一种优质高产的药用僵蚕养殖方法与流程

本发明涉及一种优质高产的药用僵蚕养殖方法。

背景技术：

僵蚕来源于蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus4～5龄的幼虫感染白僵菌beauveriaassiana(bals.)vuillant而致死的干燥体，是典型的动物药之一，具有抗惊厥、抗血栓、促纤溶、抗癌、降脂、美容等药理作用。随着僵蚕药理成分和功能方面的深入研究，应用将越来越广泛。僵蚕质量优劣会极大影响其研究及开发，因此优质高产僵蚕的养殖方法研究显得非常重要。

杨琼，等，药用白僵蚕的人工培养研究，广东蚕业44(4)：34-38公开了白僵蚕的人工培养方法，对菌种筛选、最佳接种剂量、适宜蚕品种等研究，当其接种浓度控制在10⁵个/ml～10⁶个/ml时，蚕体发病集中，在2d内基本达到90％以上发病死亡。申请号：201710507501.2，发明名称：一种规模化养殖僵蚕的施菌方法，公开了一种规模化养殖僵蚕的施菌方法，包括以下步骤，接种准备：将健康的蚕饲养在养殖房内，养殖房的墙壁和顶棚中均要设置隔热层，在给健康的蚕接种白僵菌前将养殖房密封；加湿施菌：将白僵菌粉与25-30℃的纯净水混合均匀加入振动补湿机中，通过振动补湿机向养殖房内释放含有白僵菌的水雾；接种环境控制：通过振动补湿机将养殖房内的湿度调整在75-90％，通过电加热器将养殖房内的温度调整在24-26℃，持续15-25分钟关闭振动补湿机和电加热器；接种后通风：振动补湿机和电加热器关闭后，打开养殖房的通风装置对养殖房内通风，使养殖房内的湿度和温度快速恢复到接种准备前的状态，最后对蚕给叶供食正常饲养。申请号：201510431732.0，发明名称：一种僵蚕的培养方法，公开了一种僵蚕的培养方法，包括下列步骤：a、制备孢子混悬液：取白僵菌孢子，制备孢子混悬液；b、侵染：饲养幼蚕，在幼蚕第四次休眠苏醒后12～24h，喷洒接种步骤a所得孢子混悬液，置于温度为23～25℃、湿度为95％以上的条件下饲养，4h之后重复喷洒接种一次；c、继续饲养：将步骤b经侵染后的幼蚕置于温度为23～25℃、湿度大于95％的条件下饲养48h，再在自然环境中饲养至家蚕成熟，收获，干燥处理，即得。申请号：201410421851.3，发明名称：一种改进的白僵蚕高效培养方法，公开了一种改进的僵蚕高效培养方法，该方法包括以下步骤：饲养家蚕，在四龄眠蚕蜕皮后的0-2h内，往家蚕体表喷洒白僵菌孢子悬液，5-6天后家蚕发病死亡，拣出死蚕进一步僵化，最后晒干或烘干后获得僵蚕。

目前僵蚕的养殖方法多参照丝茧养殖，即家蚕接种白僵菌后，每日定时给桑2～3次，待家蚕僵死变白，捡出晒干即可。丝茧养殖方法更多考虑产出更好的丝，而僵蚕着眼点在于产出优质高产的僵蚕。由于白僵菌对家蚕有较强的影响，对于丝茧的养殖方式是否同样适用于僵蚕，并未有相关文献报道，也未有更加细致的研究，这会影响优质僵蚕的生产。实际生产中存在着空心蚕、蚕体瘦小等情况，导致市场僵蚕质量参差不齐。因此，如何让家蚕提高感染率，如何确保所产僵蚕优质高产，对家蚕接种前后的养殖方式方法研究显得非常关键，是所产僵蚕质量优劣的重要因素。

技术实现要素：

本发明的技术方案是提供了一种优质高产的药用僵蚕养殖方法。

本发明提供了一种药用僵蚕养殖方法，它包括如下步骤：

a、前期养殖：以桑叶为食料，通过人工饲养鳞翅目经济昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus；定时给桑，每日给桑3～4次；加网除沙；眠前处理；

b、接种：

用含0.05％吐温80无菌水(23～28℃)配制白僵菌工作液(1×10⁶～1×10⁸个/mm²)，接种；

c、扩座：按600～700头/m²准备蚕台，逐日扩座；每10g蚁的五龄蚕需要准备蚕台面积不少于30m²；

d、僵死前饲喂：

每10g蚁五龄蚕盛食期的用叶量为60kg～80kg/天，或接种后第4天添食蜕皮激素；

e、采收加工：

僵死约80％时，30小时内完成采收，蚕体摊平，待发白，晒干、烘干或阴干。

其中，b步骤所述的接种前饲喂桑叶1次，待食尽后接种。

其中，所述的饲喂量为：每10g蚁的五龄蚕给桑量40kg。

其中，b步骤所述的接种前不饲喂，起蚕后8小时内接种。

其中，所述的接种时间为0-6小时。

其中，b步骤所述的接种方式为喷雾接种、浸润接种、饲喂接种。

其中，所述的接种方式为：喷雾接种。

其中，所述的接种次数是3次。

其中，c步骤所述的养殖密度为：每10g蚁的五龄蚕需蚕台面积35～40m²。

d步骤所述的僵死前饲喂处理以饲喂3次或添食蜕皮激素。

本发明一种优质高产的药用僵蚕养殖方法，采用喷雾接种法，不影响家蚕接种，且易于标准化操作，适合工业化大生产；本发明针对生产中家蚕起蚕不一情况，设置接种前不同饲喂处理，不仅有效保证家蚕僵死率，同时有利于家蚕生长，增加产量；本发明通过合理的密度配置，在提高产量的基础上，最大限度保证优质僵蚕生产；本发明在家蚕不同生长阶段，通过饲喂处理，能够兼顾家蚕生长和白僵菌接种效果，保证僵蚕药材质量，同时提高产量。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1接种前饲喂次数对僵蚕重量的影响

图2不同养殖密度对僵蚕鲜重增重的影响

图3不同养殖密度对僵蚕等级的影响

具体实施方式

实施例1僵蚕接种前饲喂方法

1、实验材料

蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus5龄的幼虫，白僵菌beauveriaassiana(bals.)vuillant，吐温-80。

2、试验设计

用含0.05％吐温80无菌水(23～28℃)配制白僵菌原液，采用血球计数板测定孢子浓度，将白僵菌原液稀释成1×10⁸个/mm2。设置4个饲喂次数，接种前饲喂0次，饲喂1次，饲喂2次，饲喂3次，每组3个重复，共计12个处理区。饲喂温度26±2℃，湿度70±5％rh，光照/黑暗(10：14)环境，给桑量以充分饱食为度。

3、结果与分析

3.1接种前饲喂对家蚕生长指标的影响

饲喂次数增加，僵死时间延长，僵蚕增重倍数越小,产量较低。由图1和表1可知，接种前饲喂次数增加，家蚕鲜重增长越大,可能是饲喂增大接种前家蚕鲜重,导致家蚕抵抗力增加，接种效果减弱，仅抵抗力较差的家蚕感染白僵病,因此产量较低。

表1接种前饲喂次数对僵蚕生长指标的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

3.2接种前饲喂对僵蚕接种效果的影响

由表2可知，饲喂次数增加，家蚕僵死率降低，所余活蚕增加，病死家蚕减少，表明饲喂不利于家蚕接种。由3.1可知，饲喂增强家蚕抵抗力，减少家蚕因接种带来的疾病，因此需要综合考虑僵蚕产量和接种效果。饲喂1次后接种，家蚕僵死率超过90％，家蚕僵死重较大，活蚕数较少，且产量较高，因此接种前可饲喂家蚕1次。

表2接种前饲喂次数对接种效果的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

3.3接种前饲喂对僵蚕质量的影响

由表3可知，饲喂次数增加，僵蚕浸出物呈上升趋势，可能是家蚕抵抗力增强，导致内部物质积累增加。白僵菌素亦呈上升趋势，可能是因为家蚕发育为白僵菌生殖生长提供足够营养，次生代谢产物升高。因此家蚕接种白僵菌有两种选择，第一，五龄家蚕起蚕后不饲喂，直接完成接种；第二，五龄家蚕起蚕后饲喂1次桑叶再完成接种。

表3接种前饲喂次数对僵蚕质量的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

实施例2僵蚕接种方法

1、实验材料

蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus5龄的幼虫，白僵菌beauveriaassiana(bals.)vuillant，吐温-80。

2、试验设计

2.1接种方式筛选

选取健康的五龄家蚕幼虫进行接种。用含0.05％吐温80无菌水(23～28℃)配制白僵菌原液，采用血球计数板测定孢子浓度，将白僵菌原液稀释成1×10⁸个/mm2。设置空白组和实验组，空白组不接种，实验组采用3种接种方式，方式1(浸润)、方式2(喷雾)、方式3(饲喂)，每组3个重复，共计12个处理区。接种后环境温度24～26℃，湿度90±5％rh，控制1小时后给桑量，以充分饱食为度。养殖温度26±2℃，湿度70±5％rh，操作详情见表4。

表4实验及接种操作详情

2.2接种次数筛选

选取健康的五龄家蚕幼虫进行接种，设置空白组和实验组，空白组接种含0.05％吐温80无菌水，实验组接种等量白僵菌工作液，设置4个接种次数，接种1次、接种2次、接种3次、接种4次，每组3个重复，共计15个处理区。接种后环境温度24～26℃，湿度90±5％rh，控制1小时后给桑量，以充分饱食为度。养殖温度26±2℃，湿度70±5％rh。

3、结果与分析

3.1接种方式筛选结果

表5接种方式对接种效果的影响

注：同列与浸染组比较*p<0.05

表6接种方式对僵蚕产量的影响

注：同列与浸染组比较*p<0.05，“-”表示未测得数据

表7接种方式对药材质量的影响

注：同列与浸染组比较*p<0.05，“-”表示未测得数据

由表5～6可知，空白组僵死率为2.75％，病死率为0.51％，活蚕率为95.41％，增长倍数最大为3.8，表明家蚕生长良好，环境无白僵菌等致病菌感染。

从僵死效果出发，浸染组和喷雾组僵死率均高于90％，但浸染组显著高于喷雾组和饲喂组，病死率差异不显著，表明浸染组接种效果更好，但浸染组不宜于工业大生产，操作繁琐。从产量出发，浸染组和喷雾组显著高于饲喂组。由表7可知，各接种方式所得僵蚕药材均达到《中国药典》2015年版规定的标准，但浸染组浸出物、白僵菌素含量显著低于喷雾组和饲喂组，浸染接种导致家蚕早期僵死，内含物质积累不高。考虑到规模化生产，接种方式采用喷雾接种。

3.2接种次数筛选结果

根据3.1试验结果，选择喷雾接种开展接种次数筛选。由表8可知，空白组僵死率为2.25％，病死率为1.89％，增长倍数最大为3.74，表明此家蚕生长良好，环境无白僵菌等致病菌感染。从生长状况出发，与喷雾1次对比，仅喷雾4次增长较慢，表明喷雾均匀度对家蚕生长有影响。从僵死效果出发，喷雾次数越多，僵死率越高，喷雾1次与4次相差12.11％，表明喷雾均匀度对家蚕接种效果影响显著。综合考虑接种效果和产量，同时生产中可操作性，喷雾次数选择3次。

表8喷雾次数对接种效果的影响

注：同列与喷雾1次比较*p<0.05，“-”表示未测得数据

表9喷雾次数对僵蚕产量的影响

注：同列与喷雾1次比较*p<0.05，“-”表示未测得数据

实施例3僵蚕接种时间选择方法

1、实验材料

蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus5龄的幼虫，白僵菌beauveriaassiana(bals.)vuillant，吐温-80。

2、试验设计

根据实施例1结果，由于家蚕饲喂1次所用时间不同，实际生产中不易控制，因此选择接种前不饲喂进行试验。

2.1接种时间初探

用含0.05％吐温80无菌水(23～28℃)配制白僵菌原液，采用血球计数板测定孢子浓度，将白僵菌原液稀释成1×10⁸个/mm2。分别于起蚕第0h，第2h，第4h，第6h接种白僵菌工作液，每组3个重复，共计12个处理区。饲喂温度26±2℃，湿度70±5％rh，光照/黑暗(10：14)环境，给桑量以充分饱食为度。

2.2接种时间优化

用含0.05％吐温80无菌水(23～28℃)配制白僵菌原液，采用血球计数板测定孢子浓度，将白僵菌原液稀释成1×10⁸个/mm2。分别于起蚕第0h，第8h，第16h，第24h、第32h接种白僵菌工作液，每组3个重复，共计15个处理区。饲喂温度26±2℃，湿度70±5％rh，光照/黑暗(10：14)环境，给桑量以充分饱食为度。

3、结果与分析

3.1接种时间初探试验结果

由表10和表11可知，五龄起蚕后，家蚕体壁较薄，容易感染，考察接种时间对家蚕接种效果的影响。从生长状况出发，0～6h相隔2小时接种，其鲜重、增重倍数、僵死重、产量差异不显著，表明该时间段内接种时间对家蚕生长无显著影响。僵死效果显示，接种时间延后，其僵死率均超过90％，表明该时间段内接种成功率较高，但活蚕率和病死率差异显著，时间2活蚕率较高、病死率较低，其综合低于5％，可能是家蚕自身差异引起，对家蚕生长影响不显著。综合考虑，0～6h相隔2h接种，家蚕生长和僵蚕产量差异不显著，因此五龄起蚕后需要在0～6h完成接种。

表10接种时间对僵蚕生长指标的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

表11接种时间对接种效果的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

3.2接种时间优化试验结果

由表12和表13可知，从生长状况出发，随着接种时间延后，家蚕鲜重、增重倍数、僵死重、产量显著降低，尤其时间5接种，产量只有0.68kg·m-2，表明接种时间延后不利于家蚕生长，且导致僵蚕生产产量降低。僵死效果显示，接种时间延后，其病死家蚕显著升高，僵死家蚕显著减少，表明接种时间会影响接种效果。综合考虑，接种时间延后影响家蚕生长状况，使家蚕抵抗力降低，导致其它病菌致死家蚕，同时不利于白僵菌接种成功，因此选择五龄起蚕0～8h完成接种。

表12接种时间对僵蚕生长指标的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

表13接种时间对接种效果的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

实施例4僵蚕养殖密度方法

1、实验材料

蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus5龄的幼虫，白僵菌beauveriaassiana(bals.)vuillant，吐温-80。

2、试验设计

选取食桑旺盛家蚕，分别设置400头/m2(密度1)、800头/m2(密度2)、1200头/m2(密度3)、1600头/m2(密度4)、2000头/m2(密度5)共5个养殖密度，3个重复，共计15个处理区。饲喂温度26±2℃，湿度70±5％rh，光照/黑暗(14：10)环境，给桑量以充分饱食为度。

3、结果与分析

3.1养殖密度对僵蚕重量的影响

在前期试验基础上，选择密度2为对照。由表可知，不同养殖密度对僵蚕鲜重有影响，第二天密度5僵蚕鲜重显著高于密度2，f(4,10)＝7.269，p<0.05，鲜重增重最大。随时间推迟，密度越大，鲜重显著降低，鲜重增重较小，第七天不同密度僵蚕增重差异不显著，可能是僵蚕第六天开始死亡，进食桑叶较少，自身物质代谢不足。由图2可知，前期密度越大，僵蚕鲜重增重越大，因此养殖僵蚕需要保证密度，随僵蚕生长发育逐步扩座加大给桑。

表14不同养殖密度对僵蚕鲜重的影响

注：同一列与密度2比较，*p<0.05

表15不同养殖密度对僵蚕鲜重增重的影响

注：同一列与密度2比较，*p<0.05

3.2养殖密度对僵蚕重量的影响

由表16和表17可知，不同养殖密度对僵蚕产量有影响，密度越大鲜产量和干物质产量显著升高，f(4,10)＝356.502，p<0.05，f(4,10)＝83.754，p<0.05。由图3可知，随密度增大，僵蚕产出一级品显著减少，f(4,10)＝11.067，p<0.05，以密度1产出一级僵蚕较多，密度2产出二级僵蚕较多，密度4产出三级僵蚕较多。结合市场价值，一级僵蚕150元/kg，二级120元/kg，三级80元/kg，每10g蚁的五龄蚕每日人工费80元，每平米蚕台10元，不同密度下，每10g蚁的僵蚕收益差异显著，f(4,10)＝4.731，p<0.05，以密度1、密度2、密度5收益较高。综合考虑，增加优质僵蚕生产建议密度1～密度2，即每10g蚁的五龄蚕需要准备蚕台面积不少于30m²。

表16不同养殖密度对僵蚕产量的影响

注：同一列与密度2比较，*p<0.05

表17不同养殖密度对僵蚕等级的影响(见图3)

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

实施例5家蚕僵死前饲喂方法

1、实验材料

蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus5龄的幼虫，白僵菌beauveriaassiana(bals.)vuillant，吐温-80。

2、试验设计

选取食桑旺盛家蚕，接种后第五天进行僵死前处理，分别设置4个饲喂处理，不饲喂桑叶(饲喂0次)、饲喂1次、饲喂2次、正常饲喂3次、饲喂3次含蜕皮激素药桑叶，3个重复，共计15个处理区。饲喂温度26±2℃，湿度70±5％rh，光照/黑暗(14：10)环境，给桑量以充分饱食为度。

3、结果与分析

3.1僵死前饲喂对僵蚕生产的影响

由表18可知，初鲜重差异不显著，家蚕初始对生长发育无显著影响。僵死重差异显著，饲喂2次、3次组较大，但饲喂3次并添食蜕皮激素相对较小，表明喂食次数对家蚕发育至关重要，同时添食蜕皮激素，促进其蜕皮，但消耗较大(排便、排尿)，因此僵死重较小。僵死率、病死率差异不显著，僵死率均大于90％，病死率均小于1％，因此家蚕僵死前2天饲喂处理对蚕病无显著影响。

表18僵死前饲喂处理对僵蚕生长指标的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

3.2僵死前饲喂对僵蚕质量的影响

由表19可知，患病僵蚕率差异显著，以饲喂2次、3次及蜕皮激素组较小。空心率差异不显著；丝腺体得率差异显著，以饲喂3次及蜕皮激素组较高。因此僵死前饲喂处理以饲喂3次或添食适量蜕皮激素较佳。

表19僵死前饲喂处理对僵蚕质量的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

目前僵蚕的养殖方法多参照丝茧养殖，即家蚕接种白僵菌后，每日定时给桑2～3次，待家蚕僵死变白，捡出晒干即可，所得僵蚕药材存在着空心蚕、蚕体瘦小等情况，质量参差不齐。本发明一种优质高产的药用僵蚕养殖方法，采用喷雾接种法，不影响家蚕接种，且易于标准化操作，适合工业化大生产；本发明针对生产中家蚕起蚕不一情况，设置接种前不同饲喂处理，不仅有效保证家蚕僵死率，同时有利于家蚕生长，增加产量；本发明通过合理的密度配置，在提高产量的基础上，最大限度保证优质僵蚕生产；本发明在家蚕不同生长阶段，通过饲喂处理和药剂添加，能够兼顾家蚕生长和白僵菌接种效果，保证僵蚕药材质量，同时提高产量。

实施例6适宜药用僵蚕生产的环境控制方法

1、实验材料

蚕蛾科昆虫家蚕bombyxmorilinnaeus5龄的幼虫。

实验方法

2.1接种方法

用含0.05％吐温80无菌水(23～28℃)配制白僵菌原液，采用血球计数板测定孢子浓度。将白僵菌原液稀释成1×107个/mm2。选取食桑旺盛五龄家蚕，接种白僵菌工作液，喷施3次，以蚕体见露珠为度。保持温度25±2℃，湿度90±5％rh，控制2小时后饲喂桑叶。

2.2养殖环境控制实验设计

本实验选取4个养殖条件，高湿环境、控温控湿环境、自然环境(24～30℃，55％～85％rh)、高温环境，具体信息如下：

表20养殖环境控制方法

实验结果与分析

3.1实验结果与分析

采用ibmspssstatisticsv21软件对生长指标进行分析，结果见表21。

表21不同养殖条件对僵蚕生长指标的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

表22不同养殖条件对僵蚕质量指标的影响

注：同一列不同小写字母表示p<0.05差异显著

家蚕接种白僵菌后，其养殖条件对僵蚕生产非常重要。由表可知，相比于自然环境的粗放养殖条件，选择对温度和湿度进行控制，家蚕僵死率、四丝腺环得率显著提高，病死率、患病僵蚕率、产量显著降低，表明控温和控湿环境下所得僵蚕质量较好。家蚕初鲜重差异不显著，增重倍数顺序为自然环境>高湿环境＝控温控湿>高温环境，但高温环境产量最低为0，其次为控温控湿环境。可能是高温环境抑制白僵菌繁殖，使家蚕无法僵化，导致家蚕死后黑化腐烂；饲喂管理存在差异，导致高湿环境和控温控湿环境产量存在差异；自然环境下白僵菌生长周期延长，家蚕的食桑量增加，导致产量较高。综合产量和质量考虑，养殖条件选择控温控湿环境。