本发明属于植物类，具体地说，涉及一种千年健组织培养方法。
背景技术：
千年健为天南星科植物，千年健的干燥根茎。主产广西南部和云南红河、西双版纳等地。春、秋两季采挖根茎，除去叶、苗，洗净泥土，晒干，或刮去外皮后晒干。根茎圆柱形或略扁，稍弯曲。长15~40cm，直径0.8~2cm。表面红棕色或黄棕色。粗糙，有多数扭曲的纵沟纹及黄白色的纤维束。质脆，易折断，断面红棕色，树脂样，有很多纤维束外露，及圆形具光泽的油点。气芳香，味辛、微苦。以质硬、色红棕、香气浓者为佳。根茎含挥发油，其中有蒎烯、芳樟醇、二氢枯茗醛等功用主治：祛风湿，健筋骨。用于风寒湿痹，肢节酸痛，筋骨无力。目前，千年健种苗远远不能满足大规模生产对千年健种苗的需要。不利于千年健优良品种的推广。利用植物组织培养技术能有效解决濒危珍稀物种拯救和野生植物资源匮乏的问题。因此很有必要建立千年健组织培养技术，为其大规模工厂化生产技术保证。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种以千年健带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了千年健的离体再生的种苗粗壮，发芽率高的一种千年健组织培养方法。
本发明的一种千年健组织培养方法，包括以下的步骤：
（1）芽诱导培养：以千年健带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成5.1长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡11min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒31s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒26min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为2100lx条件下培养31天，统计其芽诱导率及生长情况；
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为2100lx，培养温度为29℃的条件下培养31天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为4.5cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养29天后统计生根情况；
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:2混合成的基质，光照培养箱内培养，每天以1/2ms大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽。
步骤（1）所述的芽诱导培养基为：ms+6mg/l6-ba+3mg/lnaa+31g/l蔗糖+6.2g/l琼脂，ph为5.9。
步骤（2）所述的增殖培养基为：ms+2.0mg/lnaa+7mg/l6-ba+31g/l蔗糖+6.2g/l琼脂，ph为5.9。
步骤（3）所述的生根培养基为：1/4ms+2mg/lnaa+2mg/liba+31g/l蔗糖+6.2g/l琼脂，ph为5.9。
与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量千年健优良品种苗木的方法。以千年健带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了千年健的离体再生，为其大量选育、快速繁殖的技术方法简单，操作容易，种子发芽率高，种苗粗壮的一种千年健组织培养方法。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）芽诱导培养：以千年健带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成5.8长的带有6个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡8min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒8s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒13min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在27℃条件下全暗培养6天，然后每天光照13小时，光照强度为1500lx条件下培养33天，统计其芽诱导率及生长情况，芽诱导率为90%。所述的芽诱导培养基为：ms+8mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+28g/l蔗糖+4.1g/l琼脂，ph为5.7。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在27℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照13小时，光照强度为1000lx，培养温度为27℃的条件下培养33天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽，新生芽体生长健壮，增殖系数为5.1。所述的增殖培养基为ms+0.8mg/lnaa+6mg/l6-ba+33g/l蔗糖+6.2g/l琼脂，ph为5.7。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为4.5cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养4天，然后每天光照14小时，光照强度为2300lx，培养温度为27℃的条件下培养40后统计生根情况，生根率为94%。所述的生根培养基为：1/4ms+0.8mg/lnaa+0.5mg/liba+18g/l蔗糖+3.8g/l琼脂，ph为5.7。
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约11cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:2混合成的基质，光照培养箱内培养，每天以1/2ms大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为91%。
实施例2：
（1）芽诱导培养：以千年健带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成4.9长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡9min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒14s后用无菌水洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒14min，用无菌水冲洗3次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养2天，然后每天光照9小时，光照强度为1300lx条件下培养28天，统计其芽诱导率及生长情况，芽诱导率为81%。所述的芽诱导培养基为：ms+3mg/l6-ba+0.2mg/lnaa+28g/l蔗糖+3.5g/l琼脂，ph为5.7。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养3天，然后每天光照10小时，光照强度为1400lx，培养温度为29℃的条件下培养29天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽，新生芽体生长健壮，增殖系数为5.0。所述的增殖培养基为ms+0.2mg/lnaa+3mg/l6-ba+29g/l蔗糖+5.9g/l琼脂，ph为5.7。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为2.5cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养3天，然后每天光照10小时，光照强度为2400lx，培养温度为29℃的条件下培养29天后统计生根情况，生根率为95%。所述的生根培养基为：1/4ms+0.7mg/lnaa+0.5mg/liba+14g/l蔗糖+2.0g/l琼脂，ph为5.7。
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约10cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:2混合成的基质，光照培养箱内培养，每天以1/2ms大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽，移栽成活率为93%。