一种新型便携式控温装置及采用其的猪精液冷冻方法与流程

本发明涉及精液或细胞的冷冻保存领域，尤其适用于猪精液的冷冻保存，具体涉及一种新型便携式空温装置及采用其的猪精液冷冻方法。

背景技术：

猪精液具有一次射精量大但精子密度小、猪精子头部的脂肪含量高、对冷冻解冻过程中的温度变化特别敏感等特点，导致猪精子易受到冷冻、解冻损伤。目前的冷冻程序中，人们采用程序控温仪降低精液温度，使其快速通过危险温区（0~-60℃），并且-5~-25℃是公认的精液冷冻中的高危险温区，一旦出现回温或者冷冻速度过于缓慢，对于精子来说，都是致命性打击。另外，应用程序冷冻仪实现实时控温，对于一些场合来说，成本过大、难以承担。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种新型便携式控温装置及采用其的猪精液冷冻方法，能够在无扰动的情况下连续维持冷冻降温所需温度（-20℃）20min，控温精度范围为±1℃，携带方便且便于运输。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种新型便携式控温装置，包括控温盒、两麦管架、温度计和铁架台，所述控温盒为长方形盒体，所述麦管架为波浪形金属支架，两所述麦管架平行于控温盒的长边间隔设置于控温盒的上方，所述麦管架的两端搭设于控温盒的两宽边上，所述铁架台设于控温盒的侧方，所述温度计通过铁架台悬吊于控温盒的中心处，所述温度计水银球的中心位于麦管架凹槽最低处所在的平面上。

其中，所述控温盒的四个盒壁的顶部为阶梯状内外壁结构，所述外壁比内壁高1.2~1.5cm，所述内壁的厚度为1.5~1.8cm，所述控温盒的内壁面上设有液氮标线，其中，距外壁顶端4cm处为-20℃液氮标线，距外壁顶端0cm处为-10℃液氮标线，距外壁顶端5cm处为-30℃液氮标线。

优选的，所述控温盒为保温泡沫盒，其外径尺寸为长22cm、宽15cm、高10cm，内径尺寸为长16.5cm、宽10.5cm、高6.5cm。

其中，波浪形的所述麦管架上形成多个容置麦管的v形凹槽，所述v形凹槽的槽高为0.8~1.2cm，所述v形凹槽的底端所在平面平行介于外壁上端面和内部上端面之间。

进一步，所述麦管架的端部包括依次连接的最外v形凹槽的侧边、横边和竖边，所述横边与外壁上端面搭接，所述竖边相对于横边折弯于控温盒盒壁的外侧，所述最外v形凹槽的侧边相对于横边折弯于外壁的内侧，且麦管架的v型凹槽所在的平面与箱体口所在的水平面垂直。优选的，两所述麦管架分别架于控温盒宽边的三等分点处。

优选的，所述麦管架由26号0.5mm的电镀锌铁丝制成。

本发明实施例还提供一种采用上述的控温装置的猪精液冷冻保存方法，包括如下步骤：

a、取5ml猪精液置于15ml离心管中，以稀释液b与猪精液按照1:1比例加入稀释液b，轻轻摇匀后，用柔软吸水纸紧密包裹5层，置于4℃冰箱中平衡3h；

b、取出平衡后的猪精液，在4℃的环境下，以稀释液c与猪精液按照2:1比例加入稀释液c后摇匀，装入0.25ml麦管中，麦管两端各预留1cm的空气，用封口机封口；

c、由于控温箱内加入液氮距离控温箱外壁顶端4cm，因此，在距离控温箱口合适距离时，其温度恒定在-20℃。此处，设置两根v型凹槽麦管架，麦管横置于两根麦管架上，即麦管的两头直接搭在两根麦管架上，从而可以保持麦管处于-20℃（外壁顶端下方4cm）的环境下20分钟，待猪精液冻结、麦管表面结霜后，投入液氮中保存；

d、将麦管置于37℃水浴中30s后立即取出，不添加任何解冻液；

e、将解冻后的猪精液装入2ml离心管中，立刻送入离心机中，2000r/min离心20分钟后，弃上清，加入1ml获能液mtbm，重复一次，轻微摇匀后，放入38.5℃的co2培养箱中培养40分钟。

其中，步骤a中的稀释液b的配制方法为：用电子天平准确称量8.8g乳糖，加入78ml的去离子水，20ml的卵黄和2ml的equex，配制成100ml的溶液，在4℃冰箱中平衡2h以上；

步骤b中的稀释液c的配制方法为：95.5ml的稀释液b，加入3ml的甘油和1.5ml的equex，配置成100ml的溶液，在4℃冰箱中平衡2h以上。

其中，步骤c中的液氮应提前40分钟左右倒入控温盒中静置使温度达到平衡。

本发明的上述技术方案的有益效果如下：本发明控温盒的盒体为保湿泡沫，麦管架为26号0.5mm电镀锌铁丝，均价格低廉且方便制作，在不受气流扰动的情况下，稳定后能很好的控制温度维持在-20℃达20分钟。本发明提供的猪精液冷冻保存方法简单有效，极大降低了冷冻的成本，并能取得很好的冷冻效果。

附图说明

图1为本发明实施例一的结构示意图；

图2为实施例一中控温盒的结构示意图；

图3为实施例一中控温盒的主视图；

图4为图3的左视图；

图5为图3的俯视图；

图6为实施例一中麦管架的主视图。

附图标记说明：

1、控温盒；2、麦管架；3、温度计；4、铁架台；6、液氮标线。

具体实施方式

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。

如图1、图2所示，一种新型便携式控温装置，包括控温盒1、两麦管架2、温度计3和铁架台4，所述控温盒1为长方形盒体，所述麦管架2为波浪形金属支架，所述温度计3为超低温温度计（量程为-50℃～50℃），所述铁架台4为实验室用铁架台。两所述麦管架3平行于控温盒1的长边间隔设置于控温盒1的上方，所述麦管架2的两端搭设于控温盒1的两宽边的三等分点处（可以用固定夹将麦管架的端部与控温盒的盒壁固定连接，若麦管架制作严格，也可以不使用固定夹，直接搭置），所述铁架台4设于控温盒1的侧方，所述温度计3通过铁架台4悬吊于控温盒1的中心处，所述温度计3水银球的中心位于麦管架2凹槽最低处所在的平面上。

所述控温盒1的四个盒壁的顶部为阶梯状内外壁结构，所述外壁比内壁高1.3cm，所述内壁的厚度为1.6cm，所述控温盒1的内壁面上设有液氮标线6（图3中的刻度线），其中，距外壁顶端4cm处为-20℃液氮标线，距外壁顶端0cm处为-10℃液氮标线，距外壁顶端5cm处为-30℃液氮标线。

本实施例中，所述控温盒1选用保温泡沫盒，其外径尺寸为长22cm、宽15cm、高10cm，内径尺寸为长16.5cm、宽10.5cm、高6.5cm。

如图6所示，波浪形的所述麦管架2由26号0.5mm的电镀锌铁丝制成，其上形成多个容置麦管的v形凹槽，所述v形凹槽的槽高为1cm，所述v形凹槽的底端所在平面平行介于外壁上端面和内部上端面之间。

如图3~图5所示，所述麦管架2的端部包括依次连接的最外v形凹槽的侧边、横边和竖边，所述横边与外壁上端面搭接，所述竖边相对于横边折弯于控温盒1盒壁的外侧，所述最外v形凹槽的侧边相对于横边折弯于外壁的内侧，且麦管架的v型凹槽所在的平面与箱体口所在的水平面垂直。本发明实施例还提供一种采用上述的控温装置的猪精液冷冻保存方法，包括如下步骤：

a、取5ml猪精液置于15ml离心管中，以稀释液b与猪精液按照1:1比例加入稀释液b，轻轻摇匀后，用柔软吸水纸紧密包裹5层，置于4℃冰箱中平衡3h；

其中，稀释液b的配制方法为：用电子天平准确称量8.8g乳糖，加入78ml的去离子水，20ml的卵黄和2ml的equex，配制成100ml的溶液，在4℃冰箱中平衡2h以上。

b、取出平衡后的猪精液，在4℃的环境下，以稀释液c与猪精液按照2:1比例加入稀释液c后摇匀，装入0.25ml麦管中，麦管两端各预留1cm的空气，用封口机封口；

其中，稀释液c的配制方法为：95.5ml的稀释液b，加入3ml的甘油和1.5ml的equex，配置成100ml的溶液，在4℃冰箱中平衡2h以上。

c、由于控温箱内加入液氮距离控温箱外壁顶端4cm，因此，在距离控温箱口合适距离时，其温度恒定在-20℃。此处，设置两根v型凹槽麦管架，麦管横置于两根麦管架上，即麦管的两头直接搭在两条麦管架上，从而可以保持麦管处于-20℃（外壁顶端下方4cm）的环境下20分钟，待猪精液冻结、麦管表面结霜后，投入液氮中保存；

其中，液氮应提前40分钟左右倒入控温盒中静置使温度达到平衡。

d、将麦管置于37℃水浴中30s后立即取出，不添加任何解冻液；

e、将解冻后的猪精液装入2ml离心管中，立刻送入离心机中，2000r/min离心20分钟后，弃上清，加入1ml获能液mtbm，重复一次，轻微摇匀后，放入38.5℃的co2培养箱中培养40分钟。

本发明控温盒的盒体为保湿泡沫，麦管架为26号0.5mm电镀锌铁丝，均价格低廉且方便制作，在不受气流扰动的情况下，稳定后能很好的控制温度维持在-20℃达20分钟。本发明提供的猪精液冷冻保存方法简单有效，极大降低了冷冻的成本，并能取得很好的冷冻效果。

以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。