本发明涉及菌种培养技术领域，尤其是涉及一种黑牛肝菌固体菌种的培养方法。
背景技术：
黑牛肝菌(phlebopusportentosus)，又称暗褐网柄牛肝菌，是一种珍贵的热带兼性菌根食用菌，分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚，新西兰及我国云南、广西和海南等地。黑牛肝菌品质鲜嫩、味道鲜美、营养价值丰富、高蛋白、低脂肪，富含17种人体必需氨基酸及丰富的磷、钾、钙、镁、铁、锌等人体必须的矿质元素，是较好的健康食品，并具有很好的药用价值，深受消费者喜爱。但黑牛肝菌的自然采摘数量极少，不能满足市场需求。黑牛肝菌也是目前我们认识的牛肝菌类食用菌中极少数发生进化、可以离开宿主树进行营腐生生活，用栽培腐生菌的方法在菇房内进行栽培，且获得产量的唯一牛肝菌种类。
固体菌种是目前工厂化、规模化栽培黑牛肝菌的唯一生产用栽培种。因三角瓶培养的液体菌种不适宜大面积栽培，发酵罐培养的液体菌种目前不能应用于生产。因基质紧实，菌丝生长慢，固体菌种瓶必须在中间打孔。但因牛肝菌的抗污染能力差，即使在培养的后期，只要有霉菌孢子进入菌种瓶或菌种袋的孔洞内，此霉菌孢子均会定植在培养料上，而接种前，孔洞中的霉菌又不能或非常难于被检查剔除，成为栽培的隐形污染，为生产带来巨大的污染隐患；另一方面，污染的培养基延长了养菌期，增加了栽培成本。因此，生产上迫切需要培养出无隐形霉菌污染，适宜黑牛肝菌工厂化栽培的培养基。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供黑牛肝菌固体菌种的培养方法，该培养法所用的培养基疏松多孔，肥分和腐殖质含量高，在黑牛肝菌培养时不需打孔，因而解决了打孔导致隐形污染的问题，污染率低，仅为1‰以下，菌丝培养周期短，至多30天即可长满基质。
为了实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：
黑牛肝菌固体菌种的培养方法，在以下培养基中培养黑牛肝菌固体菌种，所述培养基包括以下成分：按重量份计，
与现有技术相比，本发明的关键点在于采用了枫香树木发酵物，使其中的有机物分解成大量有效肥分和腐殖质，并优化两者的占比，从而增加培养基的疏松透气度，甚至在黑牛肝菌培养时不需打孔，因而解决了打孔导致隐形污染的问题。
同样培养条件下，本发明的培养方法在培养黑牛肝菌时污染率仅为1‰以下，而常规不含枫香树木发酵物的污染率高达5％左右。
另外，由于培养基疏松透气，所以菌丝的生长周期大大缩短，培养25天至30天菌丝长满基质，用于扩大接种栽培瓶。而同样条件下，常规培养基的生长周期在40天以上。
另外，本发明培养所用的培养基除了含有所述枫香树木发酵物外，还可以包含微量元素、无机盐、维生素、土壤以及其他辅料等黑牛肝菌必需的营养成分。
巨菌草是高产优质的菌草之一，用巨菌草作为培养料，已知可栽培香菇、灵芝等49种食用菌、药用菌。
甘蔗渣是榨糖后剩余的残渣，含2％的糖份，纤维粉碎为长1.0cm～2.0cm。本发明的甘蔗渣优选发酵后的甘蔗渣。
巨菌草、甘蔗渣不仅可改善培养基质的物理结构且增加菌丝生长需要的营养。本发明不仅仅是利用巨菌草、甘蔗渣的常规作用，而是利用其与枫香树木发酵物的协同作用，提高菌种生长速度。
以上培养基的制备方法还可以进一步改进，具体如下。
优选地，所述枫香树木发酵物通过以下方法制得：
使枫香树木进行第一次渥堆发酵2.5～4个月，所述第一次渥堆发酵时保持料堆中心的温度为55～75℃；然后粉碎、进行第二次渥堆发酵0.5～1.5个月，所述第二次渥堆发酵时保持料堆中心的温度为45～55℃。
优选地，所述枫香树木为厚0.2cm～0.5cm、宽0.8cm～1.0cm、长0.8cm～1.0cm的木片。
在发酵前粉碎枫香树木，可以提高发酵效率。
优选地，在第一次渥堆发酵后的所述粉碎为：粉碎成厚0.2cm～0.5cm、宽0.4cm～0.6cm、长0.4cm～0.6cm的颗粒。
这次粉碎一方面提高发酵效率，一方面借粉碎翻堆，提高好养细菌的繁殖效率，进而优化培养基中的肥分种类及含量。
本发明中，第一次渥堆发酵的温度可以为55～75℃中的任意值，例如55℃、60℃、65℃、70℃、75℃等，可以是恒温，也可以控制在较小范围内。第一次渥堆发酵的2.5～4个月中的任意时间，例如3个月、3.5个月等。
本发明中，第二次渥堆发酵的温度可以为45～55℃中的任意值，例如45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃等，可以是恒温，也可以控制在较小范围内。第一次渥堆发酵的0.5～1.5个月中的任意时间，例如10天、20天、半个月、40天等。
优选地，所述巨菌草、甘蔗渣与所述枫香树木发酵物的质量比为1～2:1～2：1～3，优选1：1：1。
优选地，所述培养基的含水量为51～55wt％。
含水量过高容易滋生污染，过低则不利于菌丝生长。
优选地，所述培养基的ph为4.0～6.0。
优选地，所述培养基包括以下成分：按重量份计，
优选地，所述培养基包括以下成分：按重量份计，
上文所述的培养基质，经拌料、装瓶、灭菌、冷却后，接入预先培养好的液体种菌球，在湿度≤50％、温度27℃～30℃、co2浓度1500ppm～2500ppm的条件下培养30天，即可得到优质的固体菌种。
经以上方法培养的菌种颗粒均匀，大小为0.2cm～0.5cm×0.4cm～0.5cm×0.4cm～0.5cm，接种栽培瓶后，菌种颗粒能均匀落入栽培瓶中间的孔洞内，使栽培瓶的上、中、下部均有菌种，培养初期菌瓶上、中、下部菌种同时萌发吃料，栽培瓶培养25天至30天菌丝长满基质，进入覆土生育期。
更优选地，所述固体菌种培养时，控制空气环境中霉菌孢子数量，以沉降菌检测法检测空气洁净度，使霉菌孢子数量≤1个/培养皿。
综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：
(1)在黑牛肝菌的培养基中加入经过特殊发酵处理的枫香树木，增强了培养基的疏松多孔性能，在使用时无需打孔，因而降低了培养时的污染率；
(2)枫香树木与巨菌草、甘蔗渣协同作用提高了黑牛肝菌丝的生长速度；
(3)优化培养基中基质与其他营养成分和辅料的配比，进而提高黑牛肝菌菌丝的生长速度；
(4)培养的菌种颗粒均匀，能加快菌丝封面速度，降低污染率及缩短培养周期。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
第一步、固体种培养基配方：
其中，枫香树木发酵物通过以下方法制得：
枫香树粉碎成厚0.2cm～0.5cm、宽0.8cm～1.0cm、长0.8cm～1.0cm的木片，然后堆制成2米高、3米宽、10米长的料堆，保持料堆中心温度65℃～75℃度，堆制发酵3个月；发酵3个月的木粒再次粉碎成厚0.2cm～0.5cm、宽0.4cm～0.6cm、长0.4cm～0.6cm，与麦粒大小相近的颗粒，然后进行二次发酵，保持料堆中心温度45℃～55℃，堆制发酵1个月，使木粒充分的软化、腐熟。
巨菌草晒干，粉碎成宽0.3cm～0.5cm、长0.4cm～0.8cm的短纤维，在使用前3-5天淋水预湿。
甘蔗渣纤维粉碎为长1.0cm～2.0cm，水分含量45％～50％，规制发酵1-3个月。
配制方法：
大麦、高梁准确称重，浸泡10小时，滤干水分备用；枫香树木发酵物及巨菌草、甘蔗渣纤维按体积准确量取；其他成分准确称重，然后所有原料加入拌料桶，加入适量的水，搅拌均匀，测基质水含量51％～-55％，得固体种培养基质。
第二步、培养料装瓶(袋)、灭菌、接种。
用1100ml的塑料瓶或塑料折角袋为培养容器，将培养料装入塑料瓶或塑料折角袋，装瓶或装袋后，瓶或袋的中部不用打孔。然后121℃灭菌100分钟，冷却后接入液体菌种，接种量为每瓶或每袋40ml。
固体种菌丝培养：设培养房湿度≤50％、温度27℃、co2浓度1500ppm培养菌丝生长，严格控制培养房霉菌孢子数量≦1个/培养皿，培养25天-30天，菌丝长满基质，得固体菌种。
上述培养所得的固体菌种，接入栽培瓶，每瓶接种量50g。菌种颗粒均匀，大小为0.2cm～0.5cm×0.4cm～0.5cm×0.4cm～0.5cm，均匀落入栽培瓶中间的孔洞内，使栽培瓶的上、中、下部均有菌种，培养初期菌瓶上、中、下部菌种同时萌发吃料，培养25天菌丝长满基质，进入覆土生育期。
较菌种颗粒不均匀或菌种颗粒较大，栽培瓶需要培养40天，菌丝才能长满固体菌种相比较，栽培瓶养菌期缩短10天，提高了养房利用率，降低了生产成本。
栽培瓶整个养菌期污染率1‰，与常规基质培养的固体种接种栽培瓶污染率5％相比较，污染得到了极大的控制。
实施例2-4
与实施例1的区别在于固体种培养基的配方不同，如表1，其他培养条件以及枫香树木发酵条件与实施例1相同，得到的固体菌种接种栽培瓶后，培养27天栽培瓶菌丝长满基质，污染率在0.8‰以下。
表1各实施例的培养基配方
实施例5
其与实施例1的区别仅在于枫香树木的发酵条件不同，具体如下：
枫香树粉碎成厚0.2cm～0.5cm、宽0.8cm～1.0cm、长0.8cm～1.0cm的木片，然后堆制成2米高、3米宽、10米长的料堆，保持料堆中心温度55℃～65℃度，堆制发酵4个月；发酵4个月的木粒再次粉碎成厚0.2cm～0.5cm、宽0.4cm～0.6cm、长0.4cm～0.6cm，与麦粒大小相近的颗粒，然后进行二次发酵，保持料堆中心温度50℃～55℃，堆制发酵15天，使木粒充分的软化、腐熟。
固体菌种接种栽培瓶后，28天栽培瓶菌丝长满基质，污染率0.8‰。
实施例6
培养基质装瓶(袋)、灭菌、接种，菌丝培养与实施例1相同，所不同的是：培养容器用1300ml的塑料瓶，设培养房湿度≤50％、温度29℃、co2浓度2500ppm培养菌丝生长，严格控制培养房霉菌孢子数量≦1个/培养皿，培养26天，菌丝长满基质，得固体菌种，接种栽培瓶，其污染率0.9‰。
实施例7
培养基质装瓶(袋)、灭菌、接种，菌丝培养与实施例1相同，所不同的是培养容器用1500ml的塑料瓶。
培养的菌种接种栽培瓶，30天内菌丝长满基质，污染率在0.8‰以下。
实施例8
培养基质装瓶(袋)、灭菌、接种，菌丝培养与实施例1相同，所不同的是：培养容器用1650ml的塑料瓶，而且固体种培养基的配方如下：
培养的菌固体菌种接种栽培瓶，26天内菌丝长满基质，栽培瓶污染率在0.8‰以下。
对比例1
与实施例1的区别仅在于不含甘蔗渣，其他条件相同，固体培养基配方为：
培养都在30天内菌丝长满基质，污染率1‰。
对比例2
因基质疏松透气性差，固体菌种菌丝生长慢，培养35天菌丝长满基质。固体种接种栽培瓶，因菌种颗粒大不均匀，大颗粒菌种不能落入栽培的底部影响菌丝萌发吃料，加之料面封面不严，污染率8‰，增加了8倍，培养40天菌丝才能长满基质，进入覆土出菇，养菌期增加了10天。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。