本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种矾根的叶片组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法。
背景技术：
矾根(heucheramicrantha)又名珊瑚铃，虎耳草科矾根属，喜阳，耐阴，极耐寒，能在零下30℃低温下正常生长，叶色丰富，叶形多变，是优良的彩叶阴生地被植物。观赏价值高，品质优良，具有很高的经济效益，开发利用前景广阔，市场前景极为看好。
矾根的常规繁殖方法是分株繁殖,繁殖量有限,且受季节影响，不能满足市场需求。
关于矾根组织培养的报道较多，但存在以下问题：1）外植体选择单一且局限，相关报道外植体都选择“带顶芽或腋芽的幼嫩茎段”（孙国锋，2007；章志红，2011；陈宏，2011；高燕，2015），还有报道“叶片不能诱导出芽”（王晶，2012）。外植体选择带顶芽或者腋芽的茎段，这种破坏性取样不仅获得外植体数量较少，而且导致母体整个植株被破坏，造成材料浪费；2）相关文献基本培养基均选用ms，激素选用6-ba和naa的不同配比，丛生芽的诱导率较低且容易出现玻璃化，增殖生长的增值倍数一般为8—9，生产周期较长。
技术实现要素：
针对存在的问题，本发明提供一种矾根的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法，通过外植体、基本培养基的选择和合适剂量的激素组合，实现了矾根组织培养中植株的高效再生。该方法操作简单、污染率低、植株再生成功率高，种苗生产周期较短。
一种矾根的组织培养快速繁殖的培养基，它包括
1）芽诱导培养基：ls+6-ba1.0~3.0mg/l+naa0.1~0.3mg/l+
2）增殖培养基：ls+6-ba1.0~3.0mg/l+naa0.1~0.3mg/l；
3）生根培养基：1/2ls+naa0.5~1.5mg/l；
在ls以及1/2ls中，添加蔗糖20～30g/l，琼脂5～8g/l，调节ph5.6～5.8。
一种矾根叶片的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤:
（一）培养基的配制
1）芽诱导培养基：ls+6-ba1.0~3.0mg/l+naa0.1~0.3mg/l；
2）增殖培养基：ls+6-ba0.5~1.0mg/l+naa0.05~0.1mg/l；
3）生根培养基：1/2ls+naa0.5~1.5mg/l；
在ls以及1/2ls中，添加蔗糖20～30g/l，琼脂5～8g/l，调节ph5.6～5.8。
(二)矾根组培苗的培养
1）外植体的选择：选择生长健壮无病斑的矾根1-2年生叶片作为组织培养的外植体，流水冲洗1~2h，然后超净工作台上用无菌水冲洗干净，用70%酒精消毒20-40s，，0.1%升汞溶液浸泡进行灭菌6-8min，然后用无菌水冲洗多次，备用；
2）丛生芽的诱导培养：在超净工作台上将步骤1）中准备的外植体切成1平方厘米的小块，接种到芽诱导培养基中进行培养；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500lx，光照时间12h/d；
3)将步骤2）中的诱导生成的丛生芽接种到增殖培养基上进行培养长出小苗；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500lx，光照时间12h/d；
4)待步骤3）中的小苗长出的长到3.0~5.0cm高时，接种到生根培养基中；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500lx，光照时间12h/d；
5)待步骤4）中的小苗长到高4~8cm且具有至少5条长于2cm的根时，得到可出瓶种植的种苗。
（三）组培苗的炼苗与移栽
将步骤5）所述的种苗带瓶一起移至温室大棚，先去盖放置2-5天，出瓶并洗净根部培养基，移栽入泥炭∶珍珠岩按体积3：1的混合基质中，管理至成品苗，出圃。
本发明的有益效果
一、本发明操作步骤简单，外植体选择1-2年生健康幼嫩叶片，外植体来源广，取样不会对母本植株造成不可逆的伤害，最大限度保证母本植株生长不受影响，提高生长效率，降低了污染率，为后续增殖提供了健壮的幼苗；
二、本发明通过采用ls培养基配方，结合不同的激素配比和浓度调节，提高了丛生芽诱导效率（每个外植体8-10个），提高了增殖倍率（增殖系数达到15-20倍)，缩短了生长周期(丛生芽诱导30-40天，增殖生长15-20天，生根生长15-20天)；也进一步提高了种苗的质量，使移栽成活率高达98%以上。
三、采用本发明的方法，一般仅需60-80天即可得到种苗，是一种不受季节等因素影响，高效、快速提供优质矾根种苗的方法，可以加速良种推广速度，提高田间品种种植产量。
四、本发明建立的矾根组织培养体系将为工厂化育苗提供理论依据和技术支撑，方法操作简单、污染率低、植株再生成功率高。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1
一种矾根叶片的组织培养快速繁殖的方法，依次进行一下步骤：
（一）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
1）基本培养基：丛生芽诱导培养、增殖、壮苗的培养基均采用ls基本培养基，生根培养采用1/2ls。
2）丛生芽诱导培养基为：ls+6-ba2.0mg/l+naa0.2mg/l+蔗糖20g/l+琼脂8g/l，ph5.6～5.8
3）增殖、壮苗培养基为：ls+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l+蔗糖25g/l+琼脂5g/l，ph5.6～5.8。
4）生根培养基为：1/2ls+naa0.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂5g/l，ph5.6～5.8；
(二)矾根组培苗的培养
1）外植体的选择：选择生长健壮无病斑的矾根1-2年生叶片作为组织培养的外植体，流水冲洗1~2h，然后超净工作台上用无菌水冲洗干净，用70%酒精消毒20-40s，0.1%升汞溶液浸泡进行灭菌6-8min，然后用无菌水冲洗多次，备用；
2）丛生芽的诱导培养：在超净工作台上将步骤1）中准备的外植体切成1平方厘米左右的小块，接种到芽诱导培养基中进行培养；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500lx，光照时间12h/d；经过30—40d，一个接种的外植体平均可诱导出8—10个丛生芽；
3)将步骤2）中的诱导生成的丛生芽接种到增殖培养基上进行培养长出小苗；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500lx，光照时间12h/d；培养时间：15—20d，增殖倍率15—20；
4)待步骤3）中的小苗长出的长到3.0-5.0cm高时，接种到生根培养基中；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500lx，光照时间12h/d；培养时间：15—20d，生根率100%；
5)待步骤4）中的小苗长到高4-8cm且具有至少5条长于2cm的根时，得到可出瓶种植的种苗。
（三）组培苗的炼苗与移栽
将步骤5）所述的种苗带瓶一起移至温室大棚，先去盖放置2-5天，出瓶并洗净根部培养基，移栽入泥炭∶珍珠岩按体积3：1的混合基质中，管理至成品苗，出圃。
实施例2
本例中，步骤（一）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
2）丛生芽诱导培养基为：ls+6-ba3.0mg/l+naa0.2mg/l+蔗糖20g/l+琼脂8g/l，ph5.6～5.8
3）增殖、壮苗培养基为：ls+6-ba0.5mg/l+naa0.1mg/l+蔗糖25g/l+琼脂5g/l，ph5.6～5.8。
4）生根培养基为：1/2ls+naa1.0mg/l+蔗糖30g/l+琼脂5g/l，ph5.6～5.8；
其余步骤、工艺同实施例1。
实施例3
本例中，步骤（一）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
2）丛生芽诱导培养基为：ls+6-ba2.0mg/l+naa0.1mg/l+蔗糖20g/l+琼脂8g/l，ph5.6～5.8
3）增殖、壮苗培养基为：ls+6-ba1.0mg/l+naa0.2mg/l+蔗糖25g/l+琼脂5g/l，ph5.6～5.8。
4）生根培养基为：1/2ls+naa1.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂5g/l，ph5.6～5.8；
其余步骤、工艺同实施例1。