本发明涉及农业生物工程
技术领域：
，尤其涉及一种利用大蒜气生鳞茎培育大蒜幼苗的方法。
背景技术：
：大蒜（alliumsativuml.）为无性繁殖作物，通常使用鳞茎繁殖，由于长期使用鳞茎繁殖，病毒逐代积累，再加上不良环境条件、不良栽培措施的影响，导致大蒜“退化”现象严重，给生产造成极大损失。为避免上述情况的发生，人们使用大蒜气生鳞茎（天蒜）繁殖，大蒜采用气生鳞茎（天蒜）繁殖时，气生鳞茎采自蒜薹（花薹）顶端的花苞（生长点），花苞一般不带病毒，因此，采用气生鳞茎可自然脱毒。但气生鳞茎具有休眠的现象，延长了利用气生鳞茎得到幼苗的周期，增加了时间成本，因此，建立一种新的高效的大蒜快繁体系是非常必要的。技术实现要素：本发明针对现有技术的不足，提供一种大蒜试管苗的诱导方法，以解决
背景技术：
中病毒逐代积累的问题。本发明是通过如下技术方案实现的，提供一种大蒜试管苗的诱导方法，所述方法包括如下步骤：s01：培养基的制备：以ms培养基为基本培养基，加入蔗糖、琼脂、植物生长调节剂naa和6-ba，煮沸溶化琼脂，ph值调为5.8～6.0，分装到组培瓶中，盖盖封口，高温高压灭菌后备用。s02：气生鳞茎处理：将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡后流水冲洗，然后转移至超净工作台内进行酒精消毒、无菌水冲洗、次氯酸钠消毒，最后用无菌水冲洗后备用。本发明中，首先将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡，有利于打破气生鳞茎休眠，提高诱导率。s03：接种：在超净工作台上，用灭菌后的吸水纸将处理好的气生鳞茎的表面水分吸干，用灭菌后的镊子将气生鳞茎接种到所述步骤s01中配好的培养基中，转移至组培室培养，光照条件为2600lx、16h·d-1，室温为23～27℃。作为优选，所述步骤s01中，以ms培养基为基本培养基，在1l培养基中加蔗糖30g，琼脂7g，并加植物生长调节剂0.05mg/l的naa和0.3mg/l的6-ba，煮沸溶化琼脂，将培养基定容至1000ml，ph值调为5.8～6.0，分装到组培瓶中，每瓶30ml培养基，盖盖封口，121℃高温高压灭菌20min后备用。培养基中各物质含量对大蒜试管苗的诱导是十分重要的，本发明经过多次优化实验得知，采用上述含量的培养基进行培养时，大蒜试管苗的诱导率是最高的，特别是植物生长调节剂的浓度，添加上述浓度的激素可以提高试管苗的诱导率。作为优选，所述步骤s01中，所述ms培养基配方为：每1l基本培养基中含有kno31900mg，nh4no31650mg，mgso4·7h2o370mg，kh2po4170mg，cacl2·2h2o440mg，mnso4·4h2o22.3mg，znso4·7h2o8.6mg，h3bo36.2mg，ki0.83mg，na2mo3·2h2o0.25mg，cuso4·5h2o0.025mg，cocl2·6h2o0.025mg，na2-edta37.3mg，feso4·7h2o27.8mg，甘氨酸2.0mg，盐酸硫胺素0.1mg，盐酸吡哆醇0.5mg，烟酸0.5mg，肌醇100mg。作为优选，所述步骤s02中，将备好的气生鳞茎在100～150mg/l的ga3溶液中浸泡12～24小时，用流水冲洗5～10min后转移至超净工作台内，酒精消毒30～60s，无菌水冲洗2～3次，次氯酸钠消毒15～20min，最后用无菌水冲洗3～5次。作为优选，所述步骤s02中，所述备好的气生鳞茎为：去除已诱导出气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎，剥离得到的单个气生鳞茎。在进行此操作之前，需要首先诱导出大蒜气生鳞茎。本发明实施例提供的技术方案可以包含以下有益效果：本发明提供一种大蒜试管苗的诱导方法，包括培养基制备、气生鳞茎处理、接种等步骤，首先将气生鳞茎采用ga3溶液浸泡，打破大蒜气生鳞茎的休眠，提高诱导率，缩短发育时间，然后将打破休眠后的气生鳞茎接种到制备好的培养基中在特定条件下培养得到试管幼苗，制备好的培养基中含有特定浓度的植物生长调节剂naa和6-ba，特定植物生长调节剂的添加有利于提高试管苗的诱导率。本发明利用大蒜气生鳞茎作为外植体直接诱导试管苗，使大蒜实现天然脱毒的同时，避免愈伤组织途径脱分化、再分化、繁殖系数低以及易产生遗传变异的缺憾，为大蒜的脱毒快繁打下基础；并且，采用本发明提供的方法培育试管苗的的时间大大缩短，提高了出苗率。具体实施方式为了使本
技术领域：
的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明的保护范围。实施例1本实施例提供一种大蒜试管苗的诱导方法，所述方法按照如下步骤进行：s01：培养基的制备：以ms培养基为基本培养基，在1l培养基中加蔗糖30g，琼脂7g，并加植物生长调节剂0.05mg/l的naa和0.3mg/l的6-ba，煮沸溶化琼脂，将培养基定容至1000ml，ph值调为5.8，分装到组培瓶中，每瓶30ml培养基，盖盖封口，121℃高温高压灭菌20min，备用。s02：气生鳞茎处理：将已经诱导出气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，备用；然后将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡12小时，用流水冲洗5min后转移至超净工作台内，酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗3次。s03：接种：在超净工作台上，用灭菌后的吸水纸将已消毒的气生鳞茎的表面水分吸干，用灭菌后的镊子将气生鳞茎接种到所述步骤s01中配好的培养基中，转移至组培室培养，光照条件为2600lx、16h·d-1，室温为23℃。培养30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。实施例2本实施例提供一种大蒜试管苗的诱导方法，所述方法按照如下步骤进行：s01：培养基的制备：以ms培养基为基本培养基，在1l培养基中加蔗糖30g，琼脂7g，并加植物生长调节剂0.05mg/l的naa和0.3mg/l的6-ba，煮沸溶化琼脂，将培养基定容至1000ml，ph值调为6.0，分装到组培瓶中，每瓶30ml培养基，盖盖封口，121℃高温高压灭菌20min，备用。s02：气生鳞茎处理：将已经诱导出气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，备用；然后将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡24小时，用流水冲洗10min后转移至超净工作台内，酒精消毒60s，无菌水冲洗3次，次氯酸钠消毒20min，最后用无菌水冲洗5次。s03：接种：在超净工作台上，用灭菌后的吸水纸将已消毒的气生鳞茎的表面水分吸干，用灭菌后的镊子将气生鳞茎接种到所述步骤s01中配好的培养基中，转移至组培室培养，光照条件为2600lx、16h·d-1，室温为27℃。培养30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。实施例3本实施例提供一种大蒜试管苗的诱导方法，所述方法按照如下步骤进行：s01：培养基的制备：以ms培养基为基本培养基，在1l培养基中加蔗糖30g，琼脂7g，并加植物生长调节剂0.05mg/l的naa和0.3mg/l的6-ba，煮沸溶化琼脂，将培养基定容至1000ml，ph值调为5.8，分装到组培瓶中，每瓶30ml培养基，盖盖封口，121℃高温高压灭菌20min，备用。s02：气生鳞茎处理：将已经诱导出气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，备用；然后将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡20小时，用流水冲洗8min后转移至超净工作台内，酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗4次。s03：接种：在超净工作台上，用灭菌后的吸水纸将已消毒的气生鳞茎的表面水分吸干，用灭菌后的镊子将气生鳞茎接种到所述步骤s01中配好的培养基中，转移至组培室培养，光照条件为2600lx、16h·d-1，室温为25℃。培养30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。实施例4本实施例提供一种大蒜试管苗的诱导方法，所述方法按照如下步骤进行：s01：培养基的制备：以ms培养基为基本培养基，在1l培养基中加蔗糖30g，琼脂7g，并加植物生长调节剂0.05mg/l的naa和0.3mg/l的6-ba，煮沸溶化琼脂，将培养基定容至1000ml，ph值调为5.8，分装到组培瓶中，每瓶30ml培养基，盖盖封口，121℃高温高压灭菌20min，备用。s02：气生鳞茎处理：将已经诱导出气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，备用；然后将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡16小时，用流水冲洗7min后转移至超净工作台内，酒精消毒30s，无菌水冲洗2次，次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗5次。s03：接种：在超净工作台上，用灭菌后的吸水纸将已消毒的气生鳞茎的表面水分吸干，用灭菌后的镊子将气生鳞茎接种到所述步骤s01中配好的培养基中，转移至组培室培养，光照条件为2600lx、16h·d-1，室温为25℃。培养30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。对比例1本实施例中，选用健康无病的蒜瓣，剥去外层保护叶，去除基部褐色蒜踵，切取0.3～0.4cm蒜瓣基部茎盘，84消毒夜消毒30s，无菌水冲洗3~5次，0.1％升汞消毒15min，无菌水冲洗3～5次。用小刀切割为0.5cm2的小块，接种到添加2，4-d的愈伤诱导培养基中，诱导出愈伤组织后转入芽分化培养基中。30天后统计管芽诱导率，如表1所示。对比例2本实施例中，取新鲜的尚未形成气生鳞茎的蒜薹花苞(带外皮)切去基部蒜苔，酒精消毒1min，0.1％的升汞消毒20min，无菌水冲洗5次，剥去苞皮后接种到不定芽诱导培养基上，长成不定芽后转入试管苗诱导培养基上。30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。对比例3本实施例中，将气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，将剥离的气生鳞茎栽培于苗圃中，自然生长。30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。对比例4本实施例中，将气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，剥离单个气生鳞茎，备用；然后将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡12~24小时，用流水冲洗7min后转移至超净工作台内，酒精消毒30s，无菌水冲洗2次，次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗5次。之后将处理过的大蒜气生鳞茎栽培于苗圃中，自然生长。30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。对比例5本实施例提供一种大蒜试管苗的诱导方法，所述方法按照如下步骤进行：s01：培养基的制备：以ms培养基为基本培养基，在1l培养基中加蔗糖30g，琼脂7g，煮沸溶化琼脂，将培养基定容至1000ml，ph值调为5.8，分装到组培瓶中，每瓶30ml培养基，盖盖封口，121℃高温高压灭菌20min，备用。s02：气生鳞茎处理：将已经诱导出气生鳞茎的大蒜花苞的外衣和假茎去除，剥离单个气生鳞茎，备用；然后将备好的气生鳞茎在ga3溶液中浸泡16小时，用流水冲洗7min后转移至超净工作台内，酒精消毒30s，无菌水冲洗2次，次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗5次。s03：接种：在超净工作台上，用灭菌后的吸水纸将已消毒的气生鳞茎的表面水分吸干，用灭菌后的镊子将气生鳞茎接种到所述步骤s01中配好的培养基中，转移至组培室培养，光照条件为2600lx、16h·d-1，室温为25℃。培养30天后统计大蒜幼苗诱导率，如表1所示。表1：各实施例大蒜幼苗诱导率对比实施例大蒜幼苗诱导率实施例189.41%实施例287.22%实施例387.34%实施例490.34%对比例152.02%对比例234.80%对比例30对比例40.95%对比例528.56%由上表1可知，本发明实施例提供的方法中，30天后大蒜幼苗诱导率远远高于对比例1、对比例2、对比例3和对比例4，说明本发明实施例提供的方法能够大大缩短大蒜的萌芽时间。且本发明提供的实验室组培方法，比直接播种于田间具有更高的诱导率，即能够更快萌芽。当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本
技术领域：
的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。当前第1页12