一种促进穗冠花愈伤组织生长的培养基的制作方法

文档序号:13222347阅读:486来源:国知局
本发明属于生物
技术领域
,具体涉及一种促进穗冠花愈伤组织生长的培养基。
背景技术
:植物中含有许多对人类有益的(药用或食用)次生代谢物,如黄酮类化合物,红芪、银杏、草珊瑚、水母雪莲等都是黄酮类化合物为主要活性成分的。但是植物的次生代谢物在天然栽培植株中含量相对较少,直接提取不仅成本大,而且会造成植物资源的掠夺性开发,破坏生态平衡和植物资源的多样性。因此,利用细胞生物工程技术,来大规模生产次生代谢物有效成分,就成为一个重要的新思路。植物次生代谢产物细胞工程,是最近二十年内快速发展起来的,已成为生物工程技术的热点,并与基因工程和快繁技术一起,成为当前植物生物科技的三大主流。植物次生代谢产物细胞工程利用植物细胞体系(培养细胞),采用先进的生物技术,提供了各种次生代谢产物(医药、食品、色素、化工产品)。植物次生代谢产物细胞工程的理论基础是植物细胞的全能性。在适宜的培养条件下,所有生活的植物细胞都具有形态发育上的全能性和内在的生理代谢过程的全能性。利用植物组织培养技术建立细胞体系,并不是最终的目的,而是筛选出高产稳定的细胞系,并对影响产物积累的物理、化学因素进行调控,批量生产有效成分。目前,人们已经成功地筛选出一些含有效次生代谢物的细胞系,如产紫草色素的紫草细胞系等,植物细胞培养生产黄酮类化合物的例子很多:如水母雪莲,产花青素玫瑰茄等。已有数种经济作物的细胞工厂化生产进入商品阶段。技术实现要素:本发明以穗冠花作为次生代谢物的细胞系,提供了一种促进愈伤组织生长的培养基。本发明的培养基营养丰富,配比合理,能够促进穗冠花愈伤组织的生长,进而促进穗冠花愈伤组织中次生代谢物的形成,适于工业化大规模培养愈伤组织以获得所需的次生代谢物。本发明是通过以下技术方案实现的:一种促进穗冠花愈伤组织生长的培养基,包括:优选地,所述培养基的ph值为5.6-6.2。优选地,所述kno3和(nh4)2so4的摩尔比为25:2。穗冠花为苋科植物,其叶、茎及穗部呈现红色,色泽鲜艳,花青素苷含量较高。穗冠花红色素具有药用价值,可入药。穗冠花中含有的次生代谢物丰富,对其愈伤组织进行培养有利于获得丰富且所需的次生代谢物。在对穗冠花愈伤组织进行培养时,培养基中氮源的含量对愈伤组织的生长具有明显的影响。通过调节培养基中氮源的含量,能够实现穗冠花愈伤组织生长的最大化。本发明的有益效果:本发明的培养基配比合理、营养丰富。培养基以kno3和(nh4)2so4作为氮源,通过控制kno3和(nh4)2so4的配比,能够实现穗冠花愈伤组织生长的最大化。此外,本发明的培养基能够促进穗冠花愈伤组织中次生代谢物的形成,适于工业化大规模培养愈伤组织以获得所需的次生代谢物。具体实施方式实施例1一种促进穗冠花愈伤组织生长的培养基,包括:实施例2一种促进穗冠花愈伤组织生长的培养基,包括:实施例3一种促进穗冠花愈伤组织生长的培养基,包括:分别在实施例1-3中的培养基中培养穗冠花下胚轴愈伤组织,具体操作为:取1g色泽鲜艳舒松的新鲜愈伤组织,在超净工作台上用镊子小心地放入培养基中,每16天继代一次。处理愈伤组织接种后第15天,用镊子取出中愈伤组织块进行称重,为每瓶愈伤组织的鲜重;将愈伤组织置于80℃烘干至恒重后进行称重(万分之一电子天平),为每瓶愈伤组织的干重。15天后,取1g鲜重培养的愈伤组织,放入10ml的离心管中,加入5ml1%的盐酸甲醇溶液,在4℃浸泡抽提4小时,持续搅动以使抽提彻底。将抽提的细胞悬浮液离心,将上清液倒入比色杯,在波长为530nm和657nm处测光密度值a,通过以下公式计算花青素苷在530nm处的实际光密度值a校。a校=a530-0.25a657,以a校表示愈伤组织的花青素苷含量。测量结果列在表1中。表1在不同培养中培养后愈伤组织的生长状况培养基鲜重(g)干重(mg)a校(gfw)实施例111.94900.49实施例211.54700.45实施例311.74800.46通过上表可知:本发明的培养基能够明显的促进愈伤组织的生长,并能够够促进愈伤组织中花青素苷的积累,表明本发明的培养基具有良好的应用前景。当前第1页12
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