本发明涉及组织培养
技术领域：
，特别是一种桃、李、杏等核果类果树果实种子的消毒方法。
背景技术：
：一些核果类果树如桃、杏、李等的早熟品种、特早熟品种在调剂市场余缺，保证水果的周年供应等方面发挥了重要作用，但这些早熟、特早熟品种，果实发育期往往不足60-70天(桃、李、杏)，由于果实发育时期太短，种胚发育不全，难以发育成熟，采用常规播种不能成苗或萌芽率很低，这是核果类果树早熟品种育种的一大障碍。胚培养技术解决了品种杂交过程中胚的败育问题，给核果类果树早熟品种的培育提供了有效途径，在解决其育种周期长、育种效率低而造成的品种改良难等方面显示了巨大的潜力，已成为果树育种改良的重要手段之一。常规操作方法是摘取杂交果实，削去果肉，砸破果核，取出种子，用流水冲洗干净后，用少量洗衣分水浸泡10分钟后，流水冲洗30分钟，超净工作台上用75%酒精中处理30秒，无菌水冲洗一次，再用0.1%升汞溶液消毒8-12分钟，最后用无菌水冲洗3-5次后在无菌滤纸上拭干，进行直接接种。实际使用中存在以下问题：1、步骤繁杂，整个过程需要1个多小时的时间，且步骤较多，不易掌握。2、这种方法由于处理时间长，只能批量操作，如一次性处理30-50粒种子，但这样会造成一定的风险，就是在这30-50粒种子中，如果有一粒种子中，已经产生了内生困菌，将造成这30-50粒种子最终全部污染，前功尽弃。3、升汞是一种剧毒污染物质，使用后的溶液处理不当，会对环境甚至人身安全造成危害。技术实现要素：本发明解决现有技术不足提供一种成本低廉、操作简单、萌芽率高、污染率低的桃、李、杏种子胚培养过程中的消毒处理方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：一种桃、李、杏等核果类果树果实种子的消毒方法，包括如下步骤：a、清洗果实采摘新鲜果实，清水冲洗新鲜果实表面；b、取出种子将果肉去除，打开种壳用无菌镊取出种子；c、酒精消毒种子蘸入体积浓度95%的酒精；d、点燃消毒点燃种子外层酒精进行消毒，待种子火苗自然熄灭；e、去除种皮火苗熄灭后，用无菌手术刀片去除种皮。所述步骤b、c、d和e在超净工作台上进行操作。所述步骤d中种子的种胚端迎风点燃。所述步骤d中迎风风速为3-6m/s。所述步骤e中火苗熄灭后使用无菌手术刀片将种皮去除。所述步骤e中从种子的远胚端切去五分之一部分，用镊子挤压使种子从种皮中挤出。本发明的有益效果为：1、本发明的一种桃、李、杏等核果类果树果实种子胚培养过程中的的消毒方法，蘸取酒精，避免杂质和细菌影响，通过点燃酒精高温杀死细菌。减少化学消毒试剂使用量。种子逐个蘸取酒精消毒操作，避免交叉污染，有效降低污染率。2、取出种子后迅速蘸取酒精，取出种子在表面迅速形成酒精包裹层。防止新取出种子沾染杂菌。并点燃酒精包裹层，通过高温杀死种子外层细菌。同时通过高温使得种子外层脱水形成灼烧保护层。灼烧保护层具有隔离保护内芯功能。此外，种皮外层灼烧后失水20-30%，内外层柔韧程度不同，更易去除外层种皮。迎风风速越大失水率越低，根据种子外皮的含水率通过风速调节控制外层含水率，便于培养时分离外层种皮。3、种子的种胚端迎风点燃，通过微风吹拂防止种胚端湿度过高而灼烧种胚至其死亡。提升后期萌发率。本发明利用酒精燃烧时的瞬时高温进行种子表面消毒，又不伤害里层种胚，安全高效，降低升汞agcl2等消毒物质使用，解决升汞agcl2消毒时间和浓度不易掌握的问题，大幅减低消毒操作难度。种子逐个蘸取酒精消毒操作，避免交叉污染。单种子消毒操作在30秒之内完成，快速简便易于操作。具体实施方式一种桃、李、杏等核果类果树果实种子的消毒方法，包括如下步骤：a、清洗果实采摘新鲜果实，清水冲洗新鲜果实表面；b、取出种子将果肉去除，打开种壳用无菌镊取出种子；c、酒精消毒种子蘸入体积浓度95%的酒精；d、点燃消毒点燃种子外层酒精进行消毒，待种子火苗自然熄灭；e、去除种皮火苗熄灭后将种皮去除。所述步骤b、c、d和e在超净工作台上进行操作。所述步骤d中种子的种胚端迎风点燃。所述步骤d中迎风风速为3-6m/s。所述步骤e中火苗熄灭后使用无菌手术刀片将种皮去除。实施例1一种桃、李、杏等核果类果树果实种子的消毒方法，包括如下步骤：a、清洗果实采摘新鲜果实，清水冲洗新鲜果实表面；b、取出种子将果肉去除，打开种壳用无菌镊取出种子；c、酒精消毒种子蘸入体积浓度95%的酒精；d、点燃消毒点燃种子外层酒精进行消毒，待种子火苗自然熄灭；e、去除种皮火苗熄灭后将种皮去除。所述步骤d中种子的种胚端迎风点燃。所述步骤d中迎风风速为3m/s。实施例2一种桃、李、杏等核果类果树果实种子的消毒方法，包括如下步骤：a、清洗果实采摘新鲜果实，清水冲洗新鲜果实表面；b、取出种子将果肉去除，打开种壳用无菌镊取出种子；c、酒精消毒种子蘸入体积浓度95%的酒精；d、点燃消毒点燃种子外层酒精进行消毒，待种子火苗自然熄灭；e、去除种皮火苗熄灭后将种皮去除。所述步骤b、c、d和e在超净工作台上进行操作。所述步骤d中种子的种胚端迎风点燃。所述步骤d中迎风风速为6m/s。实施例3一种桃、李、杏等核果类果树果实种子的消毒方法，包括如下步骤：a、清洗果实采摘新鲜果实，清水冲洗新鲜果实表面；b、取出种子将果肉去除，打开种壳用无菌镊取出种子；c、酒精消毒种子蘸入体积浓度95%的酒精；d、点燃消毒点燃种子外层酒精进行消毒，待种子火苗自然熄灭；e、去除种皮火苗熄灭后将种皮去除。所述步骤b、c、d和e在超净工作台上进行操作。所述步骤d中种子的种胚端迎风点燃。所述步骤d中迎风风速为4.5m/s。所述步骤e中火苗熄灭后使用无菌手术刀片将种皮去除。对比实验：选用早熟油桃品种“陇油桃1号”桃为母本杂交的后代果实，取种核作为实验材料，方法1至3选用实施例1-3的方法进行种核处理。方法4：摘取杂交果实，削去果肉，砸破果核，取出种子，用流水冲洗干净后，用少量洗衣分水浸泡10分钟后，流水冲洗30分钟，超净工作台上用体积浓度75%酒精中处理30秒，无菌水冲洗一次，再用0.1%升汞溶液消毒8分钟，最后用无菌水冲洗3-5次后在无菌滤纸上拭干，进行直接接种。方法5：摘取杂交果实，削去果肉，砸破果核，取出种子，用流水冲洗干净后，用少量洗衣分水浸泡10分钟后，流水冲洗30分钟，超净工作台上用体积浓度75%酒精中处理30秒，无菌水冲洗一次，再用体积浓度0.1%升汞溶液消毒16分钟，最后用无菌水冲洗3-5次后在无菌滤纸上拭干，进行直接接种。方法6：种核不进行任何处理。为了避免实验误差，每种方法选取不少于30粒种胚进行处理后，接种到相同的萌发培养基上，在无外来病菌干扰的条件下进行萌发实验。具体实验结果如下表所示：方法接种种胚数(个)污染种胚数(个)污染率（%）萌发种胚数(个)萌发率（%）139003897.4%23612.77%35100%3300030100%43638.33%3296.9%53313.03%2681.25%63030100%//注：污染率（%）=污染种胚数/接种种胚数*100%萌发率（%）=萌发种胚数/(接种种胚数-污染种胚数)*100%通过上表所示，实施例1-3的方法与传统方法4对比，种核萌发数量基本保持一致，说明酒精蘸入不会影响种核萌发率，且污染率低对方法4。实施例1-3的方法与传统方法5对比，由于升汞使用时间由8分钟延长到了16分钟，造成了种胚的伤害，虽然污染低控制到了与实施例1-3相近的水平，但种胚的萌发率则由100%显著下降到81.5%。实施例1-3的方法有效降低污染率，且避免了化学药剂升汞的使用，从而防止对环境的污染。当前第1页12