一种树莓的组织培养种苗繁殖方法与流程

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种树莓的组织培养种苗繁殖方法。

背景技术：

树莓(rubusidaeus)，为蔷薇科悬钩子属的浆果类果树，被誉为世界四大浆果之一。其果实营养丰富，酸甜可口，营养丰富，既可鲜食也可加工。具有抗氧化、调节代谢、抗肿瘤、预防心脑血管疾病和增强免疫力等作用，有较大的应用开发价值。树莓在欧美栽培历史悠久，我国引种已有30多年历史，栽培面积较大，国内对树莓优良种苗的需求较大，优良品种多从国外引进，数量有限，价格昂贵。

目前我国树莓繁殖多采用扦插和根蘖苗方式，不仅繁殖速度慢、倍率低，还容易导致品种退化、产量降低，病虫害问题严重。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种繁殖周期短，效率高，成本低的树莓的组织培养种苗繁殖方法。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种树莓的组织培养种苗繁殖方法，具体步骤如下：

s1：外植体选择；

s2：外植体消毒；

s3：诱导培养；

s4：增殖培养；

s5：生根培养，

其中，在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养，诱导培养基的配方为ms+kt0.5～1.0mg/l+tdz0.005～0.01mg/l+ga31.5～3.0mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l，诱导培养基的ph值为5.80，

在s4中，将s3中的无菌外植体转接到增殖培养基中，增殖培养基的配方为ms+kt0.5～1.0mg/l+tdz0.002～0.015mg/l+ga31.5～3.0mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l，增殖培养基的ph值为5.80，

在s5中，将s4中的树莓组培苗放入生根培养基中，生根培养基的配方为1/2ms+iba0.5～2.0mg/l+琼脂6g/l+蔗糖15g/l，生根培养基ph值为5.80。

通过采用上述技术方案，通过植物组织培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达6～8倍，生根率达到95％，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本。诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基，树莓组培苗增殖倍率能够达到6～8倍，组培苗高度一致，生长健壮，可以连续保持高倍率繁殖15代以上。使用本生根培养基，树莓组培苗生根率能够达到95％以上，每株根数四条以上，根系发达，健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6周。

通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应诱导培养基，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s4中，将s3中的无菌外植体接入增殖培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～10周。

通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免增殖培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应增殖培养基，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s4中，每隔8～10周转接入新的增殖培养基。

通过采用上述技术方案，经过8～10周后，增殖培养基的效果将会减弱，植物材料也会污染增殖培养基，需要及时更换。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s5中，将s4中的树莓组培苗接入生根培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养4～8周。

通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免生根培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应生根培养基，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s2中，外植体消毒的具体步骤为将树莓外植体叶片剪去，自来水冲洗干净，在工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次，使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡30min。

通过采用上述技术方案，这种方式对外植体消毒方法简单，能够大大降低外植体的死亡率，消毒成活率较高。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s1中，外植体选择为健康树莓的枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。

综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

本发明通过植物组织培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达6～8倍，生根率达到95％，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，为树莓工厂化生产提供技术支持，对企业大规模生产优质树莓种苗具有重要意义。

附图说明

图1是树莓的组织培养种苗繁殖方法的流程图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

实施例：参照图1，为本发明公开的一种树莓的组织培养种苗繁殖方法，具体步骤如下：

(一)、试验材料：供试材料采自无锡东郁植物科技有限公司苗圃的健康树莓，外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。

(二)、试验方法：

树莓组织培养过程按以下步骤进行：初代培养、继代培养、生根培养。

(1)、初代培养：树莓外植体，将叶片剪去，自来水冲洗干净。在超净工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次。使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡30min，其中白猫漂白水为上海白猫(集团)有限公司生产的“白猫”牌家用漂白水。消毒完成，将外植体接种到诱导培养基后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6周，建立无菌再生系统，其中诱导培养基配方为:ms+kt0.5～1.0mg/l+tdz0.005～0.01mg/l+ga31.5～3.0mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l，诱导培养基的ph值为5.80。

(2)、继代培养：以建立的无菌再生系统为对象，将无菌外植体转接到增殖培养基后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h培养8～10周。每隔8～10周转接入新的增殖培养基，其中增殖培养基配方为ms+kt0.5～1.0mg/l+tdz0.002～0.015mg/l+ga31.5～3.0mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l，增殖培养基的ph值为5.80。

(3)、生根培养：经过继代培养的健壮树莓组培苗，取2～3cm的顶芽，放入生根培养基后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养4～8周。其中生根培养基为：1/2ms+iba0.5～2.0mg/l+琼脂6g/l+蔗糖15g/l，生根培养基ph值为5.80。

(三)、试验结果：

初代培养：使用本发明的消毒方法，消毒成功率能达到80％，诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。

继代培养：使用本发明的增殖培养基，树莓组培苗增殖倍率能够达到6～8倍，组培苗高度一致，生长健壮，可以连续保持高倍率繁殖15代以上。

生根培养：使用本发明的生根培养基，树莓组培苗生根率能够达到95％以上，每株根数四条以上，根系发达，健壮。

本发明所指ms培养基是murashige和skoog研制的培养基，其成分配方表见表1。

1/2ms培养基是指大量元素含量为ms培养基的一半，其他成分用量相同。

表1、ms培养基成分表

本发明涉及的植物生长调节剂有：kt—激动素，tdz—塞苯隆，苯基脲类衍生物；ga3—赤霉素；iba—吲哚丁酸。

本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。