一种柠檬鳞伞栽培用培养基及柠檬鳞伞的栽培方法与流程

本发明属于食用菌栽培
技术领域：
，具体涉及一种柠檬鳞伞的栽培培养基及其栽培方法。
背景技术：
中国拥有丰富的食用菌种质资源，食用菌种类约有350多种，日常生活中可见到的有香菇、猴头菇、银耳、草菇、平菇、双孢菇、金针菇、木耳、杏鲍菇、白灵菇等。食用菌含有丰富的矿质元素、蛋白质、维生素、氨基酸和少量的脂肪、糖类，有显著的降低胆固醇、提高免疫力、抗肿瘤作用，对提高人们的身体素质有重要意义。食用菌因其极佳的口感、鲜美的味道、丰富的营养，深受全世界人民的欢迎与喜爱。柠檬鳞伞(pholiotalimonella)是担子菌门，层菌纲，伞菌目，球盖菇科，鳞伞属的一个种。柠檬鳞伞秋季生长于温带阔叶树树干上，在美国东部、瑞士、荷兰和中国东北地区均有发现。该菌菌盖直径2.5～5cm，具散生反卷的浅红色或黄褐色鳞片，近平展或凸镜形直径并且有时中突，菌肉薄，菌褶为铁锈色、密且窄。菌柄稍弯生或直生，为灰白色或浅黄色，长3～7cm，粗3～5cm。易形成黄色菌环，菌环以上光滑、等粗。担孢子表面光滑，顶端稍平，有明显芽孔，正面为椭圆形或卵圆形，侧面为钝不等边形或钝豆形，菌丝具锁状联合。鳞伞属大多数为药用菌或食用菌，如翘鳞伞光帽鳞伞、金毛鳞伞、多脂鳞伞等，含有粗蛋白、脂肪、粗纤维、钙、磷、铁、维生素b、维生素c、烟酸和人体所必须的其它各种氨基酸。而柠檬鳞伞野生资源有限，目前野生柠檬鳞伞菌丝生长慢，子实体产量低，仍无法达到商业化人工栽培的目的，国内也没有柠檬鳞伞驯化栽培现成模式供人们应用开发这一重要食药用资源。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种柠檬鳞伞的栽培培养基及其栽培方法，所述栽培培养基能够满足柠檬鳞伞的生长需求，有效提高人工栽培柠檬鳞伞的产量。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种柠檬鳞伞栽培用培养基，包括水和如下重量份的固体组分：玉米芯76～80份、麸皮18～22份、葡萄糖0.9～1.1份和石膏0.9～1.1份；所述培养基的含水量为55wt％～65wt％。优选的，所述固体组分包括：玉米芯77～79份、麸皮19～21份、葡萄糖0.95～1.05份和石膏0.95～1.05份；所述培养基的含水量为58wt％～62wt％。本发明提供了一种柠檬鳞伞的栽培方法，包括如下步骤：1)将装有上述方案所述栽培培养基的料袋灭菌，将灭菌后的料袋冷却至25℃以下接种柠檬鳞伞菌种，得到柠檬鳞伞菌棒；2)将所述步骤1)的柠檬鳞伞菌棒发菌培养30～40天，得到发菌菌棒；所述发菌培养的温度为23～27℃，环境湿度为60～70％；3)将所述步骤2)的发菌菌棒脱袋进行出菇培养12～16d，得到柠檬鳞伞子实体；所述出菇培养的温度为10～25℃，环境湿度为80wt％～95wt％，环境中二氧化碳体积浓度小于0.1％。优选的，所述步骤1)中柠檬鳞伞菌种的制备方法包括以下步骤：a.将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种至pda培养基上在23～27℃下培养12～14d，得到母种菌丝体；b.将步骤a的母种菌丝体接种到原种培养基中在23～27℃下进行原种培养25～27d，得到的原种作为栽培用柠檬鳞伞菌种；所述原种培养基包括如下重量份的组分:玉米粒97～99份和石膏粉1.8～2.2份；所述原种培养基的含水量为58wt％～62wt％；所述原种培养基的ph值为5.2～5.8。优选的，将母种菌丝体接种到原种培养基之前还包括将所述步骤a的母种菌丝体进行扩大培养8～10d。优选的，所述扩大培养用的培养基为母种培养基；所述母种培养基，包括如下重量份的组分：玉米粉18～22份、葡萄糖10～22份、蛋白胨2.9～3.1份、磷酸二氢钾2.9～3.1份、硫酸镁1.45～1.55份、琼脂19～21份和水980～1200份，所述母种培养基的ph值为5.2～5.8。优选的，所述扩大培养时采用黑暗交替的方法进行光照；所述光暗交替的方式为按照光照培养11～13h后再黑暗培养11～13h，以此循环的方式进行培养。优选的，所述步骤b中原种培养的环境湿度为60wt％～70wt％。优选的，得到的柠檬鳞伞菌种保藏编号为cgmccno.15189。优选的，所述步骤3)中出菇培养的方式为脱袋出菇。本发明提供了一种柠檬鳞伞栽培用培养基，包括如下重量份的组分：玉米芯76～80份、麸皮18～22份、葡萄糖0.9～1.1份和石膏0.9～1.1份；所述培养基的含水量为55wt％～65wt％。本发明中，所述柠檬鳞伞栽培用培养基中玉米芯、麸皮提供天然碳氮源等营养成分；葡萄糖作为碳源，为菌种生长提供能量及营养；石膏的为菌丝生长提供硫和钙，同时作为缓冲剂，缓冲生长代谢过程中产生的有机酸，稳定ph。本发明提供的培养基各组分协调搭配，共同作用，能够满足柠檬鳞伞的生长需求，使柠檬鳞伞的产量提高60～70％。有效提高人工栽培柠檬鳞伞的产量。进一步的，本发明还提供了一种柠檬鳞伞的栽培方法，本发明提供的栽培方法，采用玉米芯脱袋出菇，能够提供合理的营养成分，同时脱袋出菇增大与氧气的接触面积，防止二氧化碳量过多抑制子实体发生，进而有效提高子实体产量。实施例数据表明：本发明的子实体产量为170～190g/袋，相较于对照组提高55～73％。生物保藏说明柠檬鳞伞(pholiotalimonella)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物所，保藏机构简称：cgmcc，保藏日期为2018年1月11日，生物保藏编号为cgmccno.15189，菌株编号为nma511。附图说明图1不同光照条件下母种菌丝体的生长情况；图2不同ph值下母种菌丝体的生长情况；图3为扩大培养后的母种菌丝体的生长情况；图4为栽培得到的柠檬鳞伞子实体。具体实施方式本发明提供了一种柠檬鳞伞栽培用培养基，包括水和如下重量份的固体组分：玉米芯76～80份、麸皮18～22份、葡萄糖0.9～1.1份和石膏0.9～1.1份；所述培养基的含水量为55wt％～65wt％。本发明提供的柠檬鳞伞栽培用培养基包括玉米芯。按重量份计，所述培养基包括76～80份玉米芯，优选为77～79份，最优选为78份。所述玉米芯的粒径优选为3～7目，更优选为5目。本发明中玉米芯提供天然碳氮源等营养成分。本发明对所述玉米芯的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，本发明实施例中采用石家庄市倍康食用菌科技有限公司的玉米芯。本发明提供的柠檬鳞伞栽培用培养基包括麸皮。按重量份计，所述培养基包括18～22份麸皮，优选为19～21份，最优选为20份。所述麸皮的粒径优选为10～20目，更优选为15目。所述麸皮的种类优选为麦麸。本发明中麸皮提供天然碳氮源。本发明对所述麸皮的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，本发明实施例中采用石家庄市倍康食用菌科技有限公司的麸皮。本发明提供的柠檬鳞伞栽培用培养基包括葡萄糖。按重量份计，所述培养基包括0.9～1.1份葡萄糖，优选为0.95～1.05份，最优选为1.0份。本发明中葡萄糖作为碳源，为菌种生长提供能量及营养。本发明对所述葡萄糖的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，本发明实施例中采用天津红岩化学试剂厂的葡萄糖。本发明提供的柠檬鳞伞栽培用培养基包括石膏。按重量份计，所述培养基包括0.9～1.1份石膏，优选为0.95～1.05份，最优选为1.0份。本发明中石膏为菌丝生长提供硫和钙，同时作为缓冲剂，缓冲生长代谢过程中产生的有机酸，稳定ph。本发明对所述石膏的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，本发明实施例中采用灵寿县远博矿产品加工厂的石膏。本发明提供的柠檬鳞伞栽培用培养基的含水量为55wt％～65wt％，优选为58wt％～62wt％，更优选为60wt％。本发明中，所述柠檬鳞伞栽培用培养基中玉米芯、麸皮提供天然碳氮源等营养成分；葡萄糖作为碳源，为菌种生长提供能量及营养；石膏的为菌丝生长提供硫和钙，同时作为缓冲剂，缓冲生长代谢过程中产生的有机酸，稳定ph。本发明提供的培养基各组分协调搭配，共同作用，能够满足柠檬鳞伞的生长需求，有效提高人工栽培柠檬鳞伞的产量。在本发明中，所述柠檬鳞伞栽培用培养基的制备方法，优选包括以下步骤：将所述玉米芯、麸皮、葡萄糖和石膏进行搅拌。所述搅拌的转速优选为1000～2000r/min，更优选为1500r/min。所述搅拌的时间优选为5～10min，更优选为8min。本发明提供了一种柠檬鳞伞的栽培方法，包括如下步骤：1)将装有上述方案所述栽培培养基的料袋灭菌，将灭菌后的料袋冷却至25℃以下接种柠檬鳞伞菌种，得到柠檬鳞伞菌棒；2)将所述步骤1)的柠檬鳞伞菌棒发菌培养30～40天，得到发菌菌棒；所述发菌培养的温度为23～27℃，环境湿度为60～70％；3)将所述步骤2)的发菌菌棒脱袋进行出菇培养12～16d，得到柠檬鳞伞子实体；所述出菇培养的温度为10～25℃，环境湿度为80wt％～95wt％，环境中二氧化碳体积浓度小于0.1％。本发明将装有上述方案所述栽培培养基的料袋灭菌，将灭菌后的料袋冷却至25℃以下时接种柠檬鳞伞菌种，得到柠檬鳞伞菌棒。所述料袋优选为耐高温聚丙烯菌袋。所述料袋的的规格优选为130×240×0.045mm。所述料袋的添装量优选为400g/袋。所述冷却的温度优选为25℃。本发明中，所述灭菌的方式为高压蒸气灭菌。所述灭菌的温度优选为120～130℃，更优选为121℃。所述灭菌的时间优选为1.8～2.2h，更优选为2.0h。本发明中，所述接种的接种量优选为接种3～5块菌块，更优选为4块。本发明中，所述柠檬鳞伞菌种的制备方法，优选包括以下步骤：a.将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种至pda培养基中在23～27℃下培养12～14d，得到母种菌丝体；b.将步骤a的母种菌丝体接种到原种培养基中在23～27℃下进行原种培养25～27d，得到的原种作为栽培用柠檬鳞伞菌种。本发明将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种至pda培养基中在23～27℃下培养12～14d，得到母种菌丝体。本发明中，所述菌肉菌种的接种量优选为2～4mm，更优选为3mm。所述培养的温度优选为25℃，所述培养的时间优选为13d。本发明对所述接种的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的接种方式即可。得到母种菌丝体后，本发明将所述母种菌丝体接种到原种培养基中在23～27℃下进行原种培养25～27d，得到的原种作为栽培用柠檬鳞伞菌种。本发明中，将母种菌丝体接种到原种培养基之前优选进行扩大培养。所述扩大培养的时间优选为8～10d，更优选为9d。所述扩大培养时优选采用光暗交替的方法进行光照。所述光暗交替的方式优选为按照光照培养11～13h后再黑暗培养11～13h，以此循环的方式进行培养；更优选为按照光照培养12h后再黑暗培养12h。所述光照的强度优选为150～250lux，更优选为200lux。本发明选用黑暗交替培养，并采用150～250lux的光照强度可以促进子实体的分化。所述扩大培养用培养基为母种培养基，优选包括以下含量的组分：玉米粉18～22份、葡萄糖10～22份、蛋白胨2.9～3.1份、磷酸二氢钾2.9～3.1份、硫酸镁1.45～1.55份、琼脂19～21份和水980～1200份，所述母种培养基的ph值为5.2～5.8；更优选为玉米粉20份，葡萄糖20份，蛋白胨3份，磷酸二氢钾3份，硫酸镁1.5份，琼脂粉20份，蒸馏水1000份。本发明中母种扩繁培养为后续人工驯化栽培提供所需的大量菌种。本发明中，所述原种培养时的接种量优选为3～5块所述扩繁母种菌块，更优选为4块。所述原种培养的温度优选为25℃。所述原种培养的时间优选为28d。所述原种培养基优选包括如下重量份的组分:玉米粒97～99份和石膏粉1.8～2.2份，所述原种培养基的ph值为5.2～5.8；更优选为玉米粒98份和石膏粉2.0份，所述原种培养基的ph值为5.5。所述玉米粒的粒度优选为3～5目，更优选为4目。所述原种培养基的含水量优选为58wt％～62wt％，更优选为60wt％。所述原种培养基在使用前优选进行灭菌。所述灭菌的温度优选为120～130℃，更优选为121℃。所述灭菌的时间优选为25～35min，更优选为30min。本发明将得到的柠檬鳞伞菌种进行保藏，保藏编号为：cgmccno.15189。本发明对所述蔗糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁和琼脂粉的来源没有特殊限定。本发明实施例中购自天津市福晨化学试剂厂。本发明对所述玉米粒和石膏粉的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。得到柠檬鳞伞菌棒后，本发明将所述柠檬鳞伞菌棒发菌培养30～40d，得到发菌菌棒；所述发菌培养的温度为20～30℃，湿度为60～70％。本发明中，所述发菌培养的时间优选为32～38d，更优选为35d。所述发菌培养的温度优选为23～27℃，更优选为25℃。所述发菌培养的时间优选为34～36d，更优选为35d。所述发菌培养的湿度优选为62～68％，更优选为65％。本发明中，调控湿度的方法优选为采用高压微雾系统喷雾加湿。得到发菌菌棒后，本发明将所述发菌菌棒脱袋进行出菇培养10～15d，得到柠檬鳞伞子实体；所述出菇培养的温度为10～25℃，湿度为80wt％～95wt％，环境中二氧化碳体积浓度小于0.1％。本发明中，所述发菌菌棒的方式优选为立棒。所述出菇培养的方式优选为脱袋出菇。所述出菇培养时优选采用自然光进行光照。所述出菇培养的时间优选为12～16d，更优选为14d。所述出菇培养的温度优选为18～22℃，更优选为20℃。所述出菇培养的湿度优选为80wt％～90wt％，更优选为85wt％。所述出菇培养时环境中二氧化碳体积浓度优选为0.1％。本发明中，采用菌袋脱袋的方式进行出菇，增加了菌棒与氧气接触的面积相关，促进子实体发生。下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1称量玉米芯760kg、麸皮220kg、葡萄糖9kg份和石膏11kg以1000r/min的转速搅拌10min得到栽培培养基(培养基的含水量为55wt％)。将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种按2mm的接种量接种至pda培养基上在23℃下培养14d，得到母种菌丝体。得到母种菌丝体后，将母种菌丝体在母种培养基中(母种培养基的组分为：玉米粉18g，葡萄糖22g，蛋白胨2.9g，磷酸二氢钾3.1g，硫酸镁1.45g，琼脂粉21g，蒸馏水980ml，在130℃下灭菌25min)，采用光暗交替(光照培养11h后再黑暗培养13h，光照强度为150lux，依此方式循环)的方式进行光照的条件进行扩大培养10d，得到扩大培养后的母种菌丝体。将扩大后的母种菌丝体按3块扩繁母种的接种量接种到原种培养基中(原种培养基的组分为：玉米粒97g和石膏粉2.2g，含水量为58wt％，ph5.2)在27℃下进行原种培养25d，得到栽培用柠檬鳞伞菌种。将装有栽培培养基的料袋在120℃下灭菌2.2h，冷却至25℃以下后按3块的接种量接种柠檬鳞伞菌种，在23℃，空气湿度为60％的条件下发菌培养40d，得到发菌菌棒。将发菌菌棒脱袋立棒，在10℃，空气湿度为80wt％，二氧化碳体积浓度为0.1％，自然光照的条件下进行出菇培养16d，得到柠檬鳞伞子实体。实施例2称量玉米芯800kg、麸皮180kg、葡萄糖11kg份和石膏9kg以2000r/min的转速搅拌5min得到栽培培养基(培养基的含水量为65wt％)。将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种按4mm的接种量接种至pda培养基上在27℃下培养12d，得到母种菌丝体。得到母种菌丝体后，将母种菌丝体在母种培养基中(母种培养基的组分为：玉米粉22g，葡萄糖10g，蛋白胨3.1g，磷酸二氢钾2.9g，硫酸镁1.55g，琼脂粉19g，蒸馏水1.2l，在120℃下灭菌35min)，采用光暗交替(光照培养13h后再黑暗培养11h，光照强度为250lux，依此方式循环)的方式进行光照的条件下进行扩大培养9d，得到扩大培养后的母种菌丝体。将扩大后的母种菌丝体按5块扩繁母种的接种量接种到原种培养基中(原种培养基的组分为：玉米粒99g和石膏粉1.8g，含水量为62wt％，ph5.8)在23℃下进行原种培养35d，得到栽培用柠檬鳞伞菌种。将装有栽培培养基的料袋(400g/袋)在130℃下灭菌1.8h，冷却至25℃以下后按5块的接种量接种柠檬鳞伞菌种，在27℃，空气湿度为70％的条件下发菌培养30d，得到发菌菌棒。将发菌菌棒脱袋立棒，在25℃，空气湿度为95wt％，二氧化碳体积浓度为0.1％，自然光照下进行出菇培养15d，得到柠檬鳞伞子实体。实施例3称量玉米芯780kg、麸皮200kg、葡萄糖10kg份和石膏10kg以1500r/min的转速搅拌8min得到栽培培养基(培养基的含水量为60wt％)。将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种按3mm的接种量接种至pda培养基上在25℃下培养13d，得到母种菌丝体。得到母种菌丝体后，将母种菌丝体在母种培养基中(母种培养基的组分为：玉米粉20g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂粉20g，蒸馏水1l，在121℃下灭菌30min)，采用光暗交替(光照培养12h后再黑暗培养12h，光照强度为200lux，依此方式循环)的方式进行光照的条件下进行扩大培养8d，得到扩大培养后的母种菌丝体，见图3(由图3可知，本发明制备得到的母种菌丝体菌丝洁白、浓密、粗壮，菌落边缘整齐、生长速度快)。将扩大后的母种菌丝体按4块扩繁母种的接种量接种到原种培养基中(原种培养基的组分为：玉米粒98g和石膏粉2.0g，含水量为60wt％，ph5.5)在25℃下进行原种培养30d，得到栽培用柠檬鳞伞菌种，保藏编号为cgmccno.15189。将装有栽培培养基的料袋(400g/袋)在121℃下灭菌2h，冷却至25℃以下后按4块的接种量接种柠檬鳞伞菌种，在25℃，空气湿度为65％的条件下发菌培养35d，得到发菌菌棒。将发菌菌棒脱袋立棒，在20℃，空气湿度为90wt％，二氧化碳体积浓度为0.1％，自然光照下进行出菇培养14d，得到柠檬鳞伞子实体，得到的柠檬鳞伞子实体如图4所示，由图4可以看出，本发明得到的柠檬鳞伞子实体菇体丛生。菌盖呈柠檬黄色，近平展或凸镜状，周身有黄褐色鳞片，菌柄细长、稍弯生或直生，菌褶密而窄，菌肉浅黄色)。对比例1栽培培养基的组分为：木屑780kg、麸皮200kg、葡萄糖10kg份和石膏10kg，除栽培培养基外，其他操作步骤同实施例3完全相同。实施例4以实施例1～3作为实验组1～3，以对比例1作为对照组1，分别测定各组的柠檬鳞伞子实体产量，具体结果如表1所示。表1不同组柠檬鳞伞子实体产量实验组1实验组2实验组3对照组1产量(g/袋)170180190110由表1可以看出，采用本发明提供的栽培培养基种子柠檬鳞伞，得到的柠檬鳞伞子实体产量为170～190g/袋，相较于对照组提高55～73％，表明本发明制备得到的栽培培养基有利于提高柠檬鳞伞的产量。对比例2将柠檬鳞伞的伞柄和伞盖交接处的菌肉接种按3mm的接种量接种至pda培养基中在25℃下培养12d，得到母种菌丝体。得到母种菌丝体后，采用土豆200g(去皮切片煮汁)，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，蛋白胨3g，硫酸镁1.5g，琼脂粉20g，水1l对母种菌丝体进行扩大培养12d，得到扩大培养后的母种菌丝体。实施例5以实施例1～3作为实验组1～3，以对比例2作为对照组2，分别测定各组的扩大培养后的母种菌丝体的生长速度、长势，具体结果如表2所示。表2不同扩大培养基对母种菌丝体的影响由表2可以看出，本发明提供的扩大培养基菌丝生长速度快，明显高于对照组。实施例6分别采用全黑暗或全光照的方式对实施例3制备得到的母种菌丝体进行扩大培养。除光照外，其他操作条件与实施例3完全相同。分别测定全黑暗、光暗交替、全光照的条件下母种菌丝体的生长情况，具体结果如附图1所示,采用黑暗交替的方式进行光照，菌丝体生长速度快，生长速度达到4.78mm/d，菌丝长势好。实施例7分别调整实施例3的母种培养基的ph至4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5和8，采用实施例3的操作条件进行扩大培养，并测定不同ph值下菌丝体的生长情况，具体结果如附图2所示，当母种培养基的ph为5.5时，菌丝体的生长速度最好，达到4.88mm/d。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12