本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种炽椇子的组织培养快繁方法。
背景技术：
炽椇子为鼠李科植物,取其干燥成熟种子。主产陕西、广东、湖北、浙江、江苏等，秋季果实成熟时采收，将果实摘下，碾碎果壳，筛出种子，晒干。气微弱，味苦而涩。具有醒酒、清热、止渴利尿。用于酒醉，烦热，口喝，小便不利。目前，炽椇子种苗主要通过种子和扦插方式繁育，种子播种虽然可在短时间内获得大量幼苗，但因炽椇子后代易发生性状分离，遗传性状不稳定，易丢失亲本的优良性状。而扦插方式繁育需要大量的枝条，且从扦插到移栽大田需2个月，耗时较长。因此，釆用植物组织培养技术来缓解其种苗紧张压力、进行可持续开发利用是十分必要的。因此，本发明以炽椇子带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了炽椇子离体再植株，建立炽椇子组织培养快速繁殖技术体系，对于进行炽椇子优良品种的快速繁殖和大面积推广,促进产业化发展具有重要意义。对比文件1，申请号：cn201310400879，发明名称：一种枳棋子果汁饮料及其制备工艺，其中枳棋子果汁由以重量百分比计的下列组分组成：枳棋子10-15；木瓜10-15；白砂糖10-12；黄原胶0.015-0.04；羧甲基纤维素钠0.015-0.04；山梨酸钾0.3；纯净水加至100。本发明是一种以枳棋子、木瓜为主要原料经调配、灭菌、灌装而成的保健型饮品，营养成分高，口感好，能够满足人们对于保健饮品的需求，枳棋子具有养阴、生津、润燥、止渴、凉血等作用。本案与对比文件不同。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种炽椇子的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段成功获得了炽椇子离体再植株，建立炽椇子组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种炽椇子的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：
步骤（1）,诱导不定芽：选取炽椇子当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒23秒种后，用无菌水冲洗8次后置于0.1%的升汞溶液中消毒33分钟，然后用无菌水冲洗9次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成7cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：ms+0.8mg/ltdz+2.3mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+33g/l蔗糖+6.3g/l琼脂，ph为5.9;
步骤（2）,继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照18小时，光照强度为2300lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，33天转接一次；增殖培养基为：ms+2.3mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+33g/l蔗糖+6.3g/l琼脂，ph为5.9;
步骤（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至7cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2ms+0.8mg/liba+2.3mg/lggr+33g/l蔗糖+6.3g/l琼脂，ph为5.9。
步骤（4）,炼苗移栽：将长至11cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗10天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙(8：2：2）混合成的基质中并定植于大田中。
本发明的优点是：炽椇子种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以炽椇子带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了炽椇子离体再植株，建立炽椇子组织培养快速繁殖技术体系，对于进行炽椇子优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进炽椇子的产业化发展具有重要意义。本发明组织培养快繁方法，具有简单、易行、经济的特点。通过本发明育成利用植物组织培养技术进行炽椇子种苗规模化生产，建立了炽椇子组培苗移栽成活率达到98%以上，可以为炽椇子规模化种植提供优质种苗保障。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）诱导不定芽：选取炽椇子当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒15秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.1%的升汞溶液中消毒18分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成7cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25℃条件下全暗培养21天即可诱导形成不定芽，污染率低至8%以下，不定芽诱导率可达93%。所述的诱导培养基为：ms+0.5mg/ltdz+1.5mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+23g/l蔗糖+4.8g/l琼脂，ph为5.6;
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1800lx，培养温度为25℃的条件下培养，23天转接一次，增殖系数为9.8。所述的增殖培养基为：ms+1.8mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+28g/l蔗糖+5.7g/l琼脂，ph为5.6；
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至7cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照17小时，光照强度为2800lx，培养温度为25℃的条件下培养13天即开始生根，生根率可达96.5%。所述的生根培养基为：1/2ms+0.6mg/liba+1.3mg/lggr+18g/l蔗糖+3.8g/l琼脂，ph为5.6。
（4）炼苗移栽：将长至11cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：2：2）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99%。
实施例2：
（1）诱导不定芽：选取炽椇子当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒17秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.1%的升汞溶液中消毒17分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于26℃条件下全暗培养16天即可诱导形成不定芽，污染率低至9%以下，不定芽诱导率可达96%。所述的诱导培养基为：ms+0.6mg/ltdz+1.8mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+22g/l蔗糖+4.2g/l琼脂，ph为5.7。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为2200lx，培养温度为26℃的条件下培养，27天转接一次，增殖系数为9.5。所述的增殖培养基为：ms+1.2mg/l6-ba+0.4mg/lnaa+32g/l蔗糖+5.7g/l琼脂，ph为5.7。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至6cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照17小时，光照强度为3200lx，培养温度为26℃的条件下培养16天即开始生根，生根率可达98%。所述的生根培养基为：1/2ms+0.6mg/liba+1.4mg/lggr+20g/l蔗糖+6.0g/l琼脂，ph为5.7。
（4）炼苗移栽：将长至10cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：2：1）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为100%。
实施例3：
（1）诱导不定芽：选取炽椇子当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒23秒种后，用无菌水冲洗7次后置于0.1%的升汞溶液中消毒33分钟，然后用无菌水冲洗9次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成7cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于28℃条件下全暗培养23天即可诱导形成不定芽，污染率低至3%以下，不定芽诱导率可达88%。所述的诱导培养基为：ms+0.3mg/ltdz+1.8mg/l6-ba+0.6mg/lnaa+28g/l蔗糖+4.8g/l琼脂，ph为5.9。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照18小时，光照强度为2300lx，培养温度为28℃的条件下培养，23天转接一次，增殖系数为8.5。所述的增殖培养基为：ms+1.4mg/l6-ba+0.6mg/lnaa+33g/l蔗糖+4.1g/l琼脂，ph为5.9。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至7cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照17小时，光照强度为2300lx，培养温度为28℃的条件下培养13天即开始生根，生根率可达100%。所述的生根培养基为：1/2ms+0.6mg/liba+2.1mg/lggr+23g/l蔗糖+4.8g/l琼脂，ph为5.9。
（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：1：2）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99%。