本发明属于植物栽培
技术领域：
，具体涉及一种丝带草繁殖培育的方法。
背景技术：
：丝带草(学名：phalarisarundinaceal.var.pictal.)，别名：玉带草，是虉草的变种，为禾本科虉草属多年生草本植物，杆大多单生，也有丛生的，叶片扁平，绿色而有白色条纹间于其中，柔软而似丝带，因而得名，圆锥花序紧密狭窄，分枝直向上举，密生小穗，无毛或有微毛，颖沿脊上粗糙，上部有极狭的翼。幼嫩时为牲畜的优良牧草，收割或放牧后再生力很强，秆可编织用具或造纸。可用于装扮河堤、湿地等景观带。极具观赏价值与经济价值。虽然该品种目前没有广泛栽植，但它将会成为一个很受欢迎的园林景观植物和经济作物。目前，丝带草主要通过播种和分株繁殖，但出芽率和成活率都不高，并且受天气和季节的影响，远不能满足市场的需求。中国专利cn105638464a公开了一种丝带草的组培快繁方法，该方法使用当年生幼嫩茎段作为外植体，经过外植体灭菌处理、启动培养长出腋芽、初代胚芽腋芽直接生根、继代增殖培养长成完整植株，但该方法是腋芽直接生根成苗，生根和增殖一起进行，增殖系数较低。技术实现要素：为解决现有技术中丝带草繁育受环境影响大、增殖系数低的问题，本发明提供一种丝带草繁殖培育的方法，通过本发明方法，增殖系数可达15～20。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：本发明提供一种丝带草繁殖培育的方法，包括以下步骤：a.外植体灭菌：取无病虫害的丝带草茎秆，去掉叶片，切割成2～3cm的带节茎段，放置在超净工作台上，用75％酒精灭菌3～5s，0.1％升汞灭菌3～5min，无菌水冲洗4～6次，得灭菌后的外植体；b.启动培养：将步骤a得到的灭菌后的外植体接种于启动培养基中，所述启动培养基的配方为ms+0.1～0.3mg/lnaa+1.3～1.8mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0±0.2，2～3周后，腋芽萌发并伸长1～4cm；c.增殖培养：将步骤b中长至1～4cm的腋芽切下，转移至增殖培养基中分化丛生芽，所述增殖培养基的配方为1/2ms+1/2nn69+0.1～1.0mg/l2,4-d+2.0～4.0mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0±0.2，培养4～6周后，丛生芽高1～7cm，增殖系数为15～20；d.生根培养：将步骤c得到的丛生芽切割成单芽，转移至生根培养基中培养，生根培养基为1/2nn69+0.1～0.3mg/liba+20g/l蔗糖+6g/l琼脂，2～3周后得到生根的丝带草苗；e.炼苗移栽：将经过步骤d得到的生根的丝带草苗在草炭：珍珠岩体积比为2：1的炼苗基质中进行炼苗移栽，炼苗移栽的温度为19～25℃，空气湿度为90％±5％。进一步地，所述启动培养、增殖培养和生根培养的环境条件均为：光照强度为2000～3000lx，光照时间为13～15h/d，培养温度为22℃～25℃。进一步地，所述启动培养、增殖培养和生根培养的环境条件均为：光照强度为2500lx，光照时间为14h/d，培养温度为24℃。进一步地，步骤b中启动培养基的配方为：ms+0.2mg/lnaa+1.5mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。进一步地，步骤c中增殖培养基的配方为：1/2ms+1/2nn69+0.5mg/l2,4-d+3.0mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。进一步地，步骤d中的生根培养基的配方为：1/2nn69+0.2mg/liba+20g/l蔗糖+6g/l琼脂。进一步地，步骤e中炼苗移栽时的温度为22℃，空气湿度90％。与现有技术相比，本发明的有益效果如下：1.本发明采用的组织培养方法，不受季节气候变化、自然灾害的影响，培养基配方简单，启动培养、增殖培养和生根培养时的环境条件一致，培养流程简便。2.本发明培养过程中，启动培养时的腋芽萌发率可达98％，增殖培养的增殖系数为15～20，生根培养的生根率可达100％，炼苗移栽的成活率可达100％，提高了丝带草繁殖的效率，为丝带草工业化育苗及其深加工提供了技术支持。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例中所述75％酒精为体积百分数为75％的酒精，所述0.1％升汞为质量百分数为0.1％的升汞，所述ms、nn69和1/2ms+1/2nn69基本培养基的成分如表1。表1.ms、nn69和1/2ms+1/2nn69基本培养基的成分成分ms(mg·l-1)nn69(mg·l-1)1/2ms+1/2nn69(mg·l-1)nh4no316507201185kno319009501425cacl2·2h2o440166303mgso4·7h2o370185277.5kh2po417068119ki0.8300.415h3bo36.2108.1mnso4·4h2o22.31920.65znso4·7h208.6109.3na2moo4·h2o0.250.250.25cuso4·5h200.0250.0250.025cucl2·6h200.0250.0250.025na2·edta37.337.337.3feso4·7h2027.827.827.8肌醇100100100烟酸0.552.75吡哆醇0.50.50.5硫胺素0.10.50.3甘氨酸222叶酸052.5维生素h00.050.025实施例1一种丝带草繁殖培育的方法，包括以下步骤：a.外植体灭菌：取丝带草无病虫害的茎秆，去掉叶片，将茎杆切割成2cm带节茎段，放置在超净工作台上，用75％酒精灭菌5s，0.1％升汞灭菌5min，无菌水冲洗5次；b.启动培养：将步骤a得到的经过灭菌的外植体接种于启动培养基中，启动培养基为ms+0.2mg/lnaa+1.5mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养14天后，腋芽开始萌发，40天后萌发率为98％，腋芽高2～4cm。c.增殖培养：将步骤b中长至2～4cm的腋芽切下，转接到增殖培养基中分化丛生芽，增殖培养基的配方为：1/2ms+1/2nn69+0.5mg/l2,4-d+3.0mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养28天后分化出丛生芽，培养60天后，丛生芽高1～7cm，增殖系数为19.6。d.生根培养：将步骤c中长至1～7cm的丛生芽切割成单芽，转接到生根培养基中培养，生根培养基为1/2nn69+0.2mg/liba+20g/l蔗糖+6g/l琼脂。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，14天后得到生根丝带草苗，40天后生根率为100％；e.炼苗移栽：将经过步骤d得到的生根丝带草苗在草炭：珍珠岩体积比为2：1的炼苗基质中进行炼苗移栽。基质保持湿润，炼苗移栽的空气温度为22℃，空气湿度为95％，移栽成活率为100％。实施例2一种丝带草繁殖培育的方法，包括以下步骤：a.外植体灭菌：取丝带草无病虫害的茎秆，去掉叶片，将茎杆切割成2cm带节茎段，放置在超净工作台上，用75％酒精灭菌5s，0.1％升汞灭菌5min，无菌水冲洗5次；b.启动培养：将步骤a得到的经过灭菌的外植体接种于启动培养基中，启动培养基为ms+0.1mg/lnaa+1.3mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养17天后，腋芽开始萌发，40天后萌发率为90％，腋芽高1～2cm。c.增殖培养：将步骤b中长至1～2cm的腋芽切下，转接到增殖培养基中分化丛生芽，增殖培养基的配方为：1/2ms+1/2nn69+0.1mg/l2,4-d+2.0mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养42天后分化出丛生芽，培养60天后，株高1～3cm，增殖系数为7。d.生根培养：将步骤c中长至1～3cm的丛生芽切割成单芽，转接到生根培养基中培养，生根培养基为1/2nn69+0.1mg/liba+20g/l蔗糖+6g/l琼脂。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养23天后得到生根丝带草苗，40天后生根率为80％；e.炼苗移栽：将经过步骤d得到的生根丝带草苗在草炭：珍珠岩体积比为2：1的炼苗基质中进行炼苗移栽。基质保持湿润，炼苗移栽的空气温度为22℃，空气湿度为90％，移栽成活率为100％。实施例3一种丝带草繁殖培育的方法，包括以下步骤：a.外植体灭菌：取丝带草无病虫害的茎秆，去掉叶片，将茎杆切割成2cm带节茎段，放置在超净工作台上，用75％酒精灭菌5s，0.1％升汞灭菌5min，无菌水冲洗5次；b.启动培养：将步骤a得到的经过灭菌的外植体接种于启动培养基中，启动培养基为ms+0.3mg/lnaa+1.8mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养14天后，腋芽开始萌发，40天后萌发率为88％，腋芽高1～3cm。c.增殖培养：将步骤b中长至1～3cm的腋芽切下，转接到增殖培养基中分化丛生芽，增殖培养基的配方为：1/2ms+1/2nn69+1.0mg/l2,4-d+4.0mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph调整至6.0。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，培养35天后分化出丛生芽，培养60天后，株高1～2cm，增殖系数为16。d.生根培养：将步骤c中长至1～2cm的丛生芽切割成单芽，转接到生根培养基中培养，生根培养基为1/2nn69+0.3mg/liba+20g/l蔗糖+6g/l琼脂。光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，19天后得到生根丝带草苗，40天后生根率为90％；e.炼苗移栽：将经过步骤d得到的生根丝带草苗在草炭：珍珠岩体积比为2：1的炼苗基质中进行炼苗移栽。基质保持湿润，炼苗移栽的空气温度为22℃，空气湿度为80％，移栽成活率为95％。实施例4启动培养基中不同组分对不定芽萌发的影响本实施例中的外植体灭菌与实施例1中的外植体灭菌步骤一致，故不再赘述。启动培养：将经过灭菌的外植体接种于不同的启动培养基中，每个培养基接种40个外植体，光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，具体处理方法及培养结果见表2。表2中每个启动培养基中都加入了30g/l蔗糖和6g/l琼脂，观察并记录启动培养过程的情况。表2.启动培养基中不同组分对腋芽生长的影响从上表可以看出：当启动培养基只加入ms基本培养基时，外植体萌发腋芽，但萌发时间长，萌发率低；当在ms培养基中只加入6-ba或naa时，开始萌发的时间为29～30天，萌发率为50％～60％；当在ms培养基中加入6-ba和naa两种激素的组合时，开始萌发的时间为14～24天，萌发率为57％～98％，其中，当naa浓度为0.2mg/l，6-ba浓度为1.5mg/l时，开始萌发的时间最早，萌发率最高，为启动培养基的最适合的生长激素组成浓度。实施例5增殖培养基中不同组分对丛生芽生长的影响本实施例中的外植体灭菌和启动培养步骤均与实施例1中一致，故不再赘述。增殖培养：将长至3cm的腋芽切下，转接到不同的增殖培养基中，每个培养基接种20个腋芽，光照时间为14h/d，ph调整至6.0，光照强度为2500lx，培养温度24℃，具体处理方法及培养结果见表3。表3中每个增殖培养基中都加入了30g/l蔗糖和6g/l琼脂，观察并记录增殖培养的情况。表3.增殖培养基中不同组分对丛生芽生长的影响从表中可以看出：腋芽在配方为1/2ms+1/2nn69+0.5mg/l2,4-d+3.0mg/l6-ba+30g/l蔗糖+6g/l琼脂的培养基中培养，分化时间为28天，增殖系数为19.6，株高7cm，此培养基是腋芽增殖培养的最适培养基。实施例6生根培养基中不同组分对根系生长的影响本实施例中的外植体灭菌、启动培养和增殖培养步骤均与实施例1中一致，故不再赘述。生根培养：将丛生芽切割成单芽，接种于不同的生根培养基上培养观察，每个培养基接种32个单芽，光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养温度为24℃，具体处理及培养结果见表4。表4中每个生根培养基中都加入了20g/l蔗糖和6g/l琼脂，观察并记录木槿单芽的生根情况。表4.生根培养基中不同组分对根系生长的影响生根培养基组成数量(个)发根时间(d)生根率(％)1/2nn69+0.2mg/liba32141001/2nn69+0.1mg/liba3225801/2nn69+0.3mg/liba3219901/2nn69322559nn69323028从上表可以看出：单芽在加入了1/2nn69+0.2mg/liba的生根培养基上生根时间为14天，生根率为100％，比在单独加入了1/2nn69、nn69的生根培养基上培养效果好，此处理方法为生根培养基的最优处理方法。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。当前第1页12