、Ca(NO3)2.4H2O 150mg/L、MgSO4.7H2O 180mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、EDTA·Na2 37.3mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3mg/L、MnSO4·H2O 8.5mg/L、CuSO4.5H2O 0.1mg/L、Na2MoO4.2H2O 0.1mg/L、H3BO3 6.2mg/L、VB11.0mg/L、VB6 0.5mg/L、VC0.2mg/L、白糖20g/L。
优选地，所述珍珠岩在营养液Ⅰ中的含量为60g/L，所述琼脂在营养液Ⅰ中的含量为3.5g/L。
一种使用上述培养基的蓝莓组培苗生根的培养方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)组培苗的培植
在增殖培养基中培养蓝莓组培苗；
(2)生根培养基的配制及分瓶
按照营养液Ⅰ的组分配比配制营养液Ⅰ，向营养液Ⅰ中加入组分量的琼脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液将营养液Ⅰ的pH值调节至5.2～5.5，每瓶培养基中加入1.8～2.2g珍珠岩，将营养液Ⅰ分瓶灌装得到培养基，完毕后进行灭菌处理；
(3)生根培养
将步骤(1)中增殖培养基中长度大于3cm的组培苗接种于步骤(2)灭菌处理后的培养基中培养，控制温度为23～27℃，光照强度为2000～2500Lx，光照时间为12～14h/d。
在上述方案中，所述增殖培养基包括营养液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，所述的营养液Ⅱ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅱ为WPM基本培养基，其中白糖30g/L；
所述的支持物Ⅱ为琼脂，该琼脂在上述营养液Ⅱ中的含量为6～8g/L；
所述的激素为ZT，该激素在营养液Ⅱ中的含量为0.2～1.0mg/L。
优选地，所述营养液Ⅱ中的白糖含量30g/L；所述琼脂在营养液Ⅱ中的含量为7g/L；所述激素ZT在营养液Ⅱ中的含量为0.6mg/L。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的培养基合理控制了氨态氮与硝态氮比例，有利于蓝莓组培苗健壮生长，且该培养基中配制的低氮高磷和硼组合，尤为适合蓝莓组培苗生根的要求，有利于蓝莓的根系生长，而VC的添加可有效防褐化、促生根，从而提高了蓝莓的生根率；另外，本发明采用琼脂及珍珠岩作为培养基支持物，通透性好，进一步为蓝莓组培苗生根提供了较好的条件；本发明的培养方法针对性强、适应性好，培植蓝莓组培苗30d的生根率可达到90％以上，远远高于现有技术相同时间的生根率。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：
本实施例的蓝莓组培苗生根的培养基包括营养液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，营养液Ⅰ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅰ包含以下组分及含量：
(NH4)2SO4 380mg/L、K2SO4 450mg/L、KH2PO4 170mg/L、Ca(NO3)2.4H2O 150mg/L、MgSO4.7H2O 180mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、EDTA·Na2 37.3mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3mg/L、MnSO4·H2O 8.5mg/L、CuSO4.5H2O 0.1mg/L、Na2MoO4.2H2O 0.1mg/L、H3BO3 6.2mg/L、VB11.0mg/L、VB6 0.5mg/L、VC0.2mg/L、白糖20g/L；该营养液Ⅰ的pH值为5.2；
支持物Ⅰ为珍珠岩和琼脂，珍珠岩在上述营养液Ⅰ中的含量为60g/L，琼脂在上述营养液Ⅰ中的含量为3.5g/L；
激素为IBA，该激素在营养液Ⅰ中的含量为0.2mg/L。
本实施例中使用上述培养基的蓝莓组培苗生根的培养方法包括以下步骤：
(1)组培苗的培植
在增殖培养基中培养蓝莓组培苗；该增殖培养基包括营养液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，营养液Ⅱ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅱ为WPM基本培养基，其中白糖30g/L；支持物Ⅱ为琼脂，该琼脂在营养液Ⅱ中的含量为7g/L；激素为ZT，该激素在营养液Ⅱ中的含量为0.5mg/L；营养液Ⅱ为pH 5.2；培养条件为控制温度为23～25℃，光照强度为2300～2500Lx，光照时间为12h/d；
(2)生根培养基的配制及分瓶
按照营养液Ⅰ的组分配比配制营养液Ⅰ，向营养液Ⅰ中加入组分量的琼脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液将营养液Ⅰ的pH值调节至5.2，每瓶培养基中加入2g珍珠岩，将营养液Ⅰ分瓶灌装得到培养基，完毕后在压力为1.05kg/cm2、温度121℃下进行灭菌20分钟处理；
(3)生根培养
将步骤(1)中增殖培养基中长度大于3cm的组培苗接种于步骤(2)灭菌处理后的培养基中培养，控制温度为24～26℃，光照强度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d。
采用上述培养基及培养方法，培植蓝莓组培苗30d的生根率为93％。
实施例2：
本实施例的蓝莓组培苗生根的培养基包括营养液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，营养液Ⅰ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅰ包含以下组分及含量：
(NH4)2SO4 375mg/L、K2SO4 445mg/L、KH2PO4 165mg/L、Ca(NO3)2.4H2O 145mg/L、MgSO4.7H2O 175mg/L、FeSO4·7H2O 27mg/L、EDTA·Na2 37mg/L、ZnSO4·7H2O 4mg/L、MnSO4·H2O 8mg/L、CuSO4.5H2O 0.05mg/L、Na2MoO4.2H2O 0.05mg/L、H3BO3 6mg/L、VB10.5mg/L、VB60.2mg/L、VC0.1mg/L、白糖20g/L；该营养液Ⅰ的pH值为5.3；
支持物Ⅰ为珍珠岩和琼脂，珍珠岩在上述营养液Ⅰ中的含量为55g/L，琼脂在上述营养液Ⅰ中的含量为4g/L；
激素为IBA，该激素在营养液Ⅰ中的含量为0.05mg/L。
本实施例中使用上述培养基的蓝莓组培苗生根的培养方法包括以下步骤：
(1)组培苗的培植
在增殖培养基中培养蓝莓组培苗；该增殖培养基包括营养液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，营养液Ⅱ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅱ为WPM基本培养基；支持物Ⅱ为琼脂，该琼脂在营养液Ⅱ中的含量为6g/L；激素为ZT，该激素在营养液Ⅱ中的含量为0.2mg/L；pH 5.3。培养条件为控制温度为22～25℃，光照强度为2000～2300Lx，光照时间为13h/d；
(2)生根培养基的配制及分瓶
按照营养液Ⅰ的组分配比配制营养液Ⅰ，向营养液Ⅰ中加入组分量的琼脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液将营养液Ⅰ的pH值调节至5.3，每瓶培养基中加入1.8g珍珠岩，将营养液Ⅰ分瓶灌装得到培养基，完毕后在压力为1.05kg/cm2、温度121℃下进行灭菌20分钟处理；
(3)生根培养
将步骤(1)中增殖培养基中长度大于3cm的组培苗接种于步骤(2)灭菌处理后的培养基中培养，控制温度为22～25℃，光照强度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d。
采用上述培养基及培养方法，培植蓝莓组培苗30d的生根率为90％。
实施例3：
本实施例的蓝莓组培苗生根的培养基包括营养液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，营养液Ⅰ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅰ包含以下组分及含量：
(NH4)2SO4 385mg/L、K2SO4 455mg/L、KH2PO4 175mg/L、Ca(NO3)2.4H2O 155mg/L、MgSO4.7H2O185mg/L、FeSO4·7H2O28mg/L、EDTA·Na238mg/L、ZnSO4·7H2O 4.5mg/L、MnSO4·H2O9mg/L、CuSO4.5H2O 0.15mg/L、Na2MoO4.2H2O 0.1mg/L、H3BO3 6.5mg/L、VB11.5mg/L、VB60.6mg/L、VC0.3mg/L、白糖22g/L；该营养液Ⅰ的pH值为5.5；
支持物Ⅰ为珍珠岩和琼脂，珍珠岩在上述营养液Ⅰ中的含量为65g/L，琼脂在上述营养液Ⅰ中的含量为3g/L；
激素为IBA，该激素在营养液Ⅰ中的含量为0.5mg/L。
本实施例中使用上述培养基的蓝莓组培苗生根的培养方法包括以下步骤：
(1)组培苗的培植
在增殖培养基中培养蓝莓组培苗；该增殖培养基包括营养液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，营养液Ⅱ采用蒸馏水配制，该营养液Ⅱ为WPM基本培养基，其中白糖含量30g/L；支持物Ⅱ为琼脂，该琼脂在营养液Ⅱ中的含量为8g/L；激素为ZT，该激素在营养液Ⅱ中的含量为1.0mg/L；pH 5.5；培养条件为控制温度为25～27℃，光照强度为2000～2300Lx，光照时间为14h/d；
(2)生根培养基的配制及分瓶
按照营养液Ⅰ的组分配比配制营养液Ⅰ，向营养液Ⅰ中加入组分量的琼脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液将营养液Ⅰ的pH值调节至5.5，每瓶培养基中加入2.2g珍珠岩，将营养液Ⅰ分瓶灌装得到培养基，完毕后在压力为1.05kg/cm2、温度121℃下进行灭菌20分钟处理；
(3)生根培养
将步骤(1)中增殖培养基中长度大于3cm的组培苗接种于步骤(2)灭菌处理后的培养基中培养，控制温度为23～25℃，光照强度为2400～2500Lx，光照时间为13h/d；
采用上述培养基及培养方法，培植蓝莓组培苗30d的生根率为91％。
对比例：
本对比例的蓝莓组培苗生根的培养基包括1/2WPM基本培养基，其中白糖含量为20g/L、琼脂7g/L、激素IBA0.2mg/L，pH 5.2。
本对比例中使用上述培养基的蓝莓组培苗生根的培养方法包括以下步骤：
(1)组培苗的培植
在增殖培养基中培养蓝莓组培苗；该增殖培养基组分为WPM基本培养基，其中白糖30g/L、琼脂7g/L，激素ZT 0.5mg/L，pH 5.2；培养条件为控制温度为23～25℃，光照强度为2300～2500Lx，光照时间为12h/d；
(2)生根培养基的配制及分瓶
培养基组分为1/2WPM基本培养基，其中白糖20g/L、琼脂7g/L、激素IBA0.2mg/L；用NaOH或HCl溶液将培养基溶液的pH值调节至5.2，分瓶灌装得到培养基，完毕后在压力为1.05kg/cm2、温度121℃下进行灭菌20分钟处理；
(3)生根培养
将步骤(1)中增殖培养基中长度大于3cm的组培苗接种于步骤(2)灭菌处理后的培养基中培养，控制温度为24～26℃，光照强度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d。
采用上述培养基及培养方法，培植蓝莓组培苗30d的生根率为20％左右。
通过对比本发明实施例与对比例的培养结果可以看出，本实施例的培养基相较于现有技术而言，对蓝莓组培苗生根的针对性强、适应性好，培植蓝莓组培苗的生根率高。