本发明属于花卉苗木繁育领域，特别是一种蝴蝶兰组培苗繁育方法。
背景技术：
蝴蝶兰属于单茎性气生兰，极少发育侧枝，难以进行常规的无性繁殖；另外蝴蝶兰在自然条件下不能完成授粉，很难得到种子，即便进行人工授粉获得种子，其种子内不含胚乳，自然条件下也很难萌发，发芽率极低，因此蝴蝶兰难以利用种子进行有性繁殖。目前主要利用组织培养方法进行蝴蝶兰的快速繁殖，蝴蝶兰的组织培养可以在短期内获得大量优质、整齐的蝴蝶兰幼小植株，具有增殖率高、速度快、不受季节限制、可周年生产和容易去除病毒等优点，是工厂化繁育的高效途径。
但是，现有的蝴蝶兰组培苗繁育存在以下问题：第一，蝴蝶兰采用愈伤组织等途径诱导不定芽繁殖时，后代会发生性状变异，导致不能保持母体的优良性状。第二，传统的蝴蝶兰组培光源是白色荧光灯，其发热量大，大量使用荧光灯作为光源，增加了室内温度的控制成本；而且光利用率低，大大浪费了资源。第三，白色荧光灯作为蝴蝶兰组培光源，丛生芽增殖率和生根数量均较低。第四，蝴蝶兰组培苗是在密闭无菌、营养供给充分、光照适宜、温度和湿度均恒的环境中生长的，一旦出瓶移栽前后环境条件差距较大时，试管苗对新环境适应能力差，导致移栽成活率低。第五，栽培基质也是影响蝴蝶兰组培苗规模化生产的一个重要因素。目前以智利进口水苔为蝴蝶兰组培苗的主要栽培基质，智利进口水苔能够较好的解决栽培基质的透气性问题，但随着培育时间增加，单纯用智利进口水苔构成的栽培基质会出现酸化及腐坏现象，容易引起蝴蝶兰组培苗根腐病；同时，由于智利进口水苔价格一路上涨，使得蝴蝶兰单株种苗生产成本价格高昂。
技术实现要素：
本发明的目的：在于提供一种蝴蝶兰组培苗繁育方法，使蝴蝶兰组培瓶苗保持优良性状，提升光源利用效率，提高丛生芽增殖率和生根率，增加蝴蝶兰组培苗对移栽后环境的适应能力，筛选出更利于蝴蝶兰组培苗工厂化繁育的栽培基质，最终获得一种蝴蝶兰组培苗高效、低成本的繁育方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种蝴蝶兰组培苗繁育方法，包括如下步骤：
（1）丛生芽诱导：以蝴蝶兰的花梗节段为外植体，消毒后切成长1-2厘米带休眠芽的切段接种在丛生芽诱导培养基上；在所述诱导培养基上先暗培养；再移入自然光光源下培养，得到丛生芽；
（2）丛生芽增殖：将步骤（1）得到的丛生芽，切割分成单芽或簇芽接种至增殖培养基中，并将其置于led红光光源下培养后转入自然光光源下培养，得到增殖扩繁的丛生芽；
（3）根尖诱导：将步骤（2）增殖扩繁的丛生芽分成单芽接种至根尖诱导培养基中，将其置于led复合光源下培养，得到蝴蝶兰组培苗；
（4）炼苗：待步骤（3）得到的蝴蝶兰组培苗基部有2-3个根尖时，移到附有遮阳网的大棚内炼苗，得到炼苗后的组培苗；
（5）蝴蝶兰组培苗移栽：待步骤（4）炼苗后的组培苗长出3-4片叶，2-4条根，根长2-3cm时，将蝴蝶兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用多菌灵溶液浸泡蝴蝶兰小苗根部后，再用消毒过的水苔包裹蝴蝶兰小苗根系，放在1.5寸营养钵中，并用马尾松树皮碎片、泥炭土和椰糠混合而成的第一基质填满营养钵，放在附有遮阳网的大棚内培养；
（6）移栽后施肥：蝴蝶兰组培苗有新根长出时开始施第一复合肥；
（7）蝴蝶兰组培苗换盆：待步骤（6）1.5寸营养钵中蝴蝶兰组培苗的根系在水苔中盘绕满时，在3.5寸营养钵底部垫发酵后的马尾松树皮块3-4cm厚，放入剥了1.5寸营养钵后的蝴蝶兰组培苗，再用马尾松树皮块、泥炭土和椰糠混合而成的第二基质填满营养钵；继续放在附有遮阳网的大棚内培养；
（8）换盆后施肥：步骤（7）蝴蝶兰组培苗换盆10天后，自然光光照增强至光照强度为10000-15000lux，施第二复合肥；
完成蝴蝶兰组培苗繁育。
优选地，所述步骤（1）中所述的丛生芽诱导培养基为ms+6-ba（6-苄氨基腺嘌呤）3mg/l+naa（萘乙酸）0.2mg/l+蔗糖20g/l+椰汁100ml/l+琼脂6.0g/l，ph值5.6-6.0。
优选地，所述步骤（1）暗培养温度为25±2℃，培养5-10天；所述步骤（1）自然光光源下培养时间为15-20天，光照强度为1500-2000lux，光照时间为12h/d。
优选地，所述步骤（2）中所述的丛生芽增殖培养基为ms+kt（激动素）1.0mg/l+6-ba2.0mg/l+naa0.5mg/l+椰汁100ml/l+蔗糖30g/l+琼脂6.0g/l，ph值5.6-6.0。
优选地，所述步骤（2）中所述的led红光光源的波长为630nm，光照时间为12h/d，培养时间为5-10天。
优选地，所述步骤（2）中自然光光源下培养的光照强度为1500-2000lux，光照时间为12h/d，培养时间为20-30天。
优选地，所述步骤（3）中所述的根尖诱导培养基为1/4ms+naa0.1mg/l+香蕉泥30g/l+土豆泥40g/l+蔗糖5g/l+琼脂6.0g/l，ph值5.6-6.0。根尖诱导培养基的作用是诱导蝴蝶兰组培苗生根。
优选地，所述步骤（3）中所述的led复合光源，是led红光和led蓝光两种单色光组合成led复合光源，其中红光led的波长为630nm；蓝光led的波长为450-480nm，红光和蓝光配比r：b（光量比例）=5：1。
优选地，所述步骤（3）led复合光源下培养的光照强度为1500-2000lux，光照时间为12h/d，培养时间为15-20天。
优选地，所述步骤（4）炼苗光源为自然光，炼苗温度控制在16-30℃，光照强度为4000-8000lux，空气相对湿度为70%-90%，炼苗时间为20-30天。
优选地，所述步骤（5）中所述的马尾松树皮碎片，其长为1-2cm，宽为0.5-1cm，经过腐熟后ph值为5.5-6.5，ec值为0.2-0.4ms/cm；
所述步骤（5）中所述第一基质按重量份计包括：60-70份的马尾松树皮碎片，15-20份的泥炭土，15-20份的椰糠；
所述步骤（5）中，用500-1000倍的多菌灵溶液浸泡蝴蝶兰小苗根部30-60秒后，用消毒过的水苔包裹蝴蝶兰小苗根系，放在1.5寸营养钵中，并用马尾松树皮碎片、泥炭土和椰糠混合而成的第一基质填满营养钵，放在附有遮阳网的大棚内培养，培养温度22-28℃，自然光光照，光照强度为4000-8000lux，空气相对湿度为70%-90%。
优选地，所述步骤（7）中所述的发酵后的马尾松树皮块，其长为3-8cm，宽为1-3cm，经过腐熟后使ph值5.5-6.5，ec值0.2-0.4ms/cm；所述步骤（7）中所述第二基质按重量份计包括：40-48份的马尾松树皮块，26-30份的泥炭土，26-30份的椰糠。
优选地，所述步骤（7）的大棚内培养条件为培养温度为20-30℃，自然光光照，光照强度为8000-10000lux，空气相对湿度为60%-80%。
优选地，所述步骤（6）中第一复合肥为稀释4000倍的n：p：k=10：30：20的复合肥，每15天施一次；所述步骤（7）第二复合肥为施稀释1000倍的n：p：k=25：10：10的复合肥，每10天施一次。
本发明有益效果如下：
①本发明采用蝴蝶兰的花梗节段为外植体，直接形成丛生芽，不经过愈伤组织阶段，保持了母体的优良性状。
②在丛生芽诱导、丛生芽增殖、炼苗等三个阶段均使用了自然光光源，目的是提高蝴蝶兰组培苗利用自然光光源进行光合作用的能力，对自然光光照的适应能力显著增强，同时降低生产成本。
③在丛生芽增殖阶段使用了led光源，以提高蝴蝶兰组培苗的增殖率。
④在根尖诱导阶段使用了led复合光源，以提高蝴蝶兰组培苗的根尖数量。
⑤在根尖诱导阶段使用1/4ms是使蝴蝶兰组培苗快速形成根尖；而同时配合使用5g/l蔗糖（远低于正常蔗糖浓度30g/l），目的是仅短期为蝴蝶兰组培苗生长提供碳源，在炼苗阶段能使蝴蝶兰组培苗更多的使用自然光进行光合作用，提供自生生长的碳源。
⑥在移栽基质方面，将马尾松树皮、泥炭土和椰糠等按比例混合而成作为栽培基质，马尾松树皮有机质含量丰富，且能使栽培基质保持较高的透气性，促进蝴蝶兰组培苗根系生长，有效抑制蝴蝶兰根腐病的发生；此外使用马尾松树皮和椰糠作为基质的成本相对进口水苔要低的多，能有效降低生产成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：于2016年在广西柳州柳北区一蝴蝶兰组培苗繁育基地进行，是以蝴蝶兰“大辣椒”品种为实施例。具体步骤如下：
（1）丛生芽诱导：以“大辣椒”蝴蝶兰的花梗节段为外植体，消毒后切成长1-2厘米带休眠芽的切段接种在丛生芽诱导培养基上，丛生芽诱导培养基为ms+6-ba3mg/l+naa0.2mg/l+蔗糖20g/l+椰汁100ml/l+琼脂6.0g/l，ph值5.6-6.0；在该诱导培养基上先暗培养7天，培养温度为25±2℃；再移入自然光光源下培养18天，光照强度为1500-2000lux，光照时间为12h/d；
（2）丛生芽增殖：丛生芽诱导25天后，苗高1-2厘米时，将丛生芽切割分成单芽或簇芽接种至增殖培养基中，丛生芽增殖培养基为ms+kt1.0mg/l+6-ba2.0mg/l+naa0.5mg/l+椰汁100ml/l+蔗糖30g/l+琼脂6.0g/l，ph值5.6-6.0，并将其置于波长为630nm的led红光光源下培养，光照时间为12h/d，培养温度为25±2℃；led红光光源培养7天后转入自然光光源下培养，培养温度为25±2℃，光照强度为1500-2000lux，光照时间为12h/d，自然光光源下培养23天；
（3）根尖诱导：将增殖扩繁得到的丛生芽分成单芽接种至根尖诱导培养基中，根尖诱导培养基为1/4ms+naa0.1mg/l+香蕉泥30g/l+土豆泥40g/l+蔗糖5g/l+琼脂6.0g/l，ph值5.6-6.0，将其置于led复合光源下培养，led复合光源是由led红光和led蓝光两种单色光组合成，其中红光led的波长为630nm，蓝光led的波长为450-480nm，红光和蓝光配比r：b（光量比例）=5：1，培养温度为25±2℃，光照强度为1500-2000lux，光照时间为12h/d，在led复合光源下培养15天；
（4）炼苗：待蝴蝶兰组培苗基部有2-3个根尖时，移到附有遮阳网的大棚内炼苗，炼苗光源为自然光，炼苗温度控制在16-30℃范围内，光照强度为4000-8000lux，空气相对湿度为70%-90%，该炼苗时间为25天；
（5）蝴蝶兰组培苗移栽：待组培苗长出3-4片叶，2-4条根，根长约2-3cm时，将蝴蝶兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用500-1000倍的多菌灵溶液浸泡蝴蝶兰小苗根部30-60秒后，用消毒过的水苔包裹蝴蝶兰小苗根系，放在1.5寸营养钵中；并用腐熟后的大小为1-2cm（长）×0.5-1cm（宽）的马尾松树皮碎片、泥炭土和椰糠混合而成的基质填满营养钵；该混合基质是按照质量百分比计是，65份的马尾松树皮碎片，15份的泥炭土，20份的椰糠混合而成；1.5寸营养钵填满基质后放在附有遮阳网的大棚内培养，培养温度为22-28℃，自然光光照，光照强度为4000-8000lux，空气相对湿度为70%-90%；
（6）移栽后施肥：蝴蝶兰组培苗有新根长出时开始施肥，施稀释4000倍的n：p：k=10：30：20的复合肥，每15天施一次；
（7）蝴蝶兰组培苗换盆：待1.5寸苗的根系在水苔中盘绕满时，在3.5寸营养钵底部垫发酵后的马尾松树皮块约3-4cm厚，放入剥了1.5寸营养钵后的蝴蝶兰组培苗，再放入腐熟后的大小为3-8cm（长）×1-3cm（宽）的马尾松树皮块、泥炭土和椰糠混合而成的基质填满营养钵，该混合基质是按照质量百分比计是，45份的马尾松树皮块，27份的泥炭土，28份的椰糠混合而成；3.5寸营养钵填满基质后继续放在附有遮阳网的大棚内培养，培养温度为20-30℃，自然光光照，光照强度为8000-10000lux，空气相对湿度为60%-80%；
（8）换盆后施肥：蝴蝶兰组培苗换盆10天后，光照逐渐增强，光照强度为10000-15000lux，施稀释1000倍的n：p：k=25：10：10的复合肥，每10天施一次。
本方法采用led光源和自然光交替使用，生产1万株“大辣椒”蝴蝶兰组培苗，在丛生芽诱导阶段、丛生芽增殖阶段和根尖诱导阶段共消耗电量为3200度；而使用普通白色荧光灯作为丛生芽诱导阶段、丛生芽增殖阶段和根尖诱导阶段的光源，生产1万株“大辣椒”蝴蝶兰组培苗在该阶段共消耗电量为4500度。其中，空调节省电量900度，光照节省电量省400度，合计节省电量1300度。可见，采用led光源和自然光交替使用，能降低“大辣椒”蝴蝶兰组培苗的用电成本。
本方法采用led光源和自然光交替使用，“大辣椒”蝴蝶兰丛生芽增殖率为3.2倍；而使用普通白色荧光灯，“大辣椒”蝴蝶兰丛生芽增殖率为2.9倍。采用led复合光源诱导根尖并采用自然光炼苗，“大辣椒”蝴蝶兰生根数量平均为3.5条；而使用普通白色荧光灯，“大辣椒”蝴蝶兰生根数量平均为3.1条。可见，采用led光源和自然光交替使用，能提高“大辣椒”蝴蝶兰组培苗的丛生芽增殖率和生根数量。
本方法使“大辣椒”蝴蝶兰组培苗在丛生芽诱导阶段、丛生芽增殖阶段采用led光源和自然光交替使用，并在led复合光源诱导根尖后放入大棚采用自然光炼苗，在炼苗阶段达到炼苗与促进根生长同步进行，此方法培育的“大辣椒”蝴蝶兰组培苗移栽成活率达98.2%；而丛生芽诱导阶段、丛生芽增殖阶段和生根阶段采用普通白色荧光灯作为光源，且均在组培室内进行，培育的“大辣椒”蝴蝶兰组培苗移栽成活率仅87.1%。可见，在丛生芽诱导阶段、丛生芽增殖阶段采用led光源和自然光交替使用，并在led复合光源诱导根尖后放入大棚采用自然光炼苗，在炼苗阶段使炼苗与促进根生长同步进行，能提高“大辣椒”蝴蝶兰组培苗移栽成活率。
本方法用水苔包裹“大辣椒”蝴蝶兰小苗根系，并放在1.5寸营养钵中；并用腐熟后的大小为1-2cm（长）×0.5-1cm（宽）马尾松树皮碎片、泥炭土和椰糠混合而成的基质作为“大辣椒”蝴蝶兰组培苗栽培基质；而在3.5寸营养钵中使用了腐熟后的大小为3-8cm（长）×1-3cm（宽）的马尾松树皮块、泥炭土和椰糠混合而成的基质作为“大辣椒”蝴蝶兰组培苗栽培基质，在“大辣椒”蝴蝶兰组培苗开花凋谢后，统计“大辣椒”蝴蝶兰组培苗根腐病率仅为0.8%，而且根腐病均为轻度；此外单株“大辣椒”蝴蝶兰的基质成本为0.12元。而全部使用水苔作为“大辣椒”蝴蝶兰组培苗栽培基质时，在“大辣椒”蝴蝶兰开花凋谢后，统计“大辣椒”蝴蝶兰根腐病率为11.7%，其中有18%的因根腐病而枯死；此外单株“大辣椒”蝴蝶兰的基质成本为0.17元。可见，本发明的移栽基质，能显著降低“大辣椒”蝴蝶兰组培苗的根腐病，同时也降低了培养基质成本。
以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。