本发明涉及农业
技术领域：
，具体涉及一种鹧鸪茶愈伤组织的培养方法以其培养基。
背景技术：
：鹧鸪茶[Mallotuspeltatus(Geiseler)MullerArgoviensis]也叫山苦茶、毛茶和禾姑茶，系大戟科野桐属植物。鹧鸪茶在海南岛主要分布在文昌、万宁和陵水，也在三亚、乐东、白沙、定安、东方、琼中、保亭和昌江等地有分布，其中以文昌铜鼓岭和万宁东山岭的出产的鹧鸪茶最为有名。此外，在我国广东、云南、广西，以及中印半岛和苏门答腊岛也有野生分布。鹧鸪茶叶圆味甘，是一种奇特的野生茶叶，其叶片等植物体干燥后具有浓郁的零陵香气；冲泡饮用时别具风味、甘冽爽口，被历代文人墨客誉为"灵芝草"。鹧鸪茶是海南具有浓郁地方和民族特色的代茶饮料植物，已成为海南地方茶的一大文化特色。鹧鸪茶具有显著的保健作用和药用功效，是海南重要的民间中药材，利用历史悠久。鹧鸪茶的提取物中富含茶多糖、茶多酚、没食子酸和多酚类等多种有效成分。现代药理学研究表明，鹧鸪茶中的有效成分具有清除氧自由基、抗动脉粥样硬化、促进胆汁分泌、抑制病菌活性、抗疲劳衰老与镇静止痛等功效。另外，作为重要的中药材，海南民间用鹧鸪茶的根治疗牙痛有良好的效果。目前，鹧鸪茶资源的开发利用尚停留在利用野生资源的水平上，产业发展所需的鹧鸪茶人工规模种植和配套栽培技术尚处于空白。亦今为止，海南岛内外或国内外尚没有建立鹧鸪茶产品商业化生产的大规模种植基地，几乎所有市场上流通的鹧鸪茶产品均是直接从野生植物上获取。除了个别农户有零星的庭院式种植外，制作鹧鸪茶产品所需的原材料几乎全部依赖掠夺式地从野生植株上获取叶片。受到经济利益的驱使，目前鹧鸪茶野生资源已经逐年减少。由于鹧鸪茶的市场需求量较大，且随着“海南国际旅游岛”的发展，鹧鸪茶原叶的需求量也将会急剧增加。鹧鸪茶是雌雄异株植物，在自然居群中以雄株多而雌株少为普遍现象。自然授粉条件下，鹧鸪茶的平均结实率(成熟种子/雌花数)不足5％，因此，行业内将目光转向组织培养，但是鹧鸪茶的组织培养一直是行业内的瓶颈，因为外植体培养极易发生褐变，而无法取得愈伤材料。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种用于培养鹧鸪茶愈伤组织的培养基以及采用该培养基培养鹧鸪茶愈伤组织的方法，愈伤率高，填补了鹧鸪茶组织培养的空白。本发明的第一个方面是提供一种用于培养鹧鸪茶愈伤组织的培养基，所述培养基含有两种激素组分，第一激素组分为萘乙酸，其含量以所述培养基为基准为0.1-0.5mg/L，第二激素组分为激动素、2,4-D或6-苄氨基腺嘌呤，其以所述培养基为基准含量为0.5-1.5mg/L。优选地，第一激素组分为萘乙酸，其含量为0.3-0.5mg/L。进一步优选地，第一激素组分为萘乙酸，其含量为0.3mg/L。优选地，第二激素组分含量为1-1.5mg/L。进一步优选地，第二激素组分为2,4-D，其含量为1mg/L；或者第二激素组分为激动素，其含量为1.5mg/L；或者第二激素组分为6-苄氨基腺嘌呤，其含量为1.5mg/L。优选地，所述培养基采用MS培养基为基本培养基，添加所述两种激素。优选地，所述培养基还添加蔗糖。蔗糖作为培养基内的碳源和能源外，并维持培养基的渗透压也起重要作用。本领域技术人员可根据经验酌量添加，本发明对蔗糖在培养基中的含量不作特别限定。一般地，蔗糖在培养基中的含量为20-40g/L，在本发明的一个实施方式中，其含量为30g/L。优选地，所述培养基还添加琼脂。琼脂作为凝固剂来将液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基。本领域技术人员可根据经验酌量添加使液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基即可，本发明对琼脂在培养基中的含量不作特别限定。一般地，琼脂在培养基中的含量为5-10g/L，在本发明的一个实施方式中，其含量为7.5g/L的蔗糖。其中，所述培养基的pH值5.8-6.2。本发明的第二个方面是提供一种鹧鸪茶愈伤组织的培养方法，取健壮鹧鸪茶无菌苗刚出芽的胚轴，切成小段，接种于本发明第一个方面所述的任意一种培养基上进行诱导培养。本申请发明人为解决现有技术中的不足，反复摸索，成功获得可高效培养鹧鸪茶愈伤组织的培养基，采用该培养基培养鹧鸪茶愈伤组织，愈伤率高，填补了鹧鸪茶组织培养的空白。附图说明图1为本发明培养基对胚轴愈伤组织的诱导结果，其中，A为实施例5的培养基对胚轴愈伤组织的诱导结果,B为实施例15的培养基对胚轴愈伤组织的诱导结果，C为实施例24的培养基对胚轴愈伤组织的诱导结果。图2为实施例24的培养基对胚轴愈伤组织的诱导生长过程，A为培养15天的愈伤生长状态，B为培养30天的愈伤生长状态，C为培养45天的愈伤生长状态，D为培养60天的愈伤生长状态。具体实施方式下面参照附图，结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。实施例1-9(培养基)实施例1-9均采用MS为基本培养基，pH值为5.8-6.2，其中加入30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，并加入激素NAA(萘乙酸)和2,4-D，每个实施例中NAA和2,4-D添加量如表1所示。实施例10-18(培养基)实施例10-18均采用MS为基本培养基，pH值为5.8-6.2，其中加入30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，并加入激素NAA(萘乙酸)和KT(激动素)，每个实施例中NAA和KT添加量如表2所示。实施例19-27(培养基)实施例19-27均采用MS为基本培养基，pH值为5.8-6.2，其中加入30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，并加入激素NAA(萘乙酸)和6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)，每个实施例中NAA和6-BA添加量如表3所示。试验方法1、培养基和培养条件本次试验采用实施例1-27的培养基。培养温度为(25±2)℃，光照时间12h/d，光照强度30-40μmol/m·s。2、无菌苗获得将鹧鸪茶的成熟种子用流水冲洗3h，70％酒精消毒5min，去除种皮至于无菌水中，在超净工作台中用40％过氧化氢进行消毒处理10min，无菌水冲洗3次，将无菌材料接于MS培养基中，培养40d后即可获得鹧鸪茶无菌苗。3、胚轴愈伤组织的诱导选取长势良好一致的鹧鸪茶无菌苗，取其刚出芽的胚轴，将胚轴切成1cm长的小段，接种于实施例1-27的培养基中进行愈伤组织诱导培养，试验采用完全随机设计，每个处理接种60个胚轴，重复3次。30d后统计愈伤组织平均诱导率和愈伤组织长势。4、数据处理采用Excel软件统计数据，使用SPSS18.0软件进行数据处理和统计分析。5、结果与分析5.1不同NAA和2,4-D浓度对胚轴愈伤组织诱导的影响在不同NAA和2,4-D浓度对胚轴愈伤组织诱导影响的实验中，通过添加不同浓度的NAA和2,4-D能够有效的诱导出愈伤组织。通过试验结果(表1)表明，实施例1-9均能够有效的进行愈伤组织诱导，其中出愈伤总数在22-57个之间，平均出愈伤率在0.37-0.95之间。综合考虑胚轴愈伤组织诱导的最佳培养基为实施例5(MS+0.3mg/LNAA+1mg/L2,4-D)(图1A)，出愈伤总数可以达到57个，平均出愈伤率可以达到0.95。表1不同NAA和24-D浓度对胚轴愈伤组织诱导的影响NAA(mg/L)2,4-D(mg/L)接种总数(个)出愈伤总数(个)平均出愈伤率实施例10.10.560240.4实施例20.1160310.52实施例30.11.560220.37实施例40.30.560450.75实施例50.3160570.95实施例60.31.560470.78实施例70.50.560450.75实施例80.5160350.58实施例90.51.560230.385.2不同NAA和KT浓度对胚轴愈伤组织诱导的影响在不同NAA和KT浓度对胚轴愈伤组织诱导影响的实验中，通过添加不同浓度的NAA和KT能够有效的诱导出愈伤组织。通过试验结果(表2)表明，实施例10-18均能够有效的进行愈伤组织诱导，同时各组试验具有显著影响，其中出愈伤总数在21-59个之间，平均出愈伤率在0.35-0.98之间。综合考虑胚轴愈伤组织诱导的最佳培养基为实施例15(MS+0.3mg、LNAA+1.5mg/LKT)(图1B)，出愈伤总数可以达到59个，平均出愈伤率可以达到0.98。表2不同NAA和KT浓度对胚轴愈伤组织诱导的影响NAA(mg/L)KT(mg/L)接种总数(个)出愈伤总数(个)平均出愈伤率实施例100.10.560210.35实施例110.1160350.58实施例120.11.560260.43实施例130.30.560430.72实施例140.3160540.9实施例150.31.560590.98实施例160.50.560410.68实施例170.5160380.63实施例180.51.560340.572.3不同NAA和6-BA浓度对胚轴愈伤组织诱导的影响在不同NAA和6-BA浓度对胚轴愈伤组织诱导影响的实验中，通过添加不同浓度的NAA和6-BA能够有效的诱导出愈伤组织。通过试验结果(表3)表明，实施例19-27均能够有效的进行愈伤组织诱导，同时各组试验具有显著影响，其中出愈伤总数在34-59个之间，平均出愈伤率在0.57-0.98之间。综合考虑胚轴愈伤组织诱导的最佳培养基为实施例24(MS+0.3mg/LNAA+1.5mg/L6-BA)(图1C和图2)，出愈伤总数可以达到59个，平均出愈伤率可以达到0.98。表3不同NAA和6-BA浓度对胚轴愈伤组织诱导的影响以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。当前第1页1 2 3