本发明涉及水产繁殖技术领域，具体的说是涉及一种鲥鱼精液的保存方法。
背景技术：
鲥鱼为溯河产卵的洄游性鱼类，因每年定时初夏时候入江，其他时间不出现，因此十分珍贵，所以人们对鲥鱼的繁殖极为看重，鲥鱼人工授精采用的精液主要有两种，即新鲜精液和冷冻精液，前者常简称为鲜精，后者简称为冻精。为提高种鲥鱼的利用率，便于精液的保存及运输，一些种鲥鱼养殖场常制作冻精，用于鲥鱼的配种工作。但生产冻精的设备昂贵，保存运输过程需要及时补充液氮，精液解冻技术要求较高，鲥鱼冻精的受精率较低等，针对鲥鱼冻精的这些缺点，很难普及应用到各养殖场和养殖户；因而使用冻精大大限制了鲥鱼同期发情及人工授精相关技术的推广应用；
生产一线常常采用鲜精多用生理盐水进行稀释，这种方法仅可以满足现场采精，现场稀释，即时输精的生产需求；目前，市场上拥有大量的鲥鱼冻精稀释液及稀释保存液；鲜精稀释液及稀释保存液较少，其主要组份多为葡萄糖、柠檬酸钠、抗菌素，其精子活率，质膜完整率，顶体完整率不尽理想，且在48小时以后都有较大幅度的降低。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，针对以上现有技术存在的缺点提出一种鲥鱼精液的保存方法，不仅有效抑制了有害微生物的生长繁殖，而且降低了精子代谢率，有效的保持了鲥鱼精液的保存质量，节约了生产成本，操作步骤方便。
本发明解决以上技术问题的技术方案是：
一种鲥鱼精液的保存方法，将抗冻剂、鲥鱼精液和稀释液按体积比1:1：5混合后，并在5℃保存；稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：15-20%，氯化钾：7-14%，氯化钙：5-10%，碳酸氢钠：5-10%，绿原酸：1-2%，甘油：1-3%，葡萄糖：3-5%，卵磷脂：8-15%，柠檬酸钠：1-3%，链霉素：1-2%，聚谷氨酸钠：1-3%，双歧杆菌：1-3%，余量为乳酸菌；抗冻剂体积百分比成分为：二甲基亚砜：30％、甘油：20％、乙二醇：30%，二甲基乙酰胺：20％。
本发明进一步限定的技术方案是：
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：15%，氯化钾：7%，氯化钙：5%，碳酸氢钠：5%，绿原酸：1%，甘油：1%，葡萄糖：3%，卵磷脂：8%，柠檬酸钠：1%，链霉素：1%，聚谷氨酸钠：1%，双歧杆菌：1%，余量为乳酸菌。
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：20%，氯化钾：14%，氯化钙：10%，碳酸氢钠：10%，绿原酸：2%，甘油：3%，葡萄糖：5%，卵磷脂：15%，柠檬酸钠：3%，链霉素：2%，聚谷氨酸钠：3%，双歧杆菌：3%，余量为乳酸菌。
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：18%，氯化钾：12%，氯化钙：8%，碳酸氢钠：8%，绿原酸：1%，甘油：1%，葡萄糖：3%，卵磷脂：10%，柠檬酸钠：2%，链霉素：1%，聚谷氨酸钠：2%，双歧杆菌：2%，余量为乳酸菌。
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于100-110℃高压灭菌10-12min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于55-65℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解10-15min，然后于120℃高压灭菌15-20min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心10-15min，吸取氯化钠注射液10-15ml，于15-25℃静置8-12min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到35-40℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于100℃高压灭菌10min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于55℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解10min，然后于120℃高压灭菌15min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心10min，吸取氯化钠注射液10ml，于15℃静置8min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到35℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于110℃高压灭菌12min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于65℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解15min，然后于120℃高压灭菌20min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心15min，吸取氯化钠注射液15ml，于25℃静置12min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到40℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
前述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于105℃高压灭菌11min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于60℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解12min，然后于120℃高压灭菌18min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心12min，吸取氯化钠注射液13ml，于20℃静置10min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到38℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
采用本发明的技术方案有益效果是：首次使用活性菌维持鲥鱼精子活度，有效抑制了有害微生物的生长繁殖，为精子营造有利的活性环境，延缓精子被氧气激活后开始活动的时间，有效调节了液体环境渗透压，降低了精子的代谢率，减少了能量消耗，从而延长了精子寿命；k+和ca2+是鱼类精子活力的重要调节因素，可提高精子活力，延长寿命；该保存液科学稀释精液浓度适中，操作简单，成本低廉，可以有效的保存鲥鱼精液，可在生产中广泛推广使用。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种鲥鱼精液的保存方法，将抗冻剂、鲥鱼精液和稀释液按体积比1:1：5混合后，并在5℃保存；
稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：15%，氯化钾：7%，氯化钙：5%，碳酸氢钠：5%，绿原酸：1%，甘油：1%，葡萄糖：3%，卵磷脂：8%，柠檬酸钠：1%，链霉素：1%，聚谷氨酸钠：1%，双歧杆菌：1%，余量为乳酸菌；
抗冻剂体积百分比成分为：二甲基亚砜：30％、甘油：20％、乙二醇：30%，二甲基乙酰胺：20％；
上述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于100℃高压灭菌10min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于55℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解10min，然后于120℃高压灭菌15min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心10min，吸取氯化钠注射液10ml，于15℃静置8min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到35℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
实施例2
本实施例提供一种鲥鱼精液的保存方法，将抗冻剂、鲥鱼精液和稀释液按体积比1:1：5混合后，并在5℃保存；
稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：20%，氯化钾：14%，氯化钙：10%，碳酸氢钠：10%，绿原酸：2%，甘油：3%，葡萄糖：5%，卵磷脂：15%，柠檬酸钠：3%，链霉素：2%，聚谷氨酸钠：3%，双歧杆菌：3%，余量为乳酸菌；
抗冻剂体积百分比成分为：二甲基亚砜：30％、甘油：20％、乙二醇：30%，二甲基乙酰胺：20％；
上述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于110℃高压灭菌12min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于65℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解15min，然后于120℃高压灭菌20min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心15min，吸取氯化钠注射液15ml，于25℃静置12min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到40℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
实施例3
本实施例提供一种鲥鱼精液的保存方法，将抗冻剂、鲥鱼精液和稀释液按体积比1:1：5混合后，并在5℃保存；
稀释液体积百分比成分为：氯化钠注射液：50%，纯水：18%，氯化钾：12%，氯化钙：8%，碳酸氢钠：8%，绿原酸：1%，甘油：1%，葡萄糖：3%，卵磷脂：10%，柠檬酸钠：2%，链霉素：1%，聚谷氨酸钠：2%，双歧杆菌：2%，余量为乳酸菌；
抗冻剂体积百分比成分为：二甲基亚砜：30％、甘油：20％、乙二醇：30%，二甲基乙酰胺：20％；
上述的鲥鱼精液的保存方法，稀释液的制备包括以下步骤：
（一）量取100ml纯水，于105℃高压灭菌11min，获得灭菌纯水a；
（二）称取柠碳酸氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、双歧杆菌、链霉素以及乳酸菌，分别加入到灭菌纯水a中，于60℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解12min，然后于120℃高压灭菌18min，获得溶液b；
（三）无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于5℃7500g离心12min，吸取氯化钠注射液13ml，于20℃静置10min，获得卵黄离心上清液c；
（四）称取氯化钾以及氯化钙，分别加入到卵黄离心上清液c中，顺时针搅拌混匀，获得溶液d；
（五）取出溶液b，待其温度降到85℃以下时，称取绿原酸、甘油、卵磷脂以及聚谷氨酸钠，加入到溶液b中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液e；
（六）待溶液e温度降到38℃时，将溶液d缓缓倒入，混匀即可。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。