一种预防大棚西瓜苗重茬根腐病的益生菌菌剂制备的制作方法

本发明涉及农业微生物益生菌剂，特别是指一种能够预防大棚西瓜苗重茬根腐病的益生菌剂制备方法。

背景技术：

在大棚果蔬种植效益高，成为新时期经济效益较好的一个产业。但由于大棚土壤施用大量化肥、农药，使得土壤微生物菌群结构失衡，土壤微生物系统受到严重破坏，再加上经济利益的驱使重茬种植普遍盛行，更使得土壤生态系统难以自我修复。近些年，大棚蔬菜的种植中各种病害、虫害增加，尤其是根腐病等极易发生，都是土壤生态系统遭受破坏的典型症状。为了改变这种现状，就必须从修复土壤生态系统入手，增加土壤中的有益菌群，从而抑制那些容易感染植株病害的细菌和真菌生长。采用外加多菌种联合的技术方法，达到修复土壤生态系统，防止根腐病等重茬病，同时促进根生长，松土壮苗。复合益生菌剂还具有降解农药、化肥残留污染的作用。菌剂经发酵工程完成后有效活菌数(cfu)每毫升在100亿以上即10×10⁸cfu/mL。通过复合微生物菌剂预防大棚西瓜重茬病益根生菌菌剂及其高密度、高活性的生产工艺还未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于开发一种高密度、高活性、施用方法便捷的预防大棚西瓜重茬根腐病的益生菌菌剂制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下。

一种预防大棚西瓜重茬根腐病的复合益生菌剂制备的方法，所述方法包括以下制备步骤：

采用枯草芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、泾阳链霉菌（Bacillus amyloliquefaciens）制备益生菌复合菌剂。其菌种配比及菌剂制备方法如下：

菌剂的配方。

本发明的菌剂的配方为：枯草芽孢杆菌20%～25%，地衣芽孢杆菌20%～25%，巨大芽孢杆菌20%～25%，解淀粉芽孢杆菌20%～25%，泾阳链霉菌15%～20%。

菌剂的制备与使用方法。

（1）接种。

将上述菌种分别接种斜面，培养温度30～37℃,培养时间2-4d，然后分别加入到无菌水中，振荡30分钟，待均匀后用血球计数板计数，菌液中菌数含量分别达到10⁸个/mL。

（2）一级菌种液培养制备。

将上诉5种菌液分别放入装有培养基的三角瓶中，三角瓶放置在摇床内，在30℃的条件下培养48～72小时，使每只三角瓶中菌数含量达到10⁸个/mL。

（3）二级菌液培养。

分别将5种菌种液接种到三角瓶培养基中，接种量1%，三角瓶放置在摇床内，在30℃的条件下培养48～72小时，使菌数含量达到10⁹ cfu /mL以上。最后将五种菌剂按照上述菌种配比混合。即得益生菌复合菌剂。

作为优选，上述菌种培养基为：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的培养基为蛋白胨 50g、牛肉膏 300g、NaCl 50g、琼脂粉150g，蒸馏水 10L；泾阳链霉菌的培养基为KNO₃ 10g、可溶性淀粉200g、K₂HPO₄ 5g、MgSO₄.7H₂O 5g、NaCl 5g、FeSO₄ 0.1g、琼脂粉200g、蒸馏水10L。

（4）稀释使用。

将益生菌复合菌剂稀释100～500倍，蘸根、浇灌。

本发明具有如下优点及有益效果。

富含光合细菌、固氮菌、解磷菌、解钾菌，可固定空气中的氮，分解土壤中难溶性磷、钾化合物，提高作物对土壤氮、磷、钾养分的利用率；同时含有改良土壤结构、调节土壤酸碱性的有益微生物菌群，可促进根系及根际有益微生物菌群的生长，进而增强作物抗逆性及抗病虫害能力。

具体实施方式

下面，结合实施例对本发明做进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护之中。

实施例1。

将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和泾阳链霉菌分别单独在营养液中进行培养，当发酵密度达到10⁸ cfu/ml以上时，按照枯草芽孢杆菌20份，地衣芽孢杆菌20份，巨大芽孢杆菌25份，解淀粉芽孢杆菌25份，泾阳链霉菌20份的比例进行混合，配制成复合益生菌剂制。

实施例2。

将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和泾阳链霉菌分别单独在营养液中进行培养，当发酵密度达到10⁸ cfu/ml以上时，按照枯草芽孢杆菌25份，地衣芽孢杆菌25份，巨大芽孢杆菌20份，解淀粉芽孢杆菌20份，泾阳链霉菌15份的比例进行混合，配制成复合益生菌剂制。

实施例3。

将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和泾阳链霉菌分别单独在营养液中进行培养，当发酵密度达到10⁸ cfu/ml以上时，按照枯草芽孢杆菌25份，地衣芽孢杆菌20份，巨大芽孢杆菌25份，解淀粉芽孢杆菌20份，泾阳链霉菌15份的比例进行混合，配制成复合益生菌剂制。

应用实例1。

在青岛平度市明村镇育苗大棚中，在1.5m×20m育苗床划分4块小区，各播种西瓜种子200颗，播种时开始施例1制备的菌液0、2、4、6kg稀释100倍后，分别在第1、第10、第15、第25和第30天平均喷洒施入，按常规要求进行管理，在施菌液量1、2、4kg的条件下，30天后的收获健康无西瓜苗比例分别较对照的高8.1％、9.6％和11.5％。

应用实例2。

在青岛平度市明村镇育苗大棚中，在1.5m×20m育苗床划分4块小区，各播种西红柿种子200颗，播种时开始施例3制备的菌液0、2、4、6kg稀释500倍后，分别在第1、第10、第15、第25和第30天平均喷洒施入，按常规要求进行管理，在施菌液量1、2、4kg的条件下，30天后的收获健康西瓜苗比例分别较对照的高7.5％、9.1％和10.7％。