具有解淀粉芽孢杆菌SJ06产脂肽的农药复配组合物的制作方法

本发明涉及农药技术领域，具体涉及一种具有解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽的农药复配组合物。

背景技术：

农药减量增效控害是当今植保工作的主题，是建设美丽中国、发展绿色农业的需求，是保证农产品质量安全、农业生态安全的重要措施。目前，植物病害防治的报道以化学防治和生物防治为主。

传统的化学杀菌剂由于使用方便、价格低廉等因素在国内推广面积大，使用者容易接受，然而大多数杀菌剂却面临抗药性增强、农药残留加剧，甚至造成农业面源污染等问题，化学药剂要减量使用在全社会已形成广泛共识，但杀菌剂减量用药的前提是防治效果不下降。生物活体杀菌剂具有环境友好、容易降解和低毒、低残留等优点而日益受到重视，但此类杀菌剂所具有的药效缓慢、抑菌谱窄、受环境条件影响大以及不耐贮存等缺点又限制了其大量推广应用。所以，在植物病害防治过程中，生物活体杀菌剂的使用受到较大的限制。很多研究表明，拮抗菌次级代谢物中含有对植物病原菌抑制活性高效的活性物质，这些活性物质虽然抑菌活性较高、受环境影响较小，抑菌效果稳定，但一般产量不高或者生产成本很高，同样也不可能完全替代化学杀菌剂而起作用。所以寻找经济有效的化学杀菌剂减量增效方法已成为中国当今植物病害防控的重大战略需求，其中农药的增效复配剂研发成为实现化学农药减量增效的主要技术措施之一。目前，杀菌剂复配主要以两种化学杀菌剂之间的混配为主，而且大多数混配以扩大杀菌谱和延缓抗性为混配目的，很难走出传统化学杀菌剂弊端的“围囿”，减量增效的目的也很难实现。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种具有解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽的农药复配组合物，将微生物源环境友好型抗菌脂肽与化学杀菌剂结合起来，筛选新型增效组合，从而达到提高药效，化学杀菌剂减量使用和降低使用成本的目的。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

具有解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽的农药复配组合物，包括解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽和化学杀菌剂；所述解淀粉芽孢杆菌sj06的保藏号为cctccno：m2019864。

进一步地，所述化学杀菌剂包括吡唑醚菌酯、代森锰锌、丙环唑、戊唑醇、福美双、咪鲜胺、苯醚甲环唑和多菌灵中的一种或几种。

更进一步地，解淀粉芽孢杆菌sj06所产的脂肽和所述化学杀菌剂的体积比为1:9-9:1。

本发明的有益效果在于：本发明所提供的具有解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽的农药复配组合物，将微生物源环境友好型抗菌脂肽与化学杀菌剂结合起来，筛选新型增效组合，从而达到提高药效，化学杀菌剂减量使用和降低使用成本的目的。

附图说明

图1为解淀粉芽孢杆菌sj06的菌体形态示意图；

图2为解淀粉芽孢杆菌sj06的菌落形态示意图；

图3为解淀粉芽孢杆菌sj06的系统发育树。

具体实施方式

以下将结合附图对本发明作进一步的描述，需要说明的是，本实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。

1、本实施例解淀粉芽孢杆菌sj06的鉴定

本发明涉及的解淀粉芽孢杆菌sj06分离自安徽科技学院种植科技园农田，经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)，保藏号为cctccno.m2019864。菌体、菌落形态和系统发育树分别如图1、图2、图3所示。在na平板上初期菌落半透明中间稍隆起，表面干燥，边缘不整齐，后期菌落乳白色。菌体杆状、单个、成对或链状排列，菌株革兰氏阳性。在液体培养基中培养表面形成薄膜。该菌株的生理生化反应如表1所示。

表1解淀粉芽孢杆菌sj06的生理生化鉴定结果

注：“+”代表阳性反应；“—”代表阴性反应；“+-”代表弱阳性反应sj06的16srdna测序序列如seqno.1所示。

2、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物的制备方法

解淀粉芽孢杆菌sj06在na培养基上划线培养48h，挑取单菌落菌苔转接入nb液体培养基中，33℃、120r/min摇培12h，然后以10％(v/v)的接种量接种到nb培养基中，于33℃、120r/min培养8h，培养结束以11180g、4℃离心10min得菌体，用灭菌水调节菌悬液od600＝1.0作为种子液，以0.5％(v/v)的接种量接种到100mlnb培养基中，置于33℃、120r/min的恒温摇床中培养72h，然后11180g、4℃离心20min获取发酵上清液。将制得的发酵上清液用7mol/l盐酸调至ph＝2，然后分装到离心管中，每管8ml，过夜沉淀后以11180g、4℃离心20min，弃去上清液，向每管沉淀中加入0.5ml甲醇萃取8h，然后以11180g、4℃离心20min，取上清液；采取同样的方法再萃取2次，合并3次上清液保存于4℃冰箱备用。经测定，脂肽粗提液的密度为0.797g/ml。

3、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与吡唑醚菌酯复配的抑菌活性

3.1、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与吡唑醚菌酯复配对小麦赤霉病菌的抑制活性

由表2可知，解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物的浓度从6.25ml/l增至50.00ml/l，在26℃恒温恒湿培养箱中培养96h对小麦赤霉病菌的抑制率从45.10％增至89.66％，经spss13.0软件分析得出解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物对小麦赤霉病菌的ec50为9.0μl/ml(r²＝0.96)。吡唑醚菌酯对小麦赤霉病菌的ec50为4.80mg/l。

按照horsfall的方法得出，解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为9：1时，毒性比达1.35，增效作用显著(表3)。

表2

*表中数据为平均值±标准误，下同。

表3

3.2、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对玉米小斑病菌抑制活性

由表4可知，sj06产脂肽粗提物的浓度从0.083μl/ml增至1.67μl/ml，在27℃恒温恒湿培养箱中培养108h对玉米小斑病菌的抑制率从17.72％增至82.07％，经spss13.0软件分析得出sj06产脂肽粗提物对玉米小斑病菌的ec50为0.24μl/ml(r²＝0.95)。吡唑醚菌酯对玉米小斑病菌的ec50为1.10mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为9：1时，毒性比达1.21(表5)。

表4

表5

3.3、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对玉米大斑病菌抑制活性

由表6可知，sj06产脂肽粗提物的浓度从0.083μl/ml增至1.00μl/ml，在26℃恒温恒湿培养箱中培养108h对玉米大斑病菌的抑制率从35.5％增至86.2％，经spss13.0软件分析，sj06产脂肽粗提物对玉米大斑病菌的ec50为0.115μl/ml。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为0.60mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为8：2时，增效作用显著，毒性比最高达1.54(表7)。

表6

表7

3.4、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对玉米弯孢霉叶斑病菌抑制活性

由表8可知，sj06产脂肽粗提物的浓度从0.083μl/ml增至1.667μl/ml，在27℃恒温恒湿培养箱中培养120h对玉米弯孢霉叶斑病菌的抑制率从21.38％增至80.34％，经spss13.0软件分析得出脂肽类粗提物对玉米弯孢霉叶斑病菌的ec50为0.248μl/ml(r²＝0.96)。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为0.75mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为9：1时，毒性比达1.29，增效作用显著(表9)。

表8

表9

3.5、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对番茄灰霉病菌抑制活性

由表10可知，sj06产脂肽粗提物的浓度从1.25μl/ml增至20.0μl/ml，在24℃恒温恒湿培养箱中培养120h对番茄灰霉病菌的抑制率从18.81％增至93.88％，经spss13.0软件分析得出sj06产脂肽粗提物对番茄灰霉病菌的ec50为3.31μl/ml(r²＝0.97)。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为2.75mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为8：2时，毒性比达1.49，增效作用显著(表11)。

表10

表11

3.6、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对苹果树腐烂病菌抑制活性

由表12可知，sj06产脂肽粗提物的浓度8.33μl/ml增至25.00μl/ml，在27℃恒温恒湿培养箱中培养96h对苹果树腐烂病菌的抑制率从21.51％增至83.52％，经spss13.0软件分析得出sj06产脂肽粗提物对病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为6.92mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为6：4时，毒性比达1.72，增效作用显著(表13)。

表12

表13

3.7、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对苹果斑点落叶病菌抑制活性

由表14可知，sj06产脂肽粗提物浓度从0.31μl/ml增至2.50μl/ml，在26℃恒温恒湿培养箱中培养96h对苹果斑点落叶病菌的抑制率从32.10％增至81.40％，经spss13.0软件分析得出sj06产脂肽粗提物对苹果斑点落叶病菌的ec50为0.53μl/ml(r²＝0.95)。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为1.77mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为7：3时，毒性比达1.40，增效作用显著(表15)。

表14

表15

3.8、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对花生褐斑病菌的抑制活性

由表16可知，脂肽浓度从10.00μl/ml增至33.3μl/ml，在26℃恒温恒湿培养箱中培养96h对花生褐斑病菌的抑制率从40.15％增至75.85％，经spss13.0软件分析得出sj06产脂肽粗提物对花生褐斑病菌的ec50为14.36μl/ml(r²＝0.95)。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为5.40mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为7：3时，毒性比达1.55，增效作用显著(表17)。

表16

表17

3.9、sj06产脂肽粗提物与吡唑醚菌酯复配对辣椒炭疽病菌的抑制活性

由表18可知，sj06产脂肽粗提物的浓度从5.0μl/ml增至50μl/ml，在27℃恒温恒湿培养箱中培养240h对辣椒炭疽病菌的抑制率从46.95％增至96.36％，经spss13.0软件分析得出sj06产脂肽粗提物对辣椒炭疽病菌的ec50为5.89μl/ml。吡唑醚菌酯对病菌的ec50为0.96mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和吡唑醚菌酯体积为5：5时，毒性比达1.10(表19)。

表18

表19

4、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与代森锰锌复配的抑菌活性

4.1、sj06产脂肽粗提物与代森锰锌复配对玉米大斑病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对玉米大斑病菌的ec50为0.115μl/ml。代森锰锌对病菌的ec50为9.0mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和代森锰锌体积为1：9时，毒性比达1.36(表20)。

表20

4.2、sj06产脂肽粗提物与代森锰锌复配对小麦全蚀病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对小麦全蚀病菌的ec50为0.41μl/ml。代森锰锌对小麦全蚀病菌的ec50为16.0mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和代森锰锌体积为1：9时，毒性比达1.29(表21)。

表21

4.3、sj06产脂肽粗提物与代森锰锌复配对苹果斑点落叶病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对苹果斑点落叶病菌的ec50为0.53μl/ml(r²＝0.95)。代森锰锌对病菌的ec50为4.07mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和代森锰锌体积为7：3时，毒性比达1.41，增效作用显著(表22)。

表22

4.4、sj06产脂肽粗提物与代森锰锌复配对苹果树腐烂病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对苹果树腐烂病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。代森锰锌对病菌的ec50为10.76mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和代森锰锌体积为2：8时，毒性比达1.22，增效作用显著(表23)。

表23

5、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与丙环唑复配的抑菌活性

5.1、sj06产脂肽粗提物与丙环唑复配对苹果树腐烂病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对苹果树腐烂病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。丙环唑对病菌的ec50为0.57mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和丙环唑体积为5：5时，毒性比达1.48，增效作用显著(表24)。

表24

5.2、sj06产脂肽粗提物与丙环唑复配对花生褐斑病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对花生褐斑病菌的ec50为14.36μl/ml(r²＝0.95)。丙环唑对病菌的ec50为4.50mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和丙环唑体积为1：9时，毒性比达1.41，增效作用显著(表25)。

表25

6、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与戊唑醇复配的抑菌活性

6.1、sj06产脂肽粗提物与戊唑醇复配对苹果树腐烂病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对苹果树腐烂病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。戊唑醇对病菌的ec50为0.33mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和戊唑醇体积为6：4时，毒性比达1.33，增效作用显著(表26)。

表26

6.2、sj06产脂肽粗提物与戊唑醇复配对水稻纹枯病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对水稻纹枯病菌的ec50为4.63μl/ml(r²＝0.95)。戊唑醇对病菌的ec50为0.33mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和戊唑醇体积为6：4时，毒性比达1.75，增效作用显著(表27)。

表27

7、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与咪鲜胺复配的抑菌活性

7.1、sj06产脂肽粗提物与咪鲜胺复配对苹果树腐烂病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对苹果树腐烂病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。咪鲜胺对病菌的ec50为0.12mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和咪鲜胺体积为3：7时，毒性比达1.52，增效作用显著(表28)。

表28

7.2、sj06产脂肽粗提物与咪鲜胺复配对玉米弯孢霉叶斑病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对玉米弯孢霉叶斑病菌的ec50为0.248μl/ml(r²＝0.96)。咪鲜胺对病菌的ec50为0.17mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和咪鲜胺体积为6：4时，毒性比达1.32，增效作用显著(表29)。

表29

8、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与福美双复配的抑菌活性

8.1、sj06产脂肽粗提物与福美双复配对苹果树腐烂病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对苹果树腐烂病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。福美双对病菌的ec50为4.50mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和福美双体积为6：4时，毒性比达1.48，增效作用显著(表30)。

表30

8.2、sj06产脂肽粗提物与福美双复配对玉米弯孢霉叶斑病菌的抑制活性

sj06产脂肽粗提物对玉米弯孢霉叶斑病菌的ec50为0.248μl/ml(r²＝0.96)。福美双对病菌的ec50为3.13mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和福美双体积为6：4时，毒性比达1.35，增效作用显著(表31)。

表31

9、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与苯醚甲环唑复配的抑菌活性

sj06产脂肽粗提物对水稻纹枯病菌的ec50为4.63μl/ml(r²＝0.95)。苯醚甲环唑对病菌的ec50为6.47mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和苯醚甲环唑体积为9：1时，毒性比达1.26，增效作用显著(表32)。

表32

10、解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽粗提物及其与多菌灵复配的抑菌活性

sj06产脂肽粗提物对苹果树腐烂病菌的ec50为14.75μl/ml(r²＝0.95)。多菌灵对病菌的ec50为0.64mg/l。按照horsfall的方法得出，sj06产脂肽粗提物和多菌灵体积为7：3时，毒性比达1.70，增效作用显著(表33)。

表33

对于本领域的技术人员来说，可以根据以上的技术方案和构思，给出各种相应的改变和变形，而所有的这些改变和变形，都应该包括在本发明权利要求的保护范围之内。

序列表

<110>申请人名称

<120>具有解淀粉芽孢杆菌sj06产脂肽的复配农药组合物

<130>123

<160>1

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1337

<212>dna

<213>bacillusamyloliquefaciens

<400>1

ttgctccctgatgttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctgtaagac60

tgggataactccgggaaaccggggctaataccggatggttgtctgaaccgcatggttcag120

acataaaaggtggcttcggctaccacttacagatggacccgcggcgcattagctagttgg180

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