本发明黑羽番鸭领域，特别是一种鉴定不同营养摄入对黑羽番鸭生长影响的方法。
背景技术：
番鸭原产于南美洲和中美洲等热带地区，属于善飞而不喜游的禽类，具有耐粗饲、耗粮少、饲料报酬高以及较好的生产性能等特点，其瘦肉率高、肉色暗红、鲜野味浓、营养丰富，富含多种人体必需的氨基酸和必需脂肪酸。在我国，番鸭根据羽色可以分为白羽番鸭、花羽番鸭、黑羽番鸭，黑羽番鸭的产肉性能比白羽番鸭低，但其羽色特异、肉质好、有特殊的经济价值，备受消费者和养殖户的青睐，一些地方政府把番鸭生产作为强农富民的优先产业，养殖规模日益扩大，养殖数量日益增多。我国关于鸭、鹅等不同生长阶段的营养需求研究起步较晚，且番鸭与家鸭起源不同，在生活习性、饲养方式等方面差异较大，这使得它们在营养需求、消化代谢能力等方面也有较大差异。目前对黑羽番鸭代谢能、蛋白质、钙、磷需要量的研究较少。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，为了弄清黑羽番鸭适宜代谢能、蛋白质、钙和磷水平以及不同的营养浓度组合对番鸭育雏期生长的影响，提供一种鉴定不同营养摄入对黑羽番鸭生长影响的方法。
本发明一种鉴定不同营养摄入对黑羽番鸭生长影响的方法，步骤如下所示：
(1)选用体质健康、初生重(x±y)g且无个体差异的健康黑羽番鸭苗z只(公母各半)，戴上翅号，随机分成m个试验组，每组设置了n个重复，每个重复s只鸭；
(2)日粮设计以代谢能、蛋白质、钙和有效磷为试验因子，每个因子均设置t1个水平，采用t2因素t1水平有重复正交试验设计；
(3)整个试验期t天,采用地面育雏，用稻壳做垫料，间隔一段时间更换垫料，保持场地卫生，选用优质饲料原料进行日粮配合并制成颗粒料饲喂，每天进行数次投料；雏鸭自行采食、饮水，每组投料时，根据料槽内余料情况增减饲喂量；试验鸭开水时按比例添加抗生素，预防细菌早期感染；1日龄皮下注射鸭肝疫苗，此后进行常规免疫，饲养期间饮水中添加电解多维，缓解应激；试验过程中每天定时清扫卫生，定期对舍内消毒，清理鸭舍周围环境，加强舍内通风换气；
(4)进行耗料量测定；
(5)进行体重测量，每周固定一天某个时间开始停料8-16h，之后对每只鸭进行空腹称重并计算平均日增重和料重比；
平均日增重(g/d)＝(末重-初重)/试验天数；
料重比＝平均日采食量/平均日增重；
(6)进行体尺测量，体尺测量在第t天与称重同时进行，测量体斜长、胸宽、胸深、胸骨长、骨盆宽、胫长、胫围、半潜水长等指标。
(7)进行血液生化指标测定，试验鸭饲养到第t天进行采血，采血前空腹8-16h；
(8)进行数据分析。
进一步地，步骤(2)所述日粮代谢能水平范围为11.52-12.32mj/kg；粗蛋白质水平范围为18％-22％，钙水平范围为0.6％-1.0％，有效磷水平范围为0.30％-0.60％。
进一步地，步骤(2)所述日粮选用基础日粮原料主要为玉米、豆粕、麦麸、米糠、棉籽粕、大豆油、石粉、磷酸氢钙、食盐。
进一步地，步骤(4)所述耗氧量测定方法如下：
整个试验期内，每日察看鸭群的大概情况，观察是否正常饮水、采食以及粪便有无异常等；每日喂料时对饲料进行称重，分多次饲喂，在垫料上面料槽下面铺一层塑料纸，每天更换，收集当天各栏水槽及垫料上的废料，第二天早晨将剩余的饲料晒干称重，统计耗料量和均只日采食量；
平均日采食量(g/d)＝总采食量/试验天数。
进一步地，步骤(6)所述指标测量方法如下：
体斜长：用皮尺沿体表测量肩关节至髋骨结节间距离(cm)。
胸宽：用卡尺测量两肩关节之间的体表距离(cm)。
胸深：用卡尺在体表测量第一胸椎到龙骨前缘的距离(cm)。
胸骨长：用皮尺测量体表龙骨突前端到龙骨末端的距离(cm)。
骨盆宽：用卡尺测量两髋骨结节间的距离(cm)。
胫长：用卡尺测量从胫部上关节到第三、四趾间的直线距离(cm)。
胫围：胫骨中部的周长(cm)。
半潜水长：用皮尺测量从嘴尖到髋骨连线中点的距离(cm)。
进一步地，步骤(7)所述血液生化指标测定采血及分析方法如下：
翅静脉采血10ml，3000r/min离心10min，提取上清液装放置于洁净安培道夫管中并放于-20℃冰柜中保存备用。采用technicon全自动生化分析仪测定分别对血清中含有的总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、尿酸(ua)、甘油三醋(tg)、总胆固醇(cho)、高密度脂蛋白(hdl)、低密度脂蛋白(ldl)、碱性磷酸酶(akp)、血清钙、血清磷的含量进行测定。
进一步地，步骤(8)所述数据分析方法如下：
试验采用excel表构建数据库并进行初步整理，应用spss19.0统计软件对数据进行单因子方差分析，平均数间的多重比较采用lsd法，采用bivariate相关分析中的pearson相关系数进行指标间的相关分析。
通过本发明方法，可以弄清黑羽番鸭适宜代谢能、蛋白质、钙和磷水平以及不同的营养浓度组合对黒羽番鸭育雏期生长的影响。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明。
本发明一种鉴定不同营养摄入对黑羽番鸭生长影响的方法，步骤如下所示：
(1)选用体质健康、初生重(49.71±0.76)g且无个体差异的健康黑羽番鸭苗288只(公母各半)，戴上翅号，随机分成9个试验组，每组设置了4个重复，每个重复8只鸭；
(2)日粮设计以代谢能、蛋白质、钙和有效磷为试验因子，每个因子均设置3个水平，采用4因素3水平l9(34)有重复正交试验设计，其中日粮代谢能水平分别为11.52mj/kg、11.92mj/kg、12.32mj/kg；粗蛋白质水平分别为18％、20％、22％，钙水平分别为0.6％、0.8％、1.0％，有效磷水平分别为0.30％、0.45％、0.60％，共9种试验日粮，基础日粮原料主要为玉米、豆粕、麦麸、米糠、棉籽粕、大豆油、石粉、磷酸氢钙、食盐；原料成分参照我国饲料原料成分及营养价值表(2011)配制，该阶段日粮组成及营养水平见表1；
表1试验日粮组成及营养水平(风干基础)
注：1)每千克预混料中含:va10000iu，vd33000iu，ve30mg，vk32mg，vb15mg，vb27mg，vb65mg，vb1220μg，烟酸38mg，泛酸9mg，叶酸1mg，生物素35μg，氯化胆碱6g，cu5mg，i0.9mg，fe100mg，zn110mg，mn100mg，se0.15mg，co0.5mg。
2)日粮中代谢能、粗蛋白质、钙、总磷的含量为实测值，有效磷为计算值。
(3)整个试验期21天。采用地面育雏，用稻壳做垫料，每周更换垫料，保持场地卫生。选用优质饲料原料进行日粮配合并制成颗粒料饲喂，每天分别于7:30、14:30进行2次投料，雏鸭自行采食、饮水，每组投料时，根据料槽内余料情况增减饲喂量。试验鸭开水时按比例添加抗生素，预防细菌早期感染。1日龄皮下注射鸭肝疫苗，此后进行常规免疫。饲养期间饮水中添加电解多维，缓解应激。试验过程中每天定时清扫卫生，定期对舍内消毒，清理鸭舍周围环境，加强舍内通风换气；
(4)进行耗料量测定，整个试验期内，每日察看鸭群的大概情况，观察是否正常饮水、采食以及粪便有无异常等。每日喂料时对饲料进行称重，分多次饲喂，在垫料上面料槽下面铺一层塑料纸，每天更换，收集当天各栏水槽及垫料上的废料，第二天早晨将剩余的饲料晒干称重，统计耗料量和均只日采食量；
平均日采食量(g/d)＝总采食量/试验天数；
(5)进行体重测量，每周末晚上开始停料12h，第二天上午7点对每只鸭进行空腹称重并计算平均日增重和料重比；
平均日增重(g/d)＝(末重-初重)/试验天数；
料重比＝平均日采食量/平均日增重；
(6)进行体尺测量，体尺测量在第21天上午7点与称重同时进行，测量的
指标主要有体斜长、胸宽、胸深、胸骨长、骨盆宽、胫长、胫围、半潜水长等。
体斜长：用皮尺沿体表测量肩关节至髋骨结节间距离(cm)。
胸宽：用卡尺测量两肩关节之间的体表距离(cm)。
胸深：用卡尺在体表测量第一胸椎到龙骨前缘的距离(cm)。
胸骨长：用皮尺测量体表龙骨突前端到龙骨末端的距离(cm)。
骨盆宽：用卡尺测量两髋骨结节间的距离(cm)。
胫长：用卡尺测量从胫部上关节到第三、四趾间的直线距离(cm)。
胫围：胫骨中部的周长(cm)。
半潜水长：用皮尺测量从嘴尖到髋骨连线中点的距离(cm)。
(7)进行血液生化指标测定，试验鸭饲养到第21天7:00进行采血，采血
前空腹12h，翅静脉采血10ml，3000r/min离心10min，提取上清液装放置于洁净安培道夫管中并放于-20℃冰柜中保存备用。采用technicon全自动生化分析仪测定分别对血清中含有的总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、尿酸(ua)、甘油三醋(tg)、总胆固醇(cho)、高密度脂蛋白(hdl)、低密度脂蛋白(ldl)、碱性磷酸酶(akp)、血清钙、血清磷的含量进行测定。
(8)进行数据分析，试验采用excel表构建数据库并进行初步整理，应用spss19.0统计软件对数据进行单因子方差分析，平均数间的多重比较采用lsd法，采用bivariate相关分析中的pearson相关系数进行指标间的相关分析。
通过分析，可以得到如下结论：
(1)表2所示为不同营养水平日粮对育雏期(1-21日龄)黑羽番鸭体重的影响，由表2可知，21日龄时试验鸭平均体重组间差异极明显(p<0.01)，a3组末重最高，为581.60g，分别极显著地高于a1组、a2组和a9组53.51％、13.67％和7.66％(p<0.01)，其余a4、a5、a6、a7和a8等组与a3组差异不明显(p>0.05)，但也极显著地高于a1组、a2组和a9组(p<0.01)。试验各组平均日增重也表现出了同样的趋势，其中a3组平均日增重最高，为25.30g，分别高于a1组61.76％(p<0.01)、a2组15.0％(p<0.01)和a9组8.44％(p<0.05)，其余a4、a5、a6、a7和a8等组与a3组差异不明显(p>0.05)。平均日采食量以a6组最高、为44.39g，a1组最低、为34.93g，a6组比a1组高27.08％，但所有各组间差别不明显(p<0.05)。a1组的料重比最高，为2.24，a7组最低，为1.67，a1组极显著地高于其余各组(p<0.01)，分别比a2～a9依次高18.52％、33.33％、25.84％、28％、22.4％、34.13％、24.44％和19.79％。
表2不同营养水平日粮对1～21日龄黑羽番鸭体重的影响
注：同列比较中标有相同字母表示差异不明显(p>0.05)，相邻字母表示差异明显(p<0.05)，相间字母表示差异极为明显(p<0.01)，下同。
(2)表3所示为不同营养水平日粮对育雏期(1-21日龄)黑羽番鸭体尺的影响，表3结果表明，21日龄黑羽番鸭在早期生长发育阶段体尺的各项指标均表现为组间差异明显或极明显(p<0.05或p<0.01)，但没有明显的规律表明哪一组的所有指标发育都较好。其中a3组的体斜长最高，为14.12cm，极显著地高于a1、a2、a8和a9组(p<0.01)，分别高了20.68％、7.29％、18.95％和10.11％，但与a4、a5、a6和a7组差异不显著(p>0.05)。胸骨长是a3组最高，为7.07cm，分别极显著地高于a1、a2、a8和a9组(p<0.01),分别高了24.04％、7.77％、11.16％和20.85％，显著高于a6组4.74％(p<0.05)，与a4、a5组差异不显著(p>0.05)。a8和a9组的胸宽较高，分别为4.17cm和4.09cm，两组均极显著地高于其余各组(p<0.01)。a3组的胸深显著高于a5组5.62％、高于a6组5.31％(p<0.05)，与其余各组差异不显著(p>0.05)。a3组的骨盆宽组极显著地高于a1、a9组(p<0.01)，分别高了3.46％、10.43％，显著高于a4、a5、a6和a8(p<0.05)，与a2和a7组差异不显著(p>0.05)。胫长是a4组最高，为6.06cm，a1组最低，为5.28cm，并且a3、a4、a5、a6和a7组均极显著地高于a1、a2、a8、a9组(p<0.01)。胫围是a7组最高，为3.88cm，a9组最低，为3.26cm，其中a3、a4、a5、a7组的胫围极显著地高于a1、a2、a8、a9组(p<0.01)。a3组的半潜水长最高，为27.01cm，极显著地高于a1、a2、a8和a9组(p<0.01)，分别高了12.97％、4.65％、7.01％和6.59％，显著高于a4组1.73％(p<0.05)，与a5、a6和a7组差异不显著(p>0.05)。整体看来，a3组的体斜长、胸骨长、胸深、骨盆宽和半潜水长均为最高，说明该组番鸭身体各部分发育都比较好。
表3不同营养水平日粮对1～21日龄黑羽番鸭体尺的影响(单位：cm)
(3)表4所示为试验鸭体重与体尺指标间的相关性分析结果，从表4试验鸭体重与体尺指标间的相关性分析结果来看，体重与所有体尺指标间均呈极显著正相关(p<0.01)，说明他们的生长发育趋势基本一致。体斜长与胸骨长、骨盆宽、胫长、胫围、半潜水长呈极显著正相关(p<0.01)，与胸宽呈弱负相关(p>0.05)，与胸深呈弱正相关(p>0.05)。胸骨长与骨盆宽、胫长、胫围、半潜水长呈极显著正相关(p<0.01)，与胸宽、胸深呈弱正相关(p>0.05)。胸宽与胸深呈极显著正相关(p<0.01)，与骨盆宽、半潜水长呈弱正相关(p>0.05)，与胫长和胫围呈弱负相关(p>0.05)。胸深与骨盆宽呈极显著正相关(p<0.01)，与胫长、胫围、半潜水长呈弱正相关(p>0.05)，但骨盆宽与这三个指标呈极显著正相关(p<0.01)。胫长与胫围、半潜水长呈极显著正相关(p<0.01)，胫围也与半潜水长呈极显著正相关(p<0.01)。
表4试验鸭体重与体尺指标间的相关性分析结果
**表示在α＝0.01水平下显著；*表示在α＝0.05水平下显著。下同。
(4)表5为不同营养水平日粮对21日龄黑羽番鸭血液生化指标的影响，从表5可以看出，21日龄黑羽番鸭血液生化指标中总蛋白、白蛋白、球蛋白、高密度脂蛋白、钙和磷的含量表现为组间差异显著或极显著，其余指标组间差异不明显。总蛋白a3组最高，为37.15g/l，极显著地高于a1、a2组(p<0.01)，分别高了28.10％、27.44％，分别显著地高于a4、a5和a7组15.55％、17.94％和11.90％(p<0.05)，与a6、a8、a9组差异不显著(p>0.05)。白蛋白a3组最高，为16.45g/l，极显著地高于a1、a2组44.93％、33.74％(p<0.01)，与其余各组差异不显著(p>0.05)。球蛋白a3组最高，为20.70g/l，极显著地高于a1、a2、a4和a5组(p<0.01)，分别高了17.28％、22.85％、18.62％和23.58％，显著高于a7、a8组(p<0.05)，与a6、a9组差异不显著(p>0.05)。高密度脂蛋白a2组最高，为3.49umol/l，极显著地高于a5、a8和a9组94.97％、147.52％和128.10％(p<0.01)，显著高于a3、a4组60.09％、56.50％(p<0.05)；低密度脂蛋白为a8组最高，为2.60umol/l，a4组最低，为1.20umol/l，组间差异不显著(p>0.05)。甘油三酯是a1组最高，为3.64mmol/l，a7组最低，为1.85mmol/l，组间差异不显著(p>0.05)。总胆固醇是a2组最高，为5.1mmol/l7，a4组最低，为3.76mmol/l，组间差异不显著(p>0.05)。碱性磷酸酶是a8组最高，为769.5iu/l，a7组最低，为424.5iu/l，组间差异不显著(p>0.05)。尿酸是a9组最高，为527.3umol/l，a7组最低，为222.6umol/l，组间差异不显著(p>0.05)。血清钙含量a3组最高，为2.92mmol/l，极显著地高于a1组17.74％(p<0.01)，显著高于a7组13.62％(p<0.05)，与其余各组差异不显著(p>0.05)。血清磷含量a3组最高，为3.55mmol/l，分别显著高于a1、a5和a7组28.62％、24.56％和37.07％(p<0.05)，与其余各组差异不显著(p>0.05)。
表5不同营养水平日粮对21日龄黑羽番鸭血液生化指标的影响
(5)表6所示为试验鸭血液生化指标间的相关性分析结果，从表6试验鸭血液生化指标间的相关性分析结果来看，总蛋白与白蛋白、球蛋白呈极显著正相关(p<0.01)，与高密度脂蛋白呈负相关(p<0.05)，与低密度脂蛋白、甘油三酯、尿酸、血清钙、血清磷均呈正相关(p>0.05)，与总胆固醇、碱性磷酸酶呈弱负相关(p>0.05)。白蛋白与球蛋白呈极显著正相关(p<0.01)，与高密度脂蛋白呈极显著负相关(p<0.01)，与低密度脂蛋白、尿酸、血清钙、血清磷呈正相关且差异不显著(p>0.05)，与甘油三酯、碱性磷酸酶、总胆固醇呈负相关(p>0.05)。球蛋白与高密度脂蛋白、甘油三酯、碱性磷酸酶、血清钙、血清磷呈负相关，与低密度脂蛋白、总胆固醇、尿酸呈正相关，差异均不显著(p>0.05)。高密度脂蛋白与低密度脂蛋白呈极显著正相关(p<0.01)，与甘油三酯、总胆固醇、尿酸、血清钙、血清磷呈正相关(p>0.05)，与碱性磷酸酶呈负相关(p>0.05)。低密度脂蛋白与总胆固醇呈极显著正相关(p<0.01)，与碱性磷酸酶呈显著正相关(p<0.05)，与甘油三酯、尿酸、血清钙呈正相关(p>0.05)，与血清磷呈负相关(p>0.05)。甘油三酯与总胆固醇、碱性磷酸酶、尿酸、血清钙、血清磷均呈正相关且不显著(p>0.05)。总胆固醇与碱性磷酸酶呈正相关(p>0.05)，与尿酸、血清钙、血清磷呈负相关(p>0.05)。碱性磷酸酶与血清钙呈显著正相关(p<0.05)，与尿酸、血清磷呈正相关但不显著(p>0.05)。尿酸与血清钙呈显著正相关(p<0.05)，与血清磷呈极显著正相关(p<0.01)。血清钙与血清磷呈成正相关，但差异不显著(p>0.05)。
表6试验鸭血液生化指标间的相关性分析结果
根据本发明方法，可以得出以下结论：
1)a3组试验番鸭的体斜长、胸骨长、胸深、骨盆宽和半潜水长均为最高，分别为14.12cm、7.07cm、3.57cm、3.60cm和27.01cm。同时，试验鸭体重与所有体尺指标间均呈极显著正相关(p<0.01)，说明他们的生长发育趋势基本一致。
2)综合比较可以发现，代谢能、粗蛋白质水平均较低的a1、a2组和两种营养水平均较高的a8、a9组的末重、平均日增重、体斜长、胸骨长显著低于代谢能水平为11.72mj/kg、粗蛋白质水平为20.49％的a3组，而钙、磷水平对试验鸭生长性能的影响不显著。说明a3组代谢能、蛋白质、钙和有效磷水平都能很好地促进1-21日龄黑羽番鸭生长发育。
3)a3组试验鸭血液生化指标中血清总蛋白、白蛋白和球蛋白水平都是最高，都显著或极显著地高于其他各个组(p<0.05或p<0.01)，说明粗蛋白水平为20.49％的条件下，1-21日龄黑羽番鸭生理状况及其对日粮中粗蛋白的利用率最好。同时发现，代谢能、粗蛋白质、钙和有效磷水平较低的a1、a2组试验鸭血清中总蛋白、白蛋白、低密度脂蛋白、碱性磷酸酶和钙含量明显低于其余各组，且有随着代谢能水平增加而含量增高的趋势，可能是因为代谢能和粗蛋白质水平较低的情况下不仅影响其生长发育，还会影响试验鸭的新陈代谢和血清生化指标的变化。
4)血清生化指标中另外3个重要指标甘油三酯、总胆固醇、尿酸组间差异都不显著，本试验日粮中不同蛋白质水平，并没有引进血清尿酸含量显著差异，表明各组日粮中蛋白质含量都处在一个合理的水平，没有过高或过低。
通过本发明方法，我们可以得出采用a3组营养配比，按本发明所述方法喂养，控制黒羽番鸭的营养摄入，有利于黒羽番鸭的生长。
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。