本发明涉及植物组培技术领域，尤其涉及一种霍山石斛培养基。
背景技术：
霍山石斛(dendrobiumhuoshanensec.z.tangets.j.cheng)又称为米斛，属于兰科植物的一种，是一种名贵的中草药。野生的霍山石斛大多生长在水边的苔藓上或湿度较大的岩石缝隙间，还有一些古老的参天大树上也能找到它的足迹，它常与苔藓等喜阴凉的植物附生在一起。霍山石斛中富含能有效提高机体免疫功能的物质，如多糖、氨基酸类物质，还有多种石斛碱类，这些都是现在天然产物开发研究的热门话题。霍山石斛作为一种珍贵的中药，对于那些经常熬夜的加班族、身体虚弱的病人以及抽烟喝酒无节制的人群具有很好的保健作用。霍山石斛对人体各个器官的疾病都有特殊疗效，它对人的眼睛、血液还有人体的肾脏、肺等器官都有好处。霍山石斛还能有效减慢生物体衰老，起到美容养颜的作用，所以受到很多人的欢迎。它还有防止细胞突变和抵抗肿瘤的作用，成为想要保健和长寿的人群的首选。
超氧化物歧化酶(superoxidedismutase简称sod)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。它存在于各种生物体内，不管是动物还是植物，甚至是人或单细胞生物，都或多或少能找到它的足迹。超氧化物歧化酶是一种氧自由基清除剂，它就像是一个清洁工人清除掉体内对人体有害的氧自由基从而保护机体免受自由基的损害，维持组织的正常生理功能。也正是因为它的这种功能，它能有效保护机体中各个系统的稳定，提高机体免疫力，使机体免受炎症、肿瘤的侵扰，从而延缓机体的衰老。随着现代社会文明进步，人们的生活压力越来越大，环境污染和各种外在因素都会产生大量氧自由基，进而对机体产生危害，这时候超氧化物歧化酶就能发挥它的作用维持机体的稳定了。所以，超氧化物歧化酶在生物体的含量高低也间接反应了机体的衰老程度。由于sod酶具有的延缓衰老、防辐射、消炎、和抗癌等重要的生理作用，在生物医药、保健品、化妆品等行业有重要价值，因此对于培育高超氧化物歧化酶的含量的霍山石斛具有积极意义。
技术实现要素：
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种霍山石斛培养基，在培养基中添加金属配合物，进而改变霍山石斛外界生长环境，使得其sod酶活性更高。
本发明提出的技术方案如下：
一种霍山石斛培养基，包括如下各组分：ms培养基、naa、iba、金属配合物。
优选的，上述培养基包括如下各组分：ms培养基、0.2-0.6mg·l-1naa、0.2-0.6mg·l-1的iba、20-35mg·l-1金属配合物。
优选的，上述培养基还包括30-50g·l-1土豆和30-50g·l-1的香蕉。
优选的，上述培养基还添加有25g·l-1蔗糖和5g·l-1的琼脂。
优选的，所述金属配合物为锰配合物。
优选的，所述锰配合物为mn(me2ebc)cl2。
优选的，上述培养基的制备方法如下：将iba、naa和金属配合物按配比溶解在ms培养基中，同时将土豆和香蕉去皮后打成泥状一同加入到培养基内，灭菌即得。
优选的，上述培养基适用于霍山石斛幼苗的培育。
优选的，上述培养基所述培育条件为：温度25℃±2℃，光照条件2000lux，环境湿度为70％。
本发明的有益效果：通过协调各成分配比，使得石斛生长所需的营养充足，土豆和香蕉提供了足够的生长因子，在锰配合物的存在下能刺激石斛中sod酶的积聚，使得生长培育的石斛能够大量富集sod酶。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
各实施例中的试剂均为市售药品，具体见下表
各实施例各组分相对ms培养基的配比情况如下表
将iba、naa和金属配合物按配比溶解在ms培养基中，同时将土豆和香蕉去皮后打成泥状一同加入到培养基内，灭菌即得，培育条件为：温度25℃±2℃，光照条件2000lux，环境湿度为70％。
培养基对石斛sod酶活的影响
取实施例4中培养基(不含锰配合物)组分，按照0mg/l、1mg/l、5mg/l、25mg/l、125mg/l添加锰配合物mn(me2ebc)cl2。
试验药品：十二水磷酸氢二钠、邻苯三酚、tris试剂、盐酸、乙二胺四乙酸二钠、丙酮、二水磷酸二氢钠、蒸馏水均为市售分析纯，试验仪器型号如下：
实验方法
制作霍山石斛培养基
取十五个空白培养瓶，洗干净并用蒸馏水冲洗后晾干。以纯水为空白培养基，然后以锰配合物mn(me2ebc)cl2浓度为1mg/l、5mg/l、25mg/l、125mg/l的4组作为对照组，即以0mol/l、1mg/l、5mg/l、25mg/l、125mg/l五个浓度为一组，每组三瓶，盖上盖子，高压蒸汽灭菌后放置在培养室备用。
接种
选取实验室长势相似、大小相近的组培霍山石斛苗，在无菌组培室中接入灭菌后的培养基中,每瓶接约十株霍山石斛组培苗，共五组，每组三瓶。(接种时注意无菌操作)
培养
将接好霍山石斛的培养瓶放置在温度25℃±2℃，光照条件2000lux的培养室中培养1天。
制作sod粗酶液
首先配制ph为7.8，浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液。然后用镊子从培养了一天的培养瓶里夹出霍山石斛苗，洗干净晾干备用。称取霍山石斛新鲜根茎1g，用剪刀剪碎以便研磨，然后放入冰浴中的研钵中，加入一点石英砂，并加入4ml已经配好的磷酸缓冲液，在冰浴中研磨直到将霍山石斛根研磨成匀浆为止。取4ml研磨好的石斛匀浆至离心管中，于离心机中4℃10000r/min离心20min，取上清液即为sod粗提液。
粗酶的纯化
取出制备好的sod粗酶液倒入小烧杯中，加入预冷后的冷丙酮，加入丙酮为酶液的1.5倍，然后搅拌15min，烧杯中出现许多絮状沉淀。然后将出现沉淀的酶液置于离心机中4000r/min离心15min，倒掉上清液得到sod沉淀。用磷酸缓冲液溶解上述sod沉淀，然后将溶解后的sod酶液放入60℃的水浴锅中进行热处理15min，水浴后将其离心机中4000r/min下离心15min，取上清液即为sod酶液，放冰箱冷藏备用。
邻苯三酚自氧化法测sod酶活性
先分别配制0.1mol/l盐酸溶液和10mmol/l盐酸溶液，然后再配制ph为8.2，浓度为0.1mol/l的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(内含1mmol/ledta·2na)，为a液。最后再用配好的10mmol/l盐酸溶液配制4.5mmol/l的邻苯三酚盐酸溶液，为b液(注意邻苯三酚盐酸溶液配好后避光冷藏)。
邻苯三酚自氧化速率的测定：按照表1所示的空白管的加样量于10ml试管中按顺序进行加样。加入2.35mla液和2ml磷酸缓冲液后，放入恒温水浴槽中25℃保温20min。然后用移液枪准确移取0.15ml的4.5mmol/lb液(对照管换成10mmol/lhcl)。立即混匀后，迅速倒人比色皿中并在波长为325nm下用紫外可见分光计测其吸光度，记录间隔为30秒，记录4分钟，测定的吸光度值与时间呈线性关系，斜率即为邻苯三酚的自氧化速率△a。
sod活性的测定：基本同上述操作，按照表1的样液管的加样量按顺序进行加样，与空白管不同的是加入b液前先加入0.5mlsod样液，并减少同体积的磷酸缓冲液。其他操作均与上述相同，记录该曲线的斜率为△as。
表1sod活性测定加样表
邻苯三酚自氧化反应中，sod在每毫升反应液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50％的酶量为一个酶活力单位(u/g)。
结果计算:sod活力(u/g)＝[(△a一△as)/△a×100％]/50％×4.5/v×v1/m
u/g一sod酶活力单位
△a一邻苯三酚白氧化速率
△as样液或sod酶液抑制邻苯三酚自氧化速率
v一所加酶液或样液体积，单位为毫升(ml)
v1一酶液总体积
m一样品鲜重
4.5一反应液总体积，单位为毫升(ml)
计算结果保留三位有效数字。
空白管中不加酶液测得的是邻苯三酚的自氧化速率△a，为0.0631。
样1到样5分别是以添加锰配合物mn(me2ebc)cl2浓度0mg/l、1mg/l、5mg/l、25mg/l、125mg/l的霍山石斛的提取的sod酶液，由上述方法和公式分别算出每组不同浓度的锰配合物处理后的霍山石斛提取的sod酶液的抑制邻苯三酚的自氧化速率以及其相应的sod酶活性，共三组，如表2、表3和表4。
表2第一组的抑制邻苯三酚自氧化速率和酶活
表3第二组的抑制自氧化速率和酶活
表4第三组的抑制自氧化速率和酶活
可以由此得出，锰配合物浓度在浓度为25mg/l以内时，随着锰配合物mn(me2ebc)cl2浓度增加，霍山石斛sod酶活性下降。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。