本发明属于植物杀菌剂技术领域，具体涉及一种植物复方杀菌剂及其制备方法和应用。
背景技术：
我国植物资源十分丰富，仅药用植物的种数就达8000多种，其中相当一部分具有多种杀菌活性成分，包括萜类、生物碱类、酰胺类、长链碳烷和脂肪酸类、含氮含硫化合物类、芳香化合物类、酚类、黄酮类及芳香族化合物等。如假臭草醇提物可降低柑橘苗新梢上柑橘木虱的产卵量，其精油对柑橘木虱成虫具有驱避作用；鱼腥草的醇提物对羟基自由基(·oh)、超氧自由基(o2－·)和亚硝酸盐(no2－)的清除效果显著，且对多种细菌和部分真菌病原菌有抑制和杀灭作用；银杏叶中含有30余种黄酮化合物和萜类、酚类、微量元素及氨基酸等有效成分，其黄酮粗提物对细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)与真菌(禾谷镰刀菌、烟草赤星病菌)均有一定的抑菌效果；板蓝根的提取物对细菌及病毒具有很好的抑制和杀灭作用；连翘、穿心莲等对病原细菌有很好的抑制作用；利用这些具有天然杀菌作用的植物资源，结合一些已发现的增强植物抗逆性的高效、安全、廉价易得的化合物，开发出新型、绿色、无残留、无污染的环保杀菌剂已势在必行。
技术实现要素：
本发明即综合上述植物资源在抑菌杀菌成分差异及对不同种属病原微生物杀菌效果方面的优势，开发出一种复方剂型植物杀菌剂。该植物杀菌剂对青枯菌、柑橘沙皮病有较强的杀灭能力，对黄龙病病原菌也有一定程度抑制效应；本发明对人体无毒，剂型为乳浊液，使用安全，喷施后植物易吸收，对环境无污染，具有较强的推广应用价值。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种植物复方杀菌剂，由以下原料按质量比制成：假臭草茎叶:银杏叶:鱼腥草:黄芩:板蓝根:连翘:穿心莲:复硝酚钠:op-10乳化剂:假臭草花精油:水＝20～40:2～5:4～16:2～6:3～8:2～8:2～8:1.0～2.5：0.01～0.03：0.1～0.25:10～30。
另外，本发明还提供了一种制备上述植物杀菌剂的方法，该方法包括以下步骤：
(1)收集假臭草，将花与茎叶分开放置，于阴凉处晾干，再将假臭草花置于蒸发-冷凝容器/设备中，按质量比1：20的料液比加水，100℃蒸发，收集冷凝液，即为假臭草花精油，备用。
(2)先将植物原料切碎，银杏叶、鱼腥草和假臭草茎叶切成1～2cm条状，其它木质原料切成1cm左右茎段，按比例混匀后倒入反应釜中，加植物原料质量15～20倍的水搅拌提取，提取温度80～85℃，提取时间为1.5～2.0h；过滤后再进行第二次浸提，加水量为初始植物原料质量的8～12倍，提取温度控制在80～85℃，提取时间为1h～1.5h，滤过后合并滤液，升温至100℃蒸发浓缩，至植物原料总重量的28～35％即可。
(3)向上述浓缩物中加入95％乙醇，至乙醇的质量百分含量为60％～70％，搅拌均匀后静置16～24h，取上清至旋转蒸发设备，蒸尽乙醇，得到半凝固态/粘稠状物质，再根据其质量按1：0.8～1.2的比例添加水，混匀后继续按植物原料质量比例添加0.1～0.25的假臭草花精油、1.0～2.5的复硝酚钠、0.01～0.03的op-10乳化剂，经均质机充分均质后即得植物复方杀菌剂。
本发明的植物杀菌剂的用法用量为：植物保护剂每亩用量0.05kg～0.3kg，使用时先将植物保护剂用水稀释200～300倍，然后将稀释后的植物杀菌剂均匀喷雾于植物上。对青枯菌、柑橘沙皮病菌均有较强的杀灭能力，对黄龙病病原菌也有一定程度抑制效应。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明的植物杀菌剂采用以天然植物资源为主，以强力细胞赋活剂-复硝酚钠为辅制备的乳浊剂，本发明具有绿色、环保、无毒、植物吸收利用率高等特点。
2、本发明的植物杀菌剂以我国入侵植物假臭草为主要原料，不仅为消灭入侵植物提供了一种新的思路，也能变废为宝，最大限度地对入侵植物加以合理化应用。
3、经检测，本发明的植物杀菌剂中含有挥发精油、多糖、黄酮和生物碱等成分，其中多糖有保护免疫的特性，挥发精油、黄酮有抑菌驱虫害的特性，生物碱具有杀菌的作用。
4、本发明的植物杀菌剂对青枯菌、柑橘沙皮病菌均有较强的杀灭能力，对黄龙病病原菌也有一定程度抑制效应；本发明对人体无毒，剂型为乳浊液，使用安全，喷施后植物易吸收，对环境无污染，具有较强的推广应用价值。
具体实施方式
下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
实施例1
本实施例的一种植物复方杀菌剂，由以下原料按质量比制成：假臭草茎叶:银杏叶:鱼腥草:黄芩:板蓝根:连翘:穿心莲:复硝酚钠:op-10乳化剂:假臭草花精油:水＝30:2:12:4:5:4:4:1.5：0.02：0.2:25。
本实施例的植物保护剂的制备方法包括以下步骤：
(1).收集假臭草，将花与茎叶分开放置，于阴凉处晾干，再将假臭草花置于蒸发-冷凝容器/设备中，按质量比1：20的料液比加水，100℃蒸发，收集冷凝液，即为假臭草花精油，备用。
(2).先将植物原料切碎，银杏叶、鱼腥草和假臭草茎叶切成1～2cm条状，其它木质原料切成1cm左右茎段，按比例混匀后倒入反应釜中，加18倍的水搅拌提取，提取温度80～85℃，提取时间为2.0h；过滤后再进行第二次浸提，加水量为初始原料质量的10倍，提取温度控制在80～85℃，提取时间为1.5h，滤过后合并滤液，升温至100℃蒸发浓缩，至植物原料总重量的28～35％即可。
(3).向上述浓缩物中加入95％乙醇，至含醇量为70％，搅拌均匀后静置24h，取上清至旋转蒸发设备，蒸尽乙醇，得到半凝固态的粘稠状物质，再根据其质量按1：1的比例添加水，混匀后继续按植物原料质量比例添加0.2的假臭草花精油、1.5的复硝酚钠、0.02的op-10乳化剂，经均质机充分均质后即得本发明。
将0.3kg本实施例的植物保护剂用水稀释200倍，对1亩感染青枯病的柑橘植株均匀喷雾施药，施药30天青枯病得到有效防治，解决了柑橘青枯病的危害。
实施例2
本实施例的植物保护剂，由以下原料按质量比制成：假臭草茎叶:银杏叶:鱼腥草:黄芩:板蓝根:连翘:穿心莲:复硝酚钠:op-10乳化剂:假臭草花精油:水＝40:3:10:5:4:6:6:2.0：0.025：0.2:20。
本实施例的植物保护剂的制备方法包括以下步骤：
(1).收集假臭草，将花与茎叶分开放置，于阴凉处晾干，再将假臭草花置于蒸发-冷凝容器/设备中，按质量比1：20的料液比加水，100℃蒸发，收集冷凝液，即为假臭草花精油，备用。
(2).先将植物原料切碎，银杏叶、鱼腥草和假臭草茎叶切成1～2cm条状，其它木质原料切成1cm左右茎段，按比例混匀后倒入反应釜中，加18倍的水搅拌提取，提取温度80～85℃，提取时间为2.0h；过滤后再进行第二次浸提，加水量为初始原料质量的10倍，提取温度控制在80～85℃，提取时间为1.5h，滤过后合并滤液，升温至100℃蒸发浓缩，至植物原料总重量的28～35％即可。
(3).向上述浓缩物中加入95％乙醇，至含醇量为70％，搅拌均匀后静置24h，取上清至旋转蒸发设备，蒸尽乙醇，得到半凝固态的粘稠状物质，再根据其质量按1：1的比例添加水，混匀后继续按植物原料质量比例添加0.2的假臭草花精油、2.0的复硝酚钠、0.025的op-10乳化剂，经均质机充分均质后即得本发明。
将0.35kg本实施例的植物保护剂用水稀释300倍，对1亩感染沙皮病的柑橘植株均匀喷雾施药，施药30天沙皮病病菌得到抑制，表明本实施例的植物杀菌剂对柑橘沙皮病有良好的防治效果。
本发明植物杀菌剂对青枯菌、柑橘沙皮病原菌及黄龙病病原菌的抑菌杀菌效果：
一、以实施例1的植物杀菌剂为例，测定本发明植物杀菌剂对青枯菌的室内毒力：
将实施例1的植物保护剂加入pda培养液中混合配制成植物保护剂浓度分别为18.75μg/g、37.50μg/g、75.00μg/g、150μg/g、750μg/g、1500μg/g和3000μg/g的试样，灭菌后得到含不同浓度植物保护剂的pda培养基，并采用pda培养基作为对照；将经纯化的青枯菌接种于ttc培养基上，置于37℃温箱内培养，用直径为0.4cm的打孔器从菌落边缘打制菌饼若干，备用；用接种针将菌饼反向移植到pda培养基和含不同浓度植物杀菌剂的ttc培养基上，每皿3个菌饼，每处理设二次重复，置于37℃温箱内培养24h后用带标尺的显微镜测定菌落直径，用excel软件处理所得数据，得到相对抑制率及机率值，以浓度对数为横坐标(x)，以机率值为纵坐标(y)，经散点回归分析，得到回归方程，y＝0时即求得ec50的浓度对数值，结果如表1所示。
表1植物杀菌剂对青枯菌室内毒力测定结果
由表1可知，本发明的植物杀菌剂对青枯菌的ec50为207.04μg/g，毒力回归方程为y＝1.3219x-3.0616，相关系数r＝0.987，表明本发明的植物杀菌剂对青枯菌菌有较强的抑制活性。
二、以实施例1的植物杀菌剂为例，测定本发明植物杀菌剂对柑橘沙皮病病原菌的室内毒力：
将实施例1的植物杀菌剂配制成18.75μg/g、37.50μg/g、75.00μg/g、150μg/g、375μg/g、750μg/g和1500μg/g七个浓度梯度溶液，灭菌后将柑橘沙皮病叶背面孢子囊刮入其内，并在灭菌水中加入等量的柑橘沙皮病病原菌孢子囊作对照。室温下大培养皿内保湿培养24h后，在显微镜下观察视野内萌发孢子数和总孢子数，用excel软件处理所得数据，得到相对抑制率及机率值，以浓度对数为横坐标(x)，以机率值为纵坐标(y)，经散点回归分析，得到回归方程，y＝0时即求得ec50的浓度对数值，结果如表2所示。
校正抑制率＝(空白对照萌发孢子数-样品组萌发孢子数)/空白对照萌发孢子数
表2植物杀菌剂对柑橘沙皮病病原菌室内毒力测定结果
由表2可知，本发明的植物保护剂对柑橘沙皮病病原菌的ec50为34.77μg/g，毒力回归方程为y＝1.0995x-1.6946，相关系数r＝0.9334，表明本发明的植物保护剂对柑橘沙皮病病原菌有较强的抑制活性。
三、以实施例1的植物杀菌剂为例，测定本发明植物杀菌剂对柑橘黄龙病病原菌的防治效果
选取已明显感染黄龙病的柑橘树，取30d左右新生叶片，液氮保存，喷施本植物杀菌剂200倍稀释液，20d后再取已采摘对称部位叶片，每组3个平行。再以柑橘黄龙病病原亚洲菌系β-操纵子的特异引物fa2/rj5进行pcr扩增，经荧光定量pcr检测分析，先得到黄龙病荧光定量检测标准曲线，由回归方程计算出含菌量，所得结果如下表3所示：
表3植物杀菌剂对柑橘黄龙病病原菌的防治效果
注：每组三个平行
由表3可知，本发明的植物杀菌剂对柑橘黄龙病病原菌的20d抑制率可达77.02％，虽不能完全杀灭柑橘黄龙病病原菌，但仍显示了较强的抑制能力，表明本发明的植物杀菌剂对柑橘黄龙病病原菌有较好的抑制活性。
综上，本发明涉及的植物来源易得，制备工艺较为简单，成本不高，适合农业/林业产业化生产；本发明的植物杀菌剂对青枯菌、柑橘沙皮病均有较强的杀灭能力，对黄龙病病原菌也有一定程度抑制效应；本发明对人体无毒，剂型为乳浊液，使用安全，喷施后植物易吸收，对环境无污染，具有较强的推广应用价值。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何限制，凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。