本发明属于温度决定型性别决定动物的性别分化和性别调控领域，特别是涉及一种可获得高孵化率的全雌中华鳖的孵化方法。
背景技术：
中华鳖(Trionyx sinensis)隶属爬行纲(Reptilia)、龟鳖目(Testudinata)、鳖科(Trionychidae)、鳖属(Pelodiscus)，是我国名贵的食用水产动物，其营养丰富可以入药，在国内外市场上十分畅销。中华鳖属于温度性别决定型动物，它的性别取决于孵化过程中某一特定时期(温度敏感期)的孵化温度，在此期间高温孵化会产生较多雄性鳖苗，反之产生较多雌性鳖苗。由于雄性中华鳖生长速度快，食用价值高，雄性鳖苗很受肉鳖养殖企业的欢迎；而对于种苗生产企业而言，由于中华鳖种鳖在繁殖期间雌雄比越大，产卵量越大，雌鳖的数量决定了该企业种苗的产量，因此，中华鳖的定性育种技术备受关注。
国内外关于中华鳖的发明专利已有一些报道，主要涉及提高中华鳖产卵量及长卵质量的养殖方法(中国专利CN 103918605)，纯种繁育方法(中国专利CN 103843722A)和性别控制方法(中国专利CN 102988986A、CN 102487883A)。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种可获得高孵化率的全雌中华鳖的孵化方法。
本发明所需解决的技术问题是：
(1)精准定性育种；
(2)设置最佳孵化条件，在适宜温度下进行孵化，获得全雌性鳖苗的情况下，孵化率高于98％。
本发明包括以下步骤：
1)在中华鳖的繁殖季节，在孵化箱底部铺第一层孵化基质，受精卵动物极向上平放在第一层孵化基质上，再覆盖第二层孵化基质；
2)将孵化箱置于孵化室的置物架上，保持孵化温度至龟苗出壳。
在步骤1)中，所述孵化箱可采用塑料孵化箱，最好为敞开式长方形塑料孵化箱；所述第一层孵化基质的组成按质量百分比可为蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第一层孵化基质的厚度可为3～5cm，优选3.5cm，孵化介质含水量控制在5％～7％，介质含水量在孵化初期为5％，孵化中期为6％，孵化后期为7％；所述第二层孵化基质的组成按质量百分比可为蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二层孵化基质的厚度可为1.5～2.5cm，优选2cm；所述受精卵的间距可为1～1.5cm；所述第一层孵化基质和第二层孵化基质在使用前，最好在阳光下充分暴晒2～3天或用紫外线消毒。
在步骤2)中，所述孵化室内的温度和湿度最好按以下方法控制：从开始孵化到胚胎发育结束，孵化室内的温度控制在29℃，相对湿度孵化初期(14期以前)控制在65％；孵化介质的含水量6％，从胚胎发育14到21期，孵化箱中的相对湿度逐渐提高并保持在80％～85％，此时孵化介质的含水量调整到7％，孵化到21期以后，孵化室内湿度提高到90％直到孵化结束，孵化介质含水量提高到8％。从14期开始采用17β-雌二醇(E2)处理受精卵，获得全雌性鳖苗。
本发明根据发育时段的不同，对室内湿度和孵化介质的湿度进行相应调整，这样可以大大降低霉蛋发生率，使得中华鳖的孵化率显著提高，本发明可以有效提高雌性鳖苗的比例(由40％提高到100％)，同时保持孵化率98％以上。
本发明在适温下孵化38～45天左右可以孵出体质健壮、雌性特征明显的雌中华鳖苗，孵化率达到98％以上。
本发明首次提出在中华鳖孵化过程中，在其适宜孵化温度(29℃)条件下进行孵化，在其性别分化过程中采用一次诱导法获得全雌中华鳖稚鳖，孵化率高于98％的孵化方法。
运用本发明进行中华鳖定性育种的主要优点在于：
(1)精准定性育种；
(2)在最佳孵化条件下进行孵化，孵化率高于98％。
具体实施方式
实施例1：在中华鳖产卵季节(5～7月)采集中华鳖受精卵40枚进行孵化，受精卵的动物极向上平放在孵化基质上，受精卵间距保持在1.2cm左右，其上用大于等于1.5cm厚湿度相同的孵化基质覆盖；将孵化箱放置于可控温、控湿的孵化室内，孵化温度控制在29±0.1℃。
孵化初期，孵化室的相对湿度控制在65％，孵化中期相对湿度上调至80％～85％，孵化后期相对湿度控制在85％～90％。在塑料孵化箱内铺垫4cm的第一层孵化基质(70％蛭石+10％河砂+20％粘土粒)，基质含水量5％～7％的孵化基质；介质含水量在孵化初期为5％，孵化中期为6％，孵化后期为7％；所述第二层孵化基质的组成按质量百分比可为蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二层孵化基质的厚度可为1.5～2.5cm，优选2cm；所述受精卵的间距可为1～1.5cm；所述第一层孵化基质和第二层孵化基质在使用前，最好在阳光下充分暴晒2～3天或用紫外线消毒。2)将孵化箱置于孵化室的置物架上，孵化室内的温度控制在29℃，相对湿度控制在65％～90％，保持孵化温度至鳖苗出壳。在孵化前期、中期和后期控温箱中湿度的控制同前文中所述。本方法孵化周期为38～45天，孵化率98％，鳖苗雌雄比为4︰6。
实施例2：在中华鳖产卵季节(5～7月)采集中华鳖受精卵40枚进行孵化，受精卵的动物极向上平放在孵化基质上，受精卵间距保持在1.2cm左右，其上用大于等于1.5cm厚湿度相同的孵化基质覆盖；将孵化箱放置于可控温、控湿的孵化室内，孵化温度控制在29±0.1℃。
孵化初期，孵化室的相对湿度控制在65％，孵化中期相对湿度上调至80％～85％，孵化后期相对湿度控制在85％～90％。在塑料孵化箱内铺垫5cm的第一层孵化基质(70％蛭石+10％河砂+20％粘土粒)，基质含水量5％～7％的孵化基质；介质含水量在孵化初期为5％，孵化中期为6％，孵化后期为7％；所述第二层孵化基质的组成按质量百分比可为蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二层孵化基质的厚度可为1.5～2.5cm，优选2cm；所述受精卵的间距可为1～1.5cm；所述第一层孵化基质和第二层孵化基质在使用前，最好在阳光下充分暴晒2～3天或用紫外线消毒。2)将孵化箱置于孵化室的置物架上，孵化室内的温度控制在29℃，相对湿度控制在65％～90％，保持孵化温度至鳖苗出壳。在孵化前期、中期和后期控温箱中湿度的控制同前文中所述。
在胚胎发育达到14期，采用25μg/μl的17β-雌二醇(E2)处理受精卵，采用本方法孵化周期为38～45天，孵化率98％，获得雌性鳖苗的比例达到97％。
实施例3：在中华鳖产卵季节(5～7月)采集中华鳖受精卵40枚进行孵化，受精卵的动物极向上平放在孵化基质上，受精卵间距保持在1.2cm左右，其上用大于等于1.5cm厚湿度相同的孵化基质覆盖；将孵化箱放置于可控温、控湿的孵化室内，孵化温度控制在29±0.1℃。
孵化初期，孵化室的相对湿度控制在65％，孵化中期相对湿度上调至80％～85％，孵化后期相对湿度控制在85％～90％。在塑料孵化箱内铺垫4cm的第一层孵化基质(70％蛭石+10％河砂+20％粘土粒)，基质含水量5％～7％的孵化基质；介质含水量在孵化初期为5％，孵化中期为6％，孵化后期为7％；所述第二层孵化基质的组成按质量百分比可为蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二层孵化基质的厚度可为1.5～2.5cm，优选2cm；所述受精卵的间距可为1～1.5cm；所述第一层孵化基质和第二层孵化基质在使用前，最好在阳光下充分暴晒2～3天或用紫外线消毒。2)将孵化箱置于孵化室的置物架上，孵化室内的温度控制在29℃，相对湿度控制在65％～90％，保持孵化温度至鳖苗出壳。在孵化前期、中期和后期控温箱中湿度的控制同前文中所述。
在胚胎发育达到14期，采用50ug/ul的17β-雌二醇(E2)处理受精卵，采用本方法孵化周期为38～45天，孵化率98％，获得雌性鳖苗的比例达到100％。