本发明属于杀菌剂技术领域，涉及一种含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物及其用途。
背景技术：
随着土地经营集约化越来越高和农作物连作现象越来越普遍，土传病原菌在土壤中大量积累，造成土传病害日益加重。目前防治土传病害的主要方式是土壤消毒和药剂处理，土壤消毒效果好但费时费工，易造成土壤生态破坏和土壤板结；药剂处理多以多菌灵、福美双或两者的混剂等进行灌根或蘸根处理，但化学药剂的长期使用或超量使用已造成抗药性的产生，使防效降低。如何更有效地防治土传病害的发生是广大农民和植保工作者面临的挑战。加之人民对食品安全的要求越来越高，农业逐渐由化学时代向无公害、绿色和有机时代的发展。因此，减少化学药剂的使用，发展生态农业、绿色农业成为大势所趋，也有利于推动《到2020年农药使用量零增长行动方案》的实施。
生物农药对人畜安全、环境兼容性好。利用生物农药防治农作物土传病害日益引起人们的重视。但是田间使用生物农药时也存在着一些问题，如田间防治效果不稳定、药效作用缓慢等。研究发现开展生防微生物和低毒化学药剂协同防治作物土传病害的技术体系，在减少化学农药使用的基础上，既能发挥化学药剂高效、快速的抑菌作用，又能发挥生防微生物在诱导植物抗病性、持久地控制土传病害流行、改善和修复土壤微生态环境的目的。
解淀粉芽孢杆菌b1126，英文名称为bacillusamyloliquefaciens，是一类好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，是一种微生物杀菌剂。菌种由天津市植物保护研究所筛选获得的，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.6827，对多种气传和土传真菌病害有很好的防治效果，具有激活作物生长，改善土壤生态环境的作用。
咪鲜胺、咯菌腈、氰烯菌酯均为常用杀菌剂，具有广谱、高效的特性，对镰刀菌病害具有优异的防治效果，广泛用于大田作物和园艺作物病害防治。
解淀粉芽孢杆菌b1126作为一种生物农药，具有环境友好，生产成本低，不易产生抗性的优点，与咪鲜胺、咯菌腈、氰烯菌酯均有良好的环境相容性。申请人经检索，目前还没有解淀粉芽孢杆菌b1126与咪鲜胺、咯菌腈、氰烯菌复配防治玉米、水稻、小麦等大田作物以及西瓜、黄瓜、芹菜、香菜、茄子、草莓等园艺作物的根腐病、茎基腐病和枯萎病的文献报道，进一步研究发现，将作用机理不同的解淀粉芽孢杆菌b1126与咪鲜胺、咯菌腈、氰烯菌复配，具有明显的增效作用，能显著提高对上述土传病害的防治效果，减少用药量，降低防治成本，对作物安全性高。
关于解淀粉芽孢杆菌b1126的制备参见201410529097.5一种防控茄果类蔬菜病毒病的微生物菌剂及其制备方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物及其用途，具体技术方案如下：
一种含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物，其特征在于所述协同增效杀菌组合物含活性成分a和活性成分b，活性成分a和活性成分b的体积比1:50～50:1，优选体积比1:9～9:1，活性成分a和活性成分b的质量之和为所述组合物总质量的10%～80%。
本发明所述的协同增效杀菌组合物，其中所述协同增效杀菌组合物还含农药制剂辅助成分，以将所述的协同增效杀菌组合物加工成农业上允许使用的剂型。其中所述农药制剂辅助成分为填料、载体、溶剂、乳化剂、分散剂、润湿剂、增稠剂、抗氧化剂、或防冻剂中的一种或多种。所述组合物加工成农业上允许使用的剂型指的是：加工成颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、水乳剂、悬浮种衣剂。
本发明进一步公开了含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物在防治由镰刀菌引起的大田和园艺作物的多种土传病害上的用途。所述土传病害包括玉米、水稻、小麦等大田作物以及西瓜、黄瓜、芹菜、香菜、茄子、草莓等园艺作物的根腐病、茎基腐病和枯萎病。试验结果显示含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物对上述土传病害有良好的防治效果，且防效优于单剂。
本发明所述的含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物，其特征在于所述组合物的使用方式采取撒施、冲施、蘸根、灌根、喷雾或喷淋、拌种、种子包衣中的一种或多种。
本发明所述含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物的各种剂型的加工工艺，采用已知的方法设备，是农药制剂加工中常用的方法。
本发明所述的产物可以以成品制剂的形式提供，也可以以单剂的形式提供，使用前直接混合，然后稀释到所需的浓度。
本发明所述的组合物可以随肥料等撒施，或直接撒施颗粒，也可以兑水稀释后于移栽前蘸根，移栽后灌根，或喷洒在土壤中，或者作种子处理剂。
本发明公开的含解淀粉芽孢杆菌b1126的协同增效杀菌组合物与现有技术相比，具有如下优点：
（1）经济效益和社会效益显著。所述组合物在一定配比范围内表现为显著的协同增效作用，提高了对土传病害的防治效果，降低了农药的使用量和施药次数，节约用药成本，省工省时，具有明显的经济效益和社会效益。
（2）生态效益显著。所述组合物具备增效作用，减少化学农药的使用，有利于延缓病原菌抗药性的产生，延长农药的使用寿命，降低对生态环境的污染和提高食品安全性。此外，生防微生物的引入，可以改善土壤微生态环境，实现土壤微生态生物修复，促进农业可持续发展。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明绝非仅限于这些实施例。以下实施例仅为本发明较优选的实施例，仅仅用于阐述本发明，不能理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的实质和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。其中活性成分a为解淀粉芽孢杆菌b1126，保藏号为cgmccno.6827，活性成分b为咪鲜胺、咯菌腈和氰烯菌酯均有市售。
除非另作说明，本发明中所用的各组分是市售可得的或现有技术中众所周知的或技术人员通过现有技术的公开内容而易于得到的。
一、采用菌丝生长速率法确定杀菌剂复配的室内生物活性测定标准
室内生物测定的试验方法：参照中华人民共和国农业行业标准ny/t1156.2-2006，采用平皿法测定药剂对病原菌菌丝生长的抑制作用。使用nb培养基将活性成分a稀释成系列浓度的工作液备用，使用二甲基亚砜将活性成分b溶解，配制成系列浓度的工作液备用。
单剂的生物活性测定：将单剂药液按1％比例分别加入到已融化并冷却到室温的pda培养基中，充分摇匀后，倒入灭菌的培养皿(φ90mm)中制成带药平板，以加入无菌水到已融化并冷却到室温的pda培养基的处理为空白对照，每处理重复3次，将培养好的病原菌，在无菌操作条件下用灭菌打孔器(φ5mm)选择长势一致的菌落，自菌落边缘切取菌饼，用接种器将菌饼接种于带药平板中央，菌丝面向下，盖上皿盖，置于25℃的恒温培养箱内培养，培养3天后调查病原菌菌丝生长情况，采用十字交叉法测量各处理的菌落直径，计算抑制率，并利用回归分析法对试验数据进行分析，计算出各单剂对病原菌的ec50值。
复配组合物的生物活性测定：参照尹敬芳（2006）方法进行复配组合物毒力测定，即根据单剂毒力测定结果，以活性成分a单剂的ec50值及活性成分b单剂的ec50值为基础，分别配制成活性成分a单剂的ec50值及活性成分b单剂的ec50值对应的浓度，再按v(a)：v(b)=10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9、0:10不同配比进行复配，以加入等量无菌水对空白对照，具体操作方法同单剂的生物活性测定方法。计算预期抑制生长率和毒性比率，根据毒性比率定性判断配方的联合作用。毒性比率>1，表示增效作用；毒性比率<1，表示拮抗作用；毒性比率=1，表示相加作用。预期抑制生长率按式（1）和毒性比率按式（2）计算：
预期抑制生长率（%）=活性成分a菌悬液在ec50值下的实际抑制率×配比中的a百分率+活性成分b在ec50值下的实际抑制率×配比中的b百分率（1）
毒性比率=实际抑制生长率/预期抑制生长率（2）
其中活性成分a为解淀粉芽孢杆菌b1126；活性成分b选自咪鲜胺、咯菌腈、氰烯菌酯中之一种。
二、实施例
实施例1
解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺复配对玉米茎基腐病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺为待测药剂，玉米茎基腐病菌（禾谷镰刀菌）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次，解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺单剂对玉米茎基腐病菌的ec50值分别为5.7791×104cfu.ml-1和0.0104μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表1所示。
表1解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺对玉米茎基腐病菌的联合毒力
毒力测定结果表1显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与咪鲜胺组合物的毒性比率大于1.0，对玉米茎基腐病菌的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例2
解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺复配对草莓枯萎病菌的联合毒力
解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺复配对草莓枯萎病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺为待测药剂，草莓枯萎病菌（尖孢镰刀菌草莓专化型）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺单剂对草莓枯萎病菌的ec50值分别为1.6353×103cfu.ml-1和0.0203μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表2所示。
表2解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺对草莓枯萎病菌的联合毒力
毒力测定结果表2显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与咪鲜胺组合物的毒性比率大于1.0，对草莓枯萎病菌的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例3
解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺复配对香菜根腐病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺为待测药剂，香菜根腐病菌（尖孢镰刀菌香菜专化型）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺单剂对香菜根腐病菌的ec50值分别为1.1898×105cfu.ml-1和0.0438μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表3所示。
表3解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺对香菜根腐病菌的联合毒力
毒力测定结果表3示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与咪鲜胺组合物的毒性比率大于1.0，对香菜根腐病菌的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例4
解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈复配对玉米茎基腐病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈为待测药剂，玉米茎基腐病菌（禾谷镰刀菌）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈单剂对玉米茎基腐病菌的ec50值分别为5.7791×104cfu.ml-1和0.0289μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表4所示。
表4解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈对玉米茎基腐病菌的联合毒力
毒力测定结果表4显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与咯菌腈组合物的毒性比率大于1.0，对玉米茎基腐病菌的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例5
解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈复配对草莓枯萎病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈为待测药剂，草莓枯萎病菌（尖孢镰刀菌草莓专化型）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈单剂对草莓枯萎病菌的ec50值分别为1.6353×103cfu.ml-1和0.0295μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表5所示。
表5解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈对草莓枯萎病菌的联合毒力
毒力测定结果表5显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与咯菌腈组合物的毒性比率大于1.0，对草莓枯萎病菌的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例6
解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈复配对香菜根腐病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈为待测药剂，香菜根腐病菌（尖孢镰刀菌香菜专化型）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈单剂对香菜根腐病菌的ec50值分别为1.1898×105cfu.ml-1和5.2686μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表6所示。
表6解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈对香菜根腐病菌的联合毒力
毒力测定结果表6显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与咯菌腈组合物的毒性比率大于1.0，对香菜根腐病的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例7
解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯复配对玉米茎基腐病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯为待测药剂，玉米茎基腐病菌（禾谷镰刀菌）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯单剂对玉米茎基腐病菌的ec50值分别为5.7791×104cfu.ml-1和0.1341μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表7所示。
表7解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯对玉米茎基腐病菌的联合毒力
毒力测定结果表7显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与氰烯菌酯组合物的毒性比率大于1.0，对玉米茎基腐病的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例8
解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯复配对黄瓜枯萎病病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯为待测药剂，黄瓜枯萎病菌（尖孢镰刀菌黄瓜专化型）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯单剂对黄瓜枯萎病菌的ec50值分别为2.6918×104cfu.ml-1和0.5147μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表8所示。
表8解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯对对黄瓜枯萎病菌的联合毒力
毒力测定结果表8显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与氰烯菌酯组合物的毒性比率大于1.0，对黄瓜枯萎病的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例9
解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯复配对芹菜根腐病菌的联合毒力
以解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯为待测药剂，芹菜根腐病菌（尖孢镰刀菌芹菜专化型）为试验对象，按照上述试验方法进行室内生物活性测定，以不含药剂的处理为空白对照，重复3次。解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯单剂对对芹菜根腐病菌的ec50值分别为2.2729×106cfu.ml-1和21.7827μg.ml-1，其复配组合物的联合毒力如表9所示。
表9解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯对芹菜根腐病菌的联合毒力
毒力测定结果表9显示，以生防菌单剂的ec50值及化学药剂单剂的ec50值为基础，在体积比9:1~1:9范围内解淀粉芽孢杆菌b1126与氰烯菌酯组合物的毒性比率大于1.0，对芹菜根腐病的防治能力具有明显的协同增效作用，防治效果优异且优于单剂品种。
实施例10
解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺组合物防治芹菜根腐病的效果
分别制备体积比2:8、20:1、1:20的解淀粉芽孢杆菌b1126·咪鲜胺水分散粒剂，具体如下：按照配比取50g解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺组合物，4g十二烷基苯磺酸钠、2g萘磺酸钠甲醛缩合物、2g木质素磺酸盐、2g尿素、2g聚乙二醇、2g淀粉、凹土棒土补足100g。将以上原料按照配方比例混合，进行超微气流粉碎、混合、造粒，通过干燥、筛分得到稳定合格的50%解淀粉芽孢杆菌b1126·咪鲜胺水分散粒剂。
田间试验于2019年9月在天津市北辰区西堤头镇西提头村芹菜地中进行，试验地块前茬种植芹菜且芹菜根腐病发生较重。在芹菜根腐病初发生时，使用实验药剂随灌溉水冲施处理芹菜，以同等剂量(按有效成分计算)的单剂和无药处理为对照，间隔一周后第二次用药。第二次施药后七天观察芹菜植株的生长情况，没有发现任何药害症状，因此50%解淀粉芽孢杆菌b1126·咪鲜胺水分散粒剂对芹菜植株生长是安全的；第二次施药后七天观察芹菜根腐病的发生情况，计算发病率和防治效果。试验结果如表10所示。
表10解淀粉芽孢杆菌b1126和咪鲜胺组合物防治芹菜根腐病的效果
田间试验结果表10表明，以上3个复配组合对芹菜根腐病有很好的防治效果，按照95克/亩剂量在芹菜发病初期随灌溉水冲施处理芹菜，对芹菜根腐病的防效分别为88.65%、93.40%和96.22%，显著优于各单剂的防效。因此40%解淀粉芽孢杆菌b1126·咪鲜胺水分散粒剂能够有效地防治芹菜根腐病。
实施例11
解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈组合物防治芹菜根腐病的效果
分别制备体积比3:7、20:1、1:20的解淀粉芽孢杆菌b1126·咯菌腈水分散粒剂，具体如下：按照配比取40g解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈组合物、4g十二烷基苯磺酸钠、2g萘磺酸钠甲醛缩合物、2g木质素磺酸盐、2g尿素、2g聚乙二醇、2g淀粉、凹土棒土补足100g。将以上原料按照配方比例混合，进行超微气流粉碎、混合、造粒，通过干燥、筛分得到稳定合格的40%解淀粉芽孢杆菌b1126·咯菌腈水分散粒剂。
田间试验于2019年7月在天津市农业科学院现代农业创新基地中进行，试验地块前茬种植芹菜且芹菜根腐病发生较重。在芹菜根腐病初发生时，使用试验药剂随灌溉水冲施处理芹菜，以同等剂量(按有效成分计算)的单剂和无药处理为对照，间隔一周后第二次用药。第二次施药后七天观察芹菜植株的生长情况，没有发现任何药害症状，因此40%解淀粉芽孢杆菌b1126·咯菌腈水分散粒剂对芹菜植株生长是安全的；第二次施药后七天观察芹菜根腐病的发生情况，计算发病率和防治效果。试验结果如表11所示。
表11解淀粉芽孢杆菌b1126和咯菌腈组合物防治芹菜根腐病的效果
田间试验结果表11表明，以上3个复配组合对芹菜根腐病有很好的防治效果，按照95克/亩剂量在芹菜发病初期随灌溉水冲施处理芹菜，对芹菜根腐病的防效分别为75.42%、82.30%和88.15%，显著优于各单剂的防效。因此40%解淀粉芽孢杆菌b1126·咯菌腈水分散粒剂能够有效地防治芹菜根腐病。
实施例12
解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯组合物防治黄瓜枯萎病的效果
分别制备体积比2:8、20:1、1:20的解淀粉芽孢杆菌b1126·氰烯菌酯水分散粒剂，具体如下：按照配比取40g解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯组合物、4g十二烷基苯磺酸钠、2g萘磺酸钠甲醛缩合物、2g木质素磺酸盐、2g尿素、2g聚乙二醇、2g淀粉、凹土棒土补足100g。将以上原料按照配方比例混合，进行超微气流粉碎、混合、造粒，通过干燥、筛分得到稳定合格的40%解淀粉芽孢杆菌b1126·氰烯菌酯水分散粒剂。
田间试验于2019年8月在天津市农业科学院现代农业创新基地中进行，试验地块前茬种植黄瓜且黄瓜枯萎病发生较重在黄瓜枯萎病初发生时，使用试验药剂的1000倍灌根处理黄瓜苗，以同等剂量(按有效成分计算)的单剂和无药处理为对照，间隔一周后第二次用药。第二次施药后七天观察黄瓜植株的生长情况，没有发现任何药害症状，因此40%解淀粉芽孢杆菌b1126·氰烯菌酯水分散粒剂对黄瓜植株生长是安全的；第二次施药后七天观察黄瓜枯萎病的发生情况，计算发病率和防治效果。试验结果如表12所示。
表12解淀粉芽孢杆菌b1126和氰烯菌酯组合物防治黄瓜枯萎病的效果
田间试验结果表12表明，以上3个复配组合对黄瓜枯萎病有很好的防治效果，其1000倍在黄瓜发病初期灌根处理黄瓜，对黄瓜枯萎病的防效分别为76.21%、85.30%和89.03%，显著优于各单剂的防效。因此40%解淀粉芽孢杆菌b1126·氰烯菌酯水分散粒剂能够有效地防治黄瓜枯萎病。
参考文献
尹敬芳.生物-化学协同防治辣椒疫病菌药合剂初步研究[d].硕士学位论文.北京：中国农业大学，2006。