本发明涉及菌菇栽培领域，尤其是涉及一种栽培黑牛肝菌覆土方法。
背景技术
黑牛肝菌(phlebopusportentosus)，又称暗褐网柄牛肝菌，是一种珍贵的热带兼性菌根食用菌，分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚，新西兰及我国云南、广西和海南等地。黑牛肝菌品质鲜嫩、味道鲜美、营养价值丰富、高蛋白、低脂肪，富含17种人体必需氨基酸及丰富的磷、钾、钙、镁、铁、锌等人体必须的矿质元素，是较好的健康食品并具有很好的药用价值，深受消费者喜爱。但自然采摘数量极少，不能满足市场需求。黑牛肝菌也是目前我们认识的牛肝菌类食用菌中极少数可以离开宿主树，用栽培腐生菌的方法在菇房内进行栽培，且获得产量的唯一一种牛肝菌种类，目前市场上已完成黑肝菌工厂化栽培技术模式，且工厂化栽培是必然趋势。
黑牛肝菌栽培的特点：①菌丝长满培养基质后必须要覆土才能形成原基并出菇；②由于牛肝菌原基形成需要土壤中的微生物菌群(主要细菌)，因此，覆土材料不能消毒灭菌、不能喷洒杀菌药剂破坏土壤菌群；③因为黑牛肝菌自身不能分解利用木质素、纤维素等大分子物质，自身抵抗竞争性杂菌(主要是绿霉菌)的能力较弱。覆土期开放式的自然条件下，环境中带有大量的污染源(绿霉)，如果控制不好将造成10％～30％的污染，给生产带来巨大的损失；④从覆土层菌丝至原基形成期高温高湿，覆土材料中存在的霉菌孢子，极易大量繁殖产生污染，严重影响产量。因此，迫切需要一种既能促进出菇、又能降低污染的覆土方法。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种栽培黑牛肝菌覆土方法，此方法不仅能从根本上解决栽培牛肝菌覆土出菇期污染问题，而且有以下几方面的作用：①极显著促进牛肝菌菌丝生长、出菇的作用。覆土至第8d时进入出菇时，土层中牛肝菌菌丝建旺、浓密；②有防治霉菌污染的作用，覆土出菇及生育期平均污染率1％，极显著低于对照(不加发酵液)5％；③具有提前出菇、增加菇蕾数、增加子实体重的作用。覆土中添加有益微生物粪产碱杆菌，原基发生时间比对照提前了4d；子实体成熟数显著高于对照，是对照的5.07倍，平均单菇重极显著高于对照，是对照的8.7倍。
为了解决以上技术问题，本发明提供了以下技术方案：
一种栽培黑牛肝菌覆土方法，在对黑牛肝菌菌丝覆土培养时，所用的覆土材料包括以下成分：
覆土中自然微生物对黑牛肝菌子实体的生长起关键作用，覆土微生物中细菌可促进牛肝菌菌丝生长、促进出菇及对促进子实体生长的作用。
为此，本发明在覆土材料中掺入环状假单孢杆菌(bacilluscirculans)、粪产碱杆菌(alcaligenesfaecalis)、恶臭假单孢菌(pseudomonasputida)三种微生物，这三种微生物是一类广泛存在于泥土和水中革兰氏染色阴性细菌，呈球状、杆状或杆球状，可以抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、变形杆菌等微生物的生长，而后者的菌类正是抑制黑牛肝菌生长的微生物。本发明通过以上手段防治有害菌污染，促进了黑牛杆菌的生长，提高了黑牛肝菌的产量，还缩短了培育周期。
经统计，与不添加环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌和恶臭假单孢菌的培养相比，本发明具有以下优势：
(1)覆土出菇及生育期平均污染率1％左右，极显著低于对照组(污染率为5％)；
(2)本发明能提前出菇、菇蕾数增加、子实体重增加，原基发生时间至少比对照提前4d，子实体成熟数显著高于对照，是对照的5倍以上，平均单菇重极显著高于对照，是对照的8.7倍以上；
(3)生长形态好，出菇时，土层中牛肝菌菌丝建旺、浓密。
以上覆土方法还可以进一步改进，具体如下。
优选地，每1ml所述环状假单孢杆菌液中环状假单孢杆菌的含量为5.0×105～10.0×105细胞。
优选地，每1ml所述粪产碱杆菌液中粪产碱杆菌的含量为5.0×105～10.0×105细胞。
优选地，每1ml所述恶臭假单孢菌液中恶臭假单孢菌的含量为5.0×105～10.0×105细胞。
适当量的菌数量适宜土壤、菌群与黑牛杆菌互利共生，从而既提高黑牛杆菌的产量，缩短周期，又降低菌群单独培养的成本。
优选地，所述土壤为红土壤，优选为栽培位置的上风口方向的土场；优选为地表50cm以下的深层土壤。
选用以上土壤可以保证霉菌含量足够低，通常要求：以平板稀释涂布法检测土壤中的霉菌孢子含量，平均霉菌菌落数为5.0个/培养皿～10.0个/培养皿，培养皿直径为9cm。
优选地，所述草炭为经过发酵处理的草炭：
将草炭渥堆发酵，保持堆内草炭含水量50wt％～75wt％、堆中心温度40℃～45℃的温湿度条件，发酵30天～50天。
通过发酵可以培养有益细菌群快速繁殖，大量增加有益细菌的数量，使细菌成为优势菌群从而抑制绿霉菌繁殖，降低霉菌的数量，起到防治绿霉菌的作用。
优选地，所述覆土材料的ph为4.0～4.5；
酸性环境有利有益微生物的繁殖以及黑牛杆菌的生长。
优选地，所述覆土培养时覆土层的厚度为3～5cm。
优选地，所述覆土培养时的条件为：26℃～29℃、湿度90％～96％。
在此条件下可以缩短原基形成周期以及出菇周期。
优选地，所述覆土材料中，所述草炭与所述土壤的体积比为0.05～0.15：0.05～0.15。
例如0.05：0.15、0.15：0.05、1:1、0.1：0.15、0.1：0.05、0.15：0.1、0.05：0.1等。
优选地，所述环状假单孢杆菌液、所述粪产碱杆菌液和所述恶臭假单孢菌液为从所述土壤或所述草炭中分离纯化、培养而得。
从覆土用的土壤或草炭中分离得到菌群生物适应性好，更利于菌群的快速繁殖。
优选地，所述分离纯化的方法为：以牛肉膏蛋白胨为培养基，用平板涂布方法分离环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌菌株，并进行纯化。
优选地，所述培养的方法为液态发酵培养法：发酵培养温度28～33℃、种子接种量5％～15％、种子浓度105～1010个/ml、通气压力0.01～0.05mpa；
其中，所述培养所用的培养基包含以下成分：按重量百分比计，蔗糖0.1％～0.5％，玉米粉1％～3％，豆饼粉1％～3％，麦皮1％～3％，牛肉浸膏0.05％～0.1％，七水硫酸镁0.05％～0.1％，磷酸氢二钾0.05％～0.1％，水余量。
以上培养条件以及培养基可以促进环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌菌株的生长，缩短培养周期，提高生产效率。
利用以上方法培养环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌菌株，在发酵48小时候，发酵液中菌的数量约为5.0×105～10.0×105细胞/ml。
另外，利用本发明的上述方法，在添加发酵草炭的情况下，在覆土培养第2天，菌丝开始萌发爬土；第5天长至覆土层表面；第6天，菌丝满覆土层表面，菌丝浓、旺、密；覆土第7天喷崔蕾水进入崔蕾期；喷崔蕾水第4天出菇整齐，小菇米粒大，喷水第9天开始收菇，第11天收完。牛肝菌栽培采用此覆土方法，覆土期、出菇期污染率低(1％)极显著低于覆土土壤不加入有益细菌而直接进行覆土方法(覆土、出菇期污染率5％～8％)，出菇早、出菇整齐、菇生长管理措施统一、一级菇率提高20％、收菇期短、极显著提高了产量及品质，同时加快菇房周转，提高使用率，降低了成本。
综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：
(1)黑牛杆菌污染率低；
(2)黑牛杆菌出菇快；
(3)黑牛杆菌产量高；
(4)黑牛杆菌品质高。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
1.覆土材料配方
其中，各成分的来源如下。
草炭发酵：淋水预湿建堆，保持堆内草炭含水量50％～75％、堆中心温度40℃～45℃的温湿度条件，发酵30天。培养有益细菌群快速繁殖，大量增加有益细菌的数量，使细菌成为优势菌群从而抑制绿霉菌繁殖，降低霉菌的数量，起到防治绿霉菌的作用。
土壤选取：所述红壤土取于远离栽培厂区3公里～5公里以上，且在厂区的上风口方向的土场；去除50cm厚的表层及耕作层，取地表50cm以下的深层土壤；
所述土壤必须低霉菌含量。即以平板稀释涂布法检测土壤中的霉菌孢子含量，平均霉菌菌落数为5.0个/培养皿～10.0个/培养皿，培养皿直径为9cm。
有益细菌分离、纯化：环状假单孢杆菌从土壤分离、纯化。
以覆土用草炭、土壤、草炭加土壤混合物为分离材料，以牛肉膏蛋白胨为培养基，用平板涂布方法分离环状假单孢杆菌并进行纯化。
有益细菌发酵培养：纯化后环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌菌株，采用液态培养发酵的方法扩大培养，获得含环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌的发酵液。发酵培养方法为：发酵培养温度28～33℃、种子接种量5％、种子浓度105个/ml、通气压力0.01mpa。其中所述发酵培养基的组成按成份计含有蔗糖0.1％，玉米粉1％，豆饼粉1％，麦皮1％，牛肉浸膏0.05％，七水硫酸镁0.05％，磷酸氢二钾0.05％，水余量。发酵48小时获得发酵液。发酵液中环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌的含量为5.0×105细胞/ml。
2.覆土材料配制
取上述土壤0.05m3，上述草炭0.05m3，搅拌混匀，然后取上述细菌发酵液环状假单孢杆菌100ml，与清水混合后单用喷洒于混匀的覆土材料中，覆土材料中环状假单孢杆菌的含量1ml发酵液/0.1m3土，调整ph值4.0，得到覆土材料。
3.覆土出菇
将上述得到的覆土材料覆盖在预先培养好，已长满牛肝菌丝菌瓶(菌袋)表面。覆土层厚3cm。然后，将覆土后的菌瓶(菌袋)放于26℃、湿度96％的条件下培养牛肝菌菌丝在覆土层生长，然后进行崔蕾、出菇及培养子实体长大、采收。
覆土培养第2天，菌丝开始萌发爬土，第5天长至覆土层表面，第6天，菌丝满覆土层表面，菌丝浓、旺、密。覆土第7天喷崔蕾水进入崔蕾期。喷崔蕾水第4天出菇整齐，小菇米粒大，喷水第9天开始收菇，第11天收完。牛肝菌栽培采用此覆土方法，覆土期、出菇期污染率低(0.5％)极显著低于覆土土壤不加入有益细菌而直接进行覆土方法(覆土、出菇期污染率5％～8％)，出菇早、出菇整齐、菇生长管理措施统一、一级菇率提高20％、收菇期短、极显著提高了产量及品质，同时加快菇房周转，提高使用率，降低了成本。
实施例2
1.覆土材料配方
其中，各成分的处理如下。
草炭发酵：淋水预湿建堆，保持堆内草炭含水量50％～75％、堆中心温度40℃～45℃的温湿度条件，发酵40天。培养有益细菌群快速繁殖，大量增加有益细菌的数量，使细菌成为优势菌群从而抑制绿霉菌繁殖，降低霉菌的数量，起到防治绿霉菌的作用。
土壤选取：所述红壤土取于远离栽培厂区3公里～5公里以上，且在厂区的上风口方向的土场；去除50cm厚的表层及耕作层，取地表50cm以下的深层土壤；
所述土壤必须低霉菌含量。即以平板稀释涂布法检测土壤中的霉菌孢子含量，平均霉菌菌落数为5.0个/培养皿～10.0个/培养皿，培养皿直径为9cm。
有益细节分离、纯化：粪产碱杆菌从土壤分离、纯化。
以覆土用草炭、土壤、草炭加土壤混合物为分离材料，以牛肉膏蛋白胨为培养基，用平板涂布方法分离粪产碱杆菌并进行纯化。
有益细菌发酵培养：纯化后粪产碱杆菌采用液态培养发酵的方法扩大培养，获得含环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌的发酵液。发酵培养方法为：发酵培养温度30℃、种子接种量10％、种子浓度7.510个/ml、通气压力0.03mpa。其中所述发酵培养基的组成按成份计含有蔗糖0.25％，玉米粉2％，豆饼粉2％，麦皮2％，牛肉浸膏0.75％，七水硫酸镁0.75％，磷酸氢二钾0.75％，水余量。发酵48小时获得发酵液。发酵液中环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌的含量为7.5×105细胞/ml。
2.覆土材料配制
取上述土壤0.1m3，上述草炭0.1m3，搅拌混匀，然后取上述细菌发酵液粪产碱杆菌250ml，与清水混合后单用喷洒于混匀的覆土材料中，覆土材料中粪产碱杆菌的含量2.5ml发酵液/0.2m3土，调整ph值4.5，得到覆土材料。
3.覆土出菇
将上述得到的覆土材料覆盖在预先培养好，已长满牛肝菌丝菌瓶(菌袋)表面。覆土层厚4cm。然后，将覆土后的菌瓶(菌袋)放于28℃、湿度96％的条件下培养牛肝菌菌丝在覆土层生长，然后进行崔蕾、出菇及培养子实体长大、采收。
覆土培养第2天，菌丝开始萌发爬土，第5天长至覆土层表面，第6天，菌丝满覆土层表面，菌丝浓、旺、密。覆土第7天喷崔蕾水进入崔蕾期。喷崔蕾水第4天出菇整齐，小菇米粒大，喷水第9天开始收菇，第11天收完。牛肝菌栽培采用此覆土方法，覆土期、出菇期污染率低(0.75％)极显著低于覆土土壤不加入有益细菌而直接进行覆土方法(覆土、出菇期污染率5％～8％)，出菇早、出菇整齐、菇生长管理措施统一、一级菇率提高20％、收菇期短、极显著提高了产量及品质，同时加快菇房周转，提高使用率，降低了成本。
实施例3
1.覆土材料配方
各成分的处理如下。
草炭发酵：淋水预湿建堆，保持堆内草炭含水量50％～75％、堆中心温度40℃～45℃的温湿度条件，发酵50天。培养有益细菌群快速繁殖，大量增加有益细菌的数量，使细菌成为优势菌群从而抑制绿霉菌繁殖，降低霉菌的数量，起到防治绿霉菌的作用。
土壤选取：所述红壤土取于远离栽培厂区3公里～5公里以上，且在厂区的上风口方向的土场；去除50cm厚的表层及耕作层，取地表50cm以下的深层土壤；
所述土壤必须低霉菌含量。即以平板稀释涂布法检测土壤中的霉菌孢子含量，平均霉菌菌落数为5.0个/培养皿～10.0个/培养皿，培养皿直径为9cm。
有益细菌分离、纯化：恶臭假单孢菌从土壤分离、纯化。
以覆土用草炭、土壤、草炭加土壤混合物为分离材料，以牛肉膏蛋白胨为培养基，用平板涂布方法分离粪产碱杆菌并进行纯化。
有益细菌发酵培养：
纯化后恶臭假单孢菌菌株采用液态培养发酵的方法扩大培养，获得含环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌的发酵液。发酵培养方法为：发酵培养温度33℃、种子接种量15％、种子浓度1010个/ml、通气压力0.05mpa。其中所述发酵培养基的组成按成份计含有蔗糖0.5％，玉米粉3％，豆饼粉3％，麦皮3％，牛肉浸膏0.1％，七水硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.1％。发酵48小时获得发酵液。发酵液中环状假单孢杆菌、粪产碱杆菌、恶臭假单孢菌的含量为10.0×105细胞/ml。
2.覆土材料配制
取上述土壤0.15m3，上述草炭0.15m3，搅拌混匀，然后取上述细菌发酵液恶臭假单孢菌500ml，与清水混合后单用喷洒于混匀的覆土材料中，覆土材料中恶臭假单孢菌的含量5ml发酵液/0.3m3土，调整ph值5.0，得到覆土材料。
3.覆土出菇：将上述得到的覆土材料覆盖在预先培养好，已长满牛肝菌丝菌瓶(菌袋)表面。覆土层厚3～5cm。然后，将覆土后的菌瓶(菌袋)放于29℃、湿度96％的条件下培养牛肝菌菌丝在覆土层生长，然后进行崔蕾、出菇及培养子实体长大、采收。
覆土培养第2天，菌丝开始萌发爬土，第5天长至覆土层表面，第6天，菌丝满覆土层表面，菌丝浓、旺、密。覆土第7天喷崔蕾水进入崔蕾期。喷崔蕾水第4天出菇整齐，小菇米粒大，喷水第9天开始收菇，第11天收完。牛肝菌栽培采用此覆土方法，覆土期、出菇期污染率低(1％)极显著低于覆土土壤不加入有益细菌而直接进行覆土方法(覆土、出菇期污染率5％～8％)，出菇早、出菇整齐、菇生长管理措施统一、一级菇率提高20％、收菇期短、极显著提高了产量及品质，同时加快菇房周转，提高使用率，降低了成本。
实施例4
覆土材料配方：取土壤0.1m3，草炭0.1m3，搅拌混匀，然后环状假单孢杆菌125ml，粪产碱杆菌125ml，混用喷洒于混匀的覆土材料中，覆土材料中有益菌的含量为2.5ml发酵液/0.2m3土，调整ph值4.5。覆土材料中各成分的获得方法以及覆土材料配制方法与实施例1相同。
覆土出菇效果：
覆土出菇及生育期平均污染率0.4％左右，极显著低于对照组；能提前出菇、菇蕾数增加、子实体重增加，原基发生时间至少比对照提前4d，子实体成熟数显著高于对照，是对照的5.07倍，平均单菇重极显著高于对照，是对照的8.9倍；生长形态好，出菇时，土层中牛肝菌菌丝建旺、浓密，一级菇率提高22％。
实施例5
覆土材料配方：
取土壤0.15m3，草炭0.15m3，搅拌混匀，然后环状假单孢杆菌100ml，粪产碱杆菌100ml，恶臭假单孢菌100ml混用喷洒于混匀的覆土材料中，覆土材料中有益菌的含量为3ml发酵液/0.3m3土，调整ph值4.5。
覆土材料中各成分的获得方法以及覆土材料配制方法与实施例1相同。
覆土出菇效果：
覆土出菇及生育期平均污染率0.3％左右，极显著低于对照组；能提前出菇、菇蕾数增加、子实体重增加，原基发生时间至少比对照提前5d，子实体成熟数显著高于对照，是对照的5.2倍，平均单菇重极显著高于对照，是对照的9.1倍；生长形态好，出菇时，土层中牛肝菌菌丝建旺、浓密，一级菇率提高25％。
上文实施例中比较的对照例培养过程如下：
1.覆土材料配方
草炭0.05m3
红壤土0.05m3
ph4.0
其中，各成分的来源如下。
草炭发酵：淋水预湿建堆，保持堆内草炭含水量50％～75％、堆中心温度40℃～45℃的温湿度条件，发酵30天。培养有益细菌群快速繁殖，大量增加有益细菌的数量，使细菌成为优势菌群从而抑制绿霉菌繁殖，降低霉菌的数量，起到防治绿霉菌的作用。
土壤选取：所述红壤土取于远离栽培厂区3公里～5公里以上，且在厂区的上风口方向的土场；去除50cm厚的表层及耕作层，取地表50cm以下的深层土壤；
所述土壤必须低霉菌含量。即以平板稀释涂布法检测土壤中的霉菌孢子含量，平均霉菌菌落数为5.0个/培养皿～10.0个/培养皿，培养皿直径为9cm。
2.覆土材料配制
取上述土壤0.05m3，上述草炭0.05m3，搅拌混匀，调整ph值4.0，得到覆土材料。
3.覆土出菇
将上述得到的覆土材料覆盖在预先培养好，已长满牛肝菌丝菌瓶(菌袋)表面。覆土层厚3cm。然后，将覆土后的菌瓶(菌袋)放于26℃、湿度96％的条件下培养牛肝菌菌丝在覆土层生长，然后进行崔蕾、出菇及培养子实体长大、采收。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。