一种桔小实蝇引诱剂及其制备方法与流程

本发明涉及辽细辛挥发油提取物作为桔小实蝇引诱剂的应用、一种桔小实蝇引诱剂及其制备方法、以及一种防控桔小实蝇的方法。

背景技术：

桔小实蝇是双翅目实蝇科的一种世界性害虫。该虫寄主范围广，能广泛寄生于250多种果树及农作物。主要通过成虫在果实上产卵，孵化后的幼虫在果实中为害鲜果肉，导致局部果肉组织软化，幼虫取食果肉，次级微生物侵染水果组织而造成果实腐烂、落果，严重影响果实的品质和产量，给我国的农业生产带来了巨大的损失。因为该虫比较难以防治，并且繁殖力强、发育周期短、世代重叠严重，可以常年为害，目前己在华南、西南地区逐年急剧蔓延、猖撅，被誉为水果的“头号杀手”。

国内外在监测和防治方面，有的地方，为了减少桔小实蝇对果树生产的影响，还在以化学防治为主，由于化学农药的广泛应用，不仅难以有效解决桔小实蝇的为害问题，而且还造成农药残留问题，威胁着人类的健康，同时还造成对整个果园生态系统产生严重影响。因此，急需一种对桔小实蝇有效、对生态系统安全的防治技术。目前，国内外对桔小实蝇的引诱剂主要采用化学合成饵剂(如性引诱剂)和食物饵剂(如水解蛋白)这两种饵剂。

一种桔小实蝇引诱剂(申请号：cn1613309)、桔小实蝇缓释型引诱剂(申请号：cn1689406)、桔小实蝇引诱剂(申请号：cn1793233)、一种桔小实蝇引诱剂(申请号：cn1918984)等均以甲基丁香酚为主要成分的合成配方。性引诱剂只引诱雄虫，而且，全世界已知的桔小实蝇复合体种类已达75种，其中35种趋向于诱蝇酮，26种趋向于甲基丁香酚，余下的14种对诱蝇酮和甲基丁香酚均无明显的趋性。因此，性引诱剂只能降低桔小实蝇雌虫的交配机会，无法有效防治桔小实蝇的为害。

近年来，也有不少改进型桔小实蝇引诱剂，比如cn102487944a中公开了一种改进的桔小实蝇食物诱剂，由以下原料组成：原始食物诱剂1l、丙氨酸50～100mg、亮氨酸1～10mg、异亮氨酸5～40mg、甲硫氨酸0.1～10mg、谷氨酸5～80mg。该发明研究不同氨基酸组合物对桔小实蝇的引诱力，筛选出引诱力最强的氨基酸组合物添加到原有的桔小实蝇食物诱剂中，增强食物诱剂的引诱力和田间持效期，实验结果表明本发明田间持效期达到12天以上，对桔小实蝇的引诱力增强20％以上。cn102499269a中公开了一种桔小实蝇复合引诱剂。该复合引诱剂由糖蜜水溶液、复合水解蛋白水溶液和水果香精组成，其中还添加防腐剂0.5～5.0重量份，多杀菌素spinosad0.01～0.1重量份。该引诱剂配方简单，原料廉价易得，该桔小实蝇复合引诱剂对桔小实蝇雌、雄成虫具有良好的引诱作用，尤其是对10～11日龄的桔小实蝇，总引诱率为25％以上。

现有技术中也有关于天然植物成分对桔小实蝇的引诱作用的报道，比如芒果挥发物(张淑颖,肖春,李正跃,芒果挥发物对桔小实蝇成虫的引诱作用.云南农业大学学报,2007,22(5):659-664)和莲雾果实挥发物(金菊,阮赞誉,黄珍富,赖贵炎,黄颂颂,范晓凌.莲雾果实挥发物对桔小实蝇的引诱作用.华南农业大学学报,2015,(36)3:71-77)等。

辽细辛属于马兜玲科细辛属植物，主要功效为祛风、散寒、行水及开窍，是临床上常用的中药，主要用来治疗风冷头痛、齿痛、风湿痹痛、鼻塞、鼻渊、痰饮咳喘等症。辽细辛具有较好的杀虫、杀螨、抑菌等作用。有研究发现，通过薰蒸法可使辽细辛挥发油发挥很明显的驱虫、杀虫效果。同时有研究发现，辽细辛挥发油提取物对多种植物病菌有很好的抑制作用，可有效的降低植物病菌对植物的伤害。目前暂无关于辽细辛挥发油提取物对桔小实蝇的引诱作用的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供辽细辛挥发油提取物作为桔小实蝇引诱剂的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种桔小实蝇引诱剂及其制备方法。

本发明的再一个目的在于提供一种防控桔小实蝇的方法。

一种桔小实蝇引诱剂及其制备方法。

本发明所采取的技术方案是：

辽细辛挥发油提取物作为桔小实蝇引诱剂的应用。

根据本发明的实施例，所述辽细辛挥发油提取物中含有左旋-β-蒎烯、左旋-α-蒎烯、杜仲酮、3,5-二甲氧基甲苯、黄樟脑、甲基丁香酚、3,4,5-三甲氧基甲苯、肉豆蔻醚、2-崖柏烯、(1r)-(+)-α蒎烯、樟脑萜、桧烯、β-蒎烯、α-水芹烯、p-伞花烃、桉树脑、萜品烯、4-蒈烯、樟脑、冰片、松油烯-4-醇、松油醇、草蒿脑、4,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚-3-烯-2-酮、2-异丙基-5-甲基茴香醚、4,7,7-三甲基双环[4.1.0]庚-3-烯-2-酮、(4s)-1,8-p-蒙脱石-3-酮、双环[3.3.0]辛烷-3-酮，7-亚乙基-，乙缩醛-5-亚乙基、丁香酚、白菖烯、6,9-愈创木二烯、对甲氧基苯丙酮、杜松烯、(3r)-2,2,5aβ,9β-四甲基-3β,9aβ-桥亚甲基十氢-1-恶庚因、α-愈创木烯、δ-杜松烯、缬草烷、3,4-(亚甲基二氧)苯丙酮、榄香素、橙花叔醇、γ-细辛脑、卡枯醇、γ-古芸烯、百秋李醇。

根据本发明的实施例，所述辽细辛挥发油提取物的制备方法包括以下步骤：

1)将辽细辛药材粉碎后装进蒸馏烧瓶；

2)加水浸泡，然后加热蒸馏得蒸馏溶液；

3)分液漏斗分离沉淀精油部分，得到辽细辛挥发油提取物。

一种防控桔小实蝇的方法，在需要防控桔小实蝇的区域投放桔小实蝇引诱剂，所述桔小实蝇引诱剂中含有辽细辛挥发油提取物。

根据本发明的实施例，所述辽细辛挥发油提取物中含有左旋-β-蒎烯、左旋-α-蒎烯、杜仲酮、3,5-二甲氧基甲苯、黄樟脑、甲基丁香酚、3,4,5-三甲氧基甲苯、肉豆蔻醚、2-崖柏烯、(1r)-(+)-α蒎烯、樟脑萜、桧烯、β-蒎烯、α-水芹烯、p-伞花烃、桉树脑、萜品烯、4-蒈烯、樟脑、冰片、松油烯-4-醇、松油醇、草蒿脑、4,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚-3-烯-2-酮、2-异丙基-5-甲基茴香醚、4,7,7-三甲基双环[4.1.0]庚-3-烯-2-酮、(4s)-1,8-p-蒙脱石-3-酮、双环[3.3.0]辛烷-3-酮，7-亚乙基-，乙缩醛-5-亚乙基、丁香酚、白菖烯、6,9-愈创木二烯、对甲氧基苯丙酮、杜松烯、(3r)-2,2,5aβ,9β-四甲基-3β,9aβ-桥亚甲基十氢-1-恶庚因、α-愈创木烯、δ-杜松烯、缬草烷、3,4-(亚甲基二氧)苯丙酮、榄香素、橙花叔醇、γ-细辛脑、卡枯醇、γ-古芸烯、百秋李醇。。

根据本发明的实施例，所述辽细辛挥发油提取物的制备方法包括以下步骤：

1)将辽细辛药材粉碎后装进蒸馏烧瓶；

2)加水浸泡，然后加热蒸馏得蒸馏溶液；

3)分液漏斗分离沉淀精油部分，得到辽细辛挥发油提取物。

根据本发明的实施例，所述桔小实蝇引诱剂的投放量为每点1ml。

本发明的有益效果是：

本发明中运用水蒸馏法提取我国传统中药辽细辛的挥发性物质精油成分，然后直接用于桔小实蝇的引诱，效果与当前国家桃产业体系重点推荐产品聪绿桔小实蝇饵剂相当，可有效引诱桔小实蝇雌成虫与雄成虫来取食，通过专门设计的诱虫装置诱捕到桔小实蝇成虫，可显著减少桔小实蝇雌虫产卵为害，达到有效防控的目的，高效、无污染、无残留，利于生态环境保护及可持续发展。

附图说明

图1是辽细辛精油化学物质gc-ms的总离子图。

具体实施方式

下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。

本发明通过对多种植物源材料进行桔小实蝇引诱作用的筛选中，发现辽细辛挥发油提取物对桔小实蝇有强烈的引诱作用，于是开展提取物对桔小实蝇引诱作用的田间试验，并与目前商业应用上相对广泛的聪绿果实蝇饵剂作为对照，发现本提取物与对照的防治效果相差无几。为桔小实蝇的有效防控提供一条新的途径。

实施例1辽细辛挥发油提取物制备

辽细辛药材(筛选去泥沙)剪碎取250g装进蒸馏烧瓶，加水浸泡1小时，用100v左右加热烧开蒸馏5小时得蒸馏溶液，用分液漏斗分离沉淀精油部分，装精油瓶。每500g辽细辛原药可得精油3ml左右，每6ml精油可作一份实验样本。

实施例2辽细辛挥发油提取物中化合物的初步鉴定

一、gc-ms分析

gc-ms分析条件使用气相色谱-质谱联用仪为agilent7890b-5977a。

1.色谱条件：色谱柱:安捷伦19091s-433hp-5ms，5％苯甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30m×250μm0.25μm)；进样口温度为260℃；程序升温：起始温度70℃，维持0min，之后以1℃·min-1升至75℃，维持5min；然后以8℃·min-1升至107℃，维持0min；继续以50℃·min-1升至125℃，维持5min；再以10℃·min-1升至160℃，维持3min；最后以8℃·min-1升至240℃，维持4min。载气:he，流速30ml·min-1，分流比20：1，进样量1μl，gassaver：关闭。

2.质谱条件：接口温度:260℃，电离方式:ei，电子能量:70ev，离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃，调谐方式:标准调谐，质量扫描方式:全部扫描范围:50～550amu，电子倍增器电压:1553v，溶剂延迟:4min，进样量:1μl，每个样品进样2针。

从图1可见，横坐标保留时间在21.094分钟的峰面积最大，相对峰面积比达24.88％,，经检索与匹配对比，鉴定为甲基丁香酚。其他的各峰皆鉴定出其相应的化学物质。

二、化合物的初步鉴定

定性分析采用计算机谱库(美国nist2005)进行初步检索及匹配分析，并结合文献进行人工谱图解析，确定挥发性化合物的各个化学成分。采用面积归一法计算已确定的辽细辛挥发性化合物的相对含量。

gc-ms色谱分析结果。经分析，实施例1中制备得到的辽细辛挥发油提取物的主要成分：左旋-β-蒎烯、左旋-α-蒎烯、杜仲酮、3,5-二甲氧基甲苯、黄樟脑、甲基丁香酚、3,4,5-三甲氧基甲苯、肉豆蔻醚、2-崖柏烯、(1r)-(+)-α蒎烯、樟脑萜、桧烯、β-蒎烯、α-水芹烯、p-伞花烃、桉树脑、萜品烯、4-蒈烯、樟脑、冰片、松油烯-4-醇、松油醇、草蒿脑、4,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚-3-烯-2-酮、2-异丙基-5-甲基茴香醚、4,7,7-三甲基双环[4.1.0]庚-3-烯-2-酮、(4s)-1,8-p-蒙脱石-3-酮、双环[3.3.0]辛烷-3-酮，7-亚乙基-，乙缩醛-5-亚乙基、丁香酚、白菖烯、6,9-愈创木二烯、对甲氧基苯丙酮、杜松烯、(3r)-2,2,5aβ,9β-四甲基-3β,9aβ-桥亚甲基十氢-1-恶庚因、α-愈创木烯、δ-杜松烯、缬草烷、3,4-(亚甲基二氧)苯丙酮、榄香素、橙花叔醇、γ-细辛脑、卡枯醇、γ-古芸烯、百秋李醇。各成分的含量比见表1。

表1.辽细辛提取物各主要成分含量

下述实施例3～6为辽细辛挥发油提取物对桔小实蝇诱集试验结果。

试验地点在广东省惠州市罗浮山。由于惠州地区气候条件适宜，寄主植物丰富，桔小实蝇可在不同寄主植物之间转移为害，这样往往造成其种群不断积累，在局部地区迅速增长，据在博罗县调查，该地区每年发生10-12代，水果的受害率普遍在50％以上，个别果园超过80％。

试验果园面积约3hm²，连片种植，地势平坦开阔，杨桃果树为3年生，双排种植，株距2.2m，行距3m。试验时期从幼果发育期开始到果实成熟结束。该果园桔小实蝇发生量属中等发生水平。试验分别于2018年8-11月在杨桃园中连续进行。2018年涂药时间分别是9月8日、10月16日、11月16日。根据该杨桃园的生境情况分为a、b、c三个试验区，每个区各设a、b二个试验点，每点上放置装好药剂(提取物或聪绿饵剂)的保鲜盒(大约离地面高1米的地方)，根据点距与放置时间进行4项试验，记录统计保鲜盒诱集至的桔小实蝇数量。

试验中采用3.5l保鲜盒，顶盖中间开孔(直径3cm)，内壁涂机油，另用一个小的保鲜盒盛放3g左右对照品(对照组)或3ml左右实施例1中制备得到的辽细辛挥发油提取物(试验组)置于大保鲜盒中间，盖好盖子，做好防雨措施，按预定时间检查粘住的虫口数量。

对照品采用聪绿果实蝇饵剂，由南京新安中绿生物科技有限公司研制，是一种新型食物饵剂，其诱杀机理独特(开放式诱杀)、专一强(只对橘小实蝇有效)、使用简单方便(树干涂抹)，是国家桃产业体系重点推荐产品。

实施例3

将试验组和对照组保鲜盒单独放置在各试验点5天，两个保鲜盒相邻在一起。5天后记录统计各保鲜盒里诱集到的桔小实蝇数量(见表2)。

实施例4

将试验组和对照组的保鲜盒分别放置在a、b二个试验点5天，然后将两个保鲜盒调换位置放5天，2个保鲜盒相距约5米。10天后记录统计各保鲜盒里诱集到的桔小实蝇数量(见表3)。

实施例5

将试验组和对照组的保鲜盒分别放置在a、b二个试验点5天，后将两个保鲜盒调换位置放5天，2个保鲜盒相距约10米。10天后记录统计各保鲜盒里诱集到的桔小实蝇数量(见表4)。

实施例6

将试验组和对照组的保鲜盒分别放置在a、b二个试验点5天，后两个装药剂的保鲜盒又调换位置放5天，2个保鲜盒相距约20米。10天后记录统计各保鲜盒里诱集到的桔小实蝇数量(见表5)。