本发明涉及植物外植体培养领域，特别涉及一种铁皮石斛外植体的培养方法。
背景技术：
铁皮石斛为兰科石斛，属多年生附生草本植物，又名黑节草，是一种珍贵的药用植物，因其表皮呈铁绿色而得名，自古以来铁皮石斛就被认为是滋阴补益的珍品。
铁皮石斛在《神农本草经》中列为上品，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效，用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症。铁皮石斛富含多糖等有效成分，对咽喉疾病、肠胃疾病、白内障、糖尿病具有显著疗效，还具有抗肿瘤，抗衰老，增强人体免疫力及扩张血管等作用。除药用价值外，国内还用来生产保健品，沿海发达地区现在还流行用铁皮石斛制成高档茶、饮料等；以铁皮石斛加工而成的“西枫斗”，国际市场价格为每公斤1300美元，“龙头凤尾型铁皮枫斗”国际市场价格为每公斤3000美元，铁皮石斛用途广，需量大，价格高，据有关部门调查算测，铁皮石斛全国年需求量达30000吨以上。
今十几年来，随着研究的深入发现它含有石斛多糖、石斛碱、石斛苷、石斛胺和石斛次碱等，以及18种氨基酸和多种微量元素等物质，具有显著提高免疫力功能，抑制肿瘤生长和扩张肠系膜动脉血管等作用，颇具市场开发价值。
铁皮枫斗是将铁皮石斛的茎利用一定的加工工艺精制而成，主要讲茎间比较矮小、茎肉质粗壮、质地柔软富含膏滋黏液的植株，经过烘干后，用手工双向扭曲而成。到2006年底，全国有铁皮石斛为原料的药品2个，保健食品79个；剂型有颗粒剂、胶囊剂、软胶囊、口服液、丸剂、茶、饮料、口含片等。
中国野生药用植物据统计在5000种以上，其中较常用的有500多种，依靠人工栽培的有250多种。传统的获取中草药的方法是依靠大量的采摘野生植物资源为来源，而野生药用植物资源有限，当采摘量超过其自然繁殖的再生能力时，必然导致该物种遭受破坏甚至会面临濒危。同时，随着生态环境的日益恶化，也必将进一步导致部分药用植物资源的匮乏。
铁皮石斛野生于我国秦岭和长江流域以南，海拔500～1000m的岩溶峰谷，气候高温、高湿地区。在国内主要分布于云南、安徽、贵州、浙江、江西、广西、广东等省区。以云南、广西的“喀斯特”地貌区为主产区。其自然生长于高山峻岭的悬崖壁和岩石缝之间，对生长条件要求十分苛刻。再说，铁皮石斛种子极小，无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，自然繁殖率极低，加上人为过渡采集和自然环境破坏，目前我国野生铁皮石斛资源濒临灭绝，已被列为国家二级保护植物。
通过组织培养可以解决野生资源濒危的难题。组织培养是实现快速繁殖、人工栽培的最佳技术手段，一般采用野生铁皮石斛植株，选择合适的外植体接种到培养基上进行细胞培养，以达到无激素、无污染，克服地域、气候等条件的制约，在保证药效的前提下增加市场供应量，满足人们的健康需求。
其中在铁皮石斛外植体的丛生芽诱导培植过程中，其培养基的设置和培养条件尤为重要，如何使得铁皮石斛外植体的培养更高效，丛生芽生长情况更好，成为一个急切解决的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种铁皮石斛外植体的培养方法。
本发明所采取的技术方案是：一种铁皮石斛外植体的培养方法，其包括如下步骤：
1)以1/2ms培养基作为基本培养基，添加植物激素复配物，得诱导培养基，灭菌处理，待用；
2)取铁皮石斛外植体置于步骤1)的诱导培养基中，在温度为23～27℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为12h/d，相对湿度为55～65％的培养条件下进行铁皮石斛丛生芽诱导培养；
其中所述植物激素复配物由2mg/l的6-ba和0.5mg/l的naa混合复配而成。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述1/2ms培养基中的琼脂含量为0.9％，蔗糖浓度为3％，ph值为5.8～5.9。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述灭菌处理为在121℃、105pa的条件下灭菌20min。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)所述的铁皮石斛丛生芽诱导培养的培养周期为2个月。
本发明的有益效果是：本发明在基本培养基中添加了特定的植物激素复配物，使其对铁皮石斛外植体具有优异的丛生芽增殖作用，并通过限定培养条件，使得培养出的铁皮石斛丛生芽表现出健壮、饱满的良好生长状况。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
实施例1
一种铁皮石斛外植体的培养方法，其包括如下步骤：
1)以1/2ms培养基作为基本培养基，其中的琼脂含量为0.9％，蔗糖浓度为3％，ph值为5.8，添加由2mg/l的6-ba和0.5mg/l的naa混合复配而成的植物激素复配物，得诱导培养基，并在121℃、105pa的条件下灭菌处理20min，待用；
2)取5个经常规处理的铁皮石斛外植体置于步骤1)的诱导培养基中，在温度为23℃，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d，相对湿度为60％的培养条件下进行铁皮石斛丛生芽诱导培养2个月。
每隔三天对实施例1中的铁皮石斛外植体进行观察，并记录其丛生芽的诱导增殖情况，其数据如表1所示。
实施例2
一种铁皮石斛外植体的培养方法，其包括如下步骤：
1)以1/2ms培养基作为基本培养基，其中的琼脂含量为0.9％，蔗糖浓度为3％，ph值为5.9，添加由2mg/l的6-ba和0.5mg/l的naa混合复配而成的植物激素复配物，得诱导培养基，并在121℃、105pa的条件下灭菌处理20min，待用；
2)取5个经常规处理的铁皮石斛外植体置于步骤1)的诱导培养基中，在温度为27℃，光照强度为1500lx，光照时间为12h/d，相对湿度为55％的培养条件下进行铁皮石斛丛生芽诱导培养2个月。
每隔三天对实施例2中的铁皮石斛外植体进行观察，并记录其丛生芽的诱导增殖情况，其数据如表1所示。
实施例3
一种铁皮石斛外植体的培养方法，其包括如下步骤：
1)以1/2ms培养基作为基本培养基，其中的琼脂含量为0.9％，蔗糖浓度为3％，ph值为5.8，添加由2mg/l的6-ba和0.5mg/l的naa混合复配而成的植物激素复配物，得诱导培养基，并在121℃、105pa的条件下灭菌处理20min，待用；
2)取5个经常规处理的铁皮石斛外植体置于步骤1)的诱导培养基中，在温度为25℃，光照强度为1800lx，光照时间为12h/d，相对湿度为65％的培养条件下进行铁皮石斛丛生芽诱导培养2个月。
每隔三天对实施例3中的铁皮石斛外植体进行观察，并记录其丛生芽的诱导增殖情况，其数据如表1所示。
实施例4：外植体丛生芽增殖情况
表1数据为实施例1～3中铁皮石斛丛生芽的培养情况，可知本发明的培养方法对铁皮石斛丛生芽的生长具有高效的促进作用。
表1各实施例培养情况
上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。