本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种凤凰木人工种子的制作方法。
背景技术：
凤凰木(学名：delonixregia)，取名于“叶如飞凰之羽，花若丹凤之冠”，别名凤凰树、凤凰花、火凤凰、金凤花、火焰木、红火楹、红花楹树(广州)、火树、影树、洋楹以及火树等。凤凰木原产非洲马达加斯加，是世界著名的园林绿化树种，在热带地区引种栽培较为普遍。凤凰木为豆科凤凰木属的植物。落叶乔木，高可达20米。树冠宽广。二回羽状复叶，小叶长椭圆形。夏季开花，总状花序，花大，红色，有光泽。荚果木质，长可达50厘米。凤凰木因鲜红或橙色的花朵配合鲜绿色的羽状复叶，被誉为世上最色彩鲜艳的树木之一。它以华丽的花朵与蕨类植物般的绿叶出色。
凤凰木植株高大，由于树冠横展而下垂，浓密阔大而招风，在热带地区担任遮荫树的角色。分布于中国南部及西南部、原产地马达加斯加及世界各热带地方。凤凰木为热带树种，种植6～8年开始开花，喜高温多湿和阳光充足环境，生长适温20～30℃，不耐寒，冬季温度不低于10℃。以深厚肥沃、富含有机质的沙质壤土为宜；怕积水，排水须良好，较耐干旱；耐瘠薄土壤。一般1年生高可达1.5～2米，2年生高可达3～4米，种植6～8年始花。
凤凰木常用的繁殖方法是播种育苗。种子千粒重约400克。种皮坚硬吸水困难，需用水进行浸泡。用条点播法播种，幼苗对霜冻较敏感，早期可施综合性肥料，少施氮肥，入秋以后应停止施肥，促其早日木质化。进入冬季，如叶片尚未脱落，可用人工剪去，并用薄膜覆盖或单株包裹防霜。1年生苗可出圃定植。但是种子发芽率较低，育苗实践中发现，由于其种子外层裹有坚硬胶质，不易吸水，严重阻碍种子发芽，未经任何处理的种子发芽率只有10％左右，正常发育为种苗的仅为一半左右，而经过物理擦破种皮的发芽率也仅有31％，并且物理擦破种皮的方式难以操作，易将种子内部结构破坏，使其不能发芽或不能健康成长为植株。另外，凤凰木种子的寿命也很短，保存一年后其发芽率大幅度降低。严重影响了凤凰木的苗木生产和推广种植。
经过研究探索发现凤凰木人工种子有着比正常种子高很多的发芽率和成苗率，并且所得到的人工种子苗有很强的抗病虫害能力，更容易长成一棵成年的凤凰木。因此我们提出一种操作相对简单，成本低廉的人工种子的制作方法。
技术实现要素：
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种工艺简单且成本低廉的人工种子的制作方法，解决凤凰木种子发芽率低，成苗率更低，既浪费了种子，又加大了投资的问题。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种凤凰木人工种子的制作方法，包括以下步骤：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制ms培养基和激素母液；
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子进行常规消毒处理，首先自来水冲洗40-80min，再用60％-80％的酒精浸泡冲洗5-15min，用无菌水冲洗2-4次，最后用6％-10％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗5-10min，在超净工作台上用无菌水冲洗4-6次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡；
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用30-60mg/l的赤霉素溶液浸泡20-40min，用浓硫酸拌种20-40min再用清水清洗，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba8-12mg/l+naa0.5-2mg/l；
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养30-40天后，凤凰木小苗生长到高度为8-10厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种胚；
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.2-0.3mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液；
在预先配制的2％-4％海藻酸钠溶液中加入3-5mg/l6-ba和8-12mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液；
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡2-5min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡10-20min，形成人工种子后用无菌水冲洗2-4次，吸取表面水分得到人工种子。
作为本发明再进一步的方案：步骤2中实验室和实验用具的消毒方法为：实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。
作为本发明再进一步的方案：步骤2中配制的ms培养基和激素母液消毒方法为：配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min；配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
作为本发明再进一步的方案：步骤3中所述种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后再进行常规消毒处理。
作为本发明再进一步的方案：步骤3中种子消毒处理方法为：首先自来水冲洗60min，再用70％酒精浸泡冲洗10min，用无菌水冲洗3次，最后用8％次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤4种子接种前在超净工作台用45mg/l的赤霉素溶液浸泡30min，用98％浓硫酸拌种30min再用清水清洗，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤4中添加激素母液的ms培养基配方是ms+6-ba10mg/l+naa1mg/l。
作为本发明再进一步的方案：步骤4中所述的培养条件为：光照强度1200-1500lx，光照时间10-12小时/天，温度23℃±2℃。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤6中人工种皮和人工胚乳制备的具体方法为：在预先配制的0.2mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获取a溶液；
在预先配制的4％海藻酸钠溶液中加入4mg/l的6-ba和10mg/l的naa，获取半凝胶状态的b溶液。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤7的人工种子包埋的具体方法为：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡3-4min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡15min，形成人工种子后用无菌水冲洗2-3次，吸取表面水分得到人工种子。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明可以实现凤凰木大规模的快速繁殖；
(2)本发明的人工种子生产不受季节的限制，工艺操作简单，重复性好；
(3)本发明中人工种皮、人工胚乳的材料来源简便，操作简易；
(4)本发明生产的人工种子体积小，运输及保存方便、成本低廉，且能大幅度提高凤凰木种子的发芽率和生根率，具有较好的经济效益和社会效益。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚和完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1：
凤凰木人工种子的制作方法，包括以下步骤：
步骤1、种子的采集，采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
步骤2、实验前给实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头；配制ms培养基和所需的激素母液：6-ba10㎎/l、naa10㎎/l。配制好的培养基在使用前需要进行高压锅灭菌。配制好的激素需要用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。其中高压锅的使用条件为121℃、18min；
步骤3、将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规的消毒处理。即先将种子放在自来水下进行冲洗40-80min。将水龙头打开，把种子放在水口下面，直接进行冲洗，水可以较大，因为凤凰木种子壳较为坚硬。冲洗完成后放入60％-80％的酒精中进行浸泡冲洗5-15min，浸泡过程中可轻微摇荡，浸泡完成后用已灭菌好的无菌水冲洗2-4次，然后再用6％-10％次氯酸钠溶液浸泡冲洗5-10min，冲洗过程中也需进行摇荡。冲洗完成后在超净工作台用无菌水冲洗4-6次。优选的消毒方法为：即先将种子放在自来水下进行冲洗60min。冲洗完成后放入70％的酒精中浸泡冲洗10min，浸泡完成后用已灭菌好的无菌水冲洗3次，然后再用8％次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min。冲洗完成后在超净工作台用无菌水冲洗5次。注意次氯酸钠浸泡消毒完成后一定要在超净工作台用无菌水冲洗，前面酒精浸泡冲洗可不在超净工作台进行。其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
步骤4、将配制好的培养基放入灭菌锅中灭菌完成后，将其放入超净工作台，待其冷却到55℃左右时，添加琼脂并用移液枪量取激素添加后将其分装到培养瓶中，每瓶培养基40ml左右。培养基的配方为：ms+6-ba8-12mg/l+naa0.5-2mg/l，优选的培养基配方为：ms+6-ba10mg/l+naa1mg/l。注意不可使培养基冷却的温度过低，因为温度过低时培养基会凝固，不能分装而进行后续的操作。注：以上所有操作必须在超净工作台完成。
在次氯酸钠溶液消毒并用无菌水冲洗后，将种子放入配制好的30-60mg/l的赤霉素溶液中浸泡20-40min，再用清水洗净，可进行接种。优选在45mg/l的赤霉素溶液中浸泡30min后，用浓硫酸拌种30min,再用清水洗净。待上述配制好的培养基冷却凝固完成后进行接种。接种时用镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定，每瓶中放4-5颗种子，放置均匀。在用镊子放置种子时要将镊子在酒精上用火消毒。接种完成后在培养瓶上做好记录，将培养瓶从超净工作台上取出，放在(23±2)℃、光照时间为10-12小时/天、光照强度为1200-1500lx的条件下进行培养。接种后4-5天就会出现白白的芽尖稍稍冒出。
步骤5、将步骤4中的种子培养30-40天后，凤凰木小苗会生长到约8-10cm高度，然后将培养瓶消毒后放于超净工作台中，用已消毒的镊子小心的夹住小苗靠近下部的主体位置，轻轻的放于已消毒的培养瓶中。利用已消毒的剪刀剪下约2-4mm长度的带腋芽的茎段，留待使用。注意上述操作均在已预先消毒的超净工作台完成，并且使用的仪器都需要预先高压锅灭菌，为了防止得到的人工种子的胚染菌。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：人工种皮作为人工种子的外层保护基质，应该具有一定的强度，能够承受人工胚乳以及种胚的质量，保证种子在贮藏、运输等过程中的完整性。人工种胚生长发育和新陈代谢所需的生长调节物质及营养物质等均需人工胚乳提供。研究发现在人工胚乳中添加合适的激素可以提高人工种子的萌发率，并且在其中加入一些抗生素和一些杀菌杀虫剂可以增强植物对环境的适应性，提高其抗逆能力，并且不影响人工种子的发芽率和生长情况。
首先配制2％-4％海藻酸钠、0.2-0.3mol/lcacl2各1000ml，然后在配制完成的0.2-0.3mol/lcacl2溶液中加入3g0.3％多菌灵粉剂，消毒灭菌完成后放于超净工作台上留待使用。然后配制1mg/ml青霉素，在超净工作台外配制完成后给其表面进行消毒，消毒后放入超净工作台中，利用过滤头过滤后留待使用。人工种皮和人工胚乳所需的成分为3-5mg/l6-ba+8-12mg/lnaa+0.1mg/l青霉素+0.3％多菌灵粉剂，配制激素的母液为6-ba10㎎/ml、naa10㎎/ml、青霉素1mg/ml。将上述量激素用移液枪量取加入到上述配制的海藻酸溶液或cacl2溶液中，6-ba、naa加入到海藻酸钠溶液中，青霉素加入到cacl2溶液中。具体步骤是：在预先配制的0.2-0.3mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的2％-4％海藻酸钠溶液中加入3-5mg/l6-ba和8-12mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。优选的人工种皮和人工胚乳的制备方法是：在预先配制的0.2mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获取a溶液。在预先配制的4％海藻酸钠溶液中加入4mg/l的6-ba和10mg/l的naa，获取半凝胶状态的b溶液。注意上述操作均在已预先消毒的超净工作台完成，并且所用的所有仪器都需提前高压锅灭菌。
步骤7、人工种子的包埋：是否能够成功的包埋种子，对其萌发、贮藏、生产和应用有重要的基础意义。包埋成功的人工种子应能够正常萌发，具有一定的抗压性，能够经受种子在运输、贮存等过程中产生的碰撞而不会产生营养物质的泄露和种皮的碎裂。本发明采用的包埋方法为水凝胶法。首先将上述步骤5得到的人工种胚用镊子放入半凝胶状态的b溶液中充分混合，浸泡2-5min后用胶头滴管逐个吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液中浸泡10-20min，可形成人工种子，然后用无菌水冲洗2-4次，置于吸水纸表面吸取表面水分即得到人工种子。优选的人工种子包埋方法为：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡3-4min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡15min，形成人工种子后用无菌水冲洗2-3次，吸取表面水分得到人工种子。
本发明提供的ms配方为：大量元素：硝酸铵nh4no31650mg/l、硝酸钾kno31900mg/l、二水氯化钙cacl2·2h2o440mg/l、七水硫酸镁mgso4·7h2o370mg/l、磷酸二氢钾kh2po4170mg/l；
微量元素：碘化钾ki0.83mg/l、硼酸h3bo36.2mg/l、四水硫酸锰mnso4·4h2o22.3mg/l、七水硫酸锌znso4·7h2o8.6mg/l、二水钼酸钠na2moo4·2h2o0.25mg/l、五水硫酸铜cuso4·5h2o0.025mg/l、六水氯化钴cocl2·6h2o0.025mg/l；
铁盐：七水硫酸亚铁feso4·7h2o27.8mg/l、二水乙二胺四乙酸二钠na2-edta·2h2o37.3mg/l；
有机物质：肌醇100mg/l、烟酸vb5或vpp0.5mg/l、盐酸吡哆醇vb60.5mg/l、盐酸硫胺素vb10.1mg/l、甘氨酸2.0mg/l；
蔗糖30g/l；
琼脂7g/l。
实施例2：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗40min，再用80％的酒精浸泡冲洗5min，用无菌水冲洗3次，最后用10％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗5min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用60mg/l的赤霉素溶液浸泡30min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种20min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba10mg/l+naa1mg/l，培养条件为：光照强度1200lx，光照时间10小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养30天后，凤凰木小苗生长到高度为8厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.2mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的2％海藻酸钠溶液中加入5mg/l6-ba和8mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡3min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡20min，形成人工种子后用无菌水冲洗2次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例3：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗80min，再用70％的酒精浸泡冲洗15min，用无菌水冲洗2次，最后用6％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗10min，在超净工作台上用无菌水冲洗4次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用30mg/l的赤霉素溶液浸泡40min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种30min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba11mg/l+naa0.5mg/l，培养条件为：光照强度1500lx，光照时间12小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养40天后，凤凰木小苗生长到高度为10厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.3mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的4％海藻酸钠溶液中加入3mg/l6-ba和12mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡5min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡10min，形成人工种子后用无菌水冲洗3次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例4：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗60min，再用60％的酒精浸泡冲洗10min，用无菌水冲洗4次，最后用8％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗7min，在超净工作台上用无菌水冲洗6次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用45mg/l的赤霉素溶液浸泡20min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种40min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba12mg/l+naa1mg/l，培养条件为：光照强度1300lx，光照时间11小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养36天后，凤凰木小苗生长到高度为9.3厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.25mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的3％海藻酸钠溶液中加入4mg/l6-ba和10mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡2min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡15min，形成人工种子后用无菌水冲洗4次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例5：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗50min，再用75％的酒精浸泡冲洗7min，用无菌水冲洗3次，最后用7％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用55mg/l的赤霉素溶液浸泡35min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种25min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba8mg/l+naa2mg/l，培养条件为：光照强度1400lx，光照时间10小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养33天后，凤凰木小苗生长到高度为8.6厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.2mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的2％海藻酸钠溶液中加入3mg/l6-ba和9mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡4min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡18min，形成人工种子后用无菌水冲洗3次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例6：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗60min，再用70％的酒精浸泡冲洗10min，用无菌水冲洗3次，最后用8％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用45mg/l的赤霉素溶液浸泡30min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种30min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba10mg/l+naa1mg/l，培养条件为：光照强度1300lx，光照时间11小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养37天后，凤凰木小苗生长到高度为9.3厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.2mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的4％海藻酸钠溶液中加入4mg/l6-ba和10mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡3.5min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡15min，形成人工种子后用无菌水冲洗2次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例7：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗70min，再用68％的酒精浸泡冲洗11min，用无菌水冲洗3次，最后用9％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗6min，在超净工作台上用无菌水冲洗6次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用35mg/l的赤霉素溶液浸泡25min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种40min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba8mg/l+naa0.5mg/l，培养条件为：光照强度1500lx，光照时间10小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养32天后，凤凰木小苗生长到高度为8.5厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.3mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的3％海藻酸钠溶液中加入5mg/l6-ba和11mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡5min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡12min，形成人工种子后用无菌水冲洗2次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例8：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗80min，再用65％的酒精浸泡冲洗13min，用无菌水冲洗4次，最后用10％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用40mg/l的赤霉素溶液浸泡30min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种35min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba9mg/l+naa1mg/l，培养条件为：光照强度1400lx，光照时间11小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养34天后，凤凰木小苗生长到高度为8.8厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.26mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的3％海藻酸钠溶液中加入4mg/l6-ba和11mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡4min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡18min，形成人工种子后用无菌水冲洗3次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例9：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗40min，再用70％的酒精浸泡冲洗5min，用无菌水冲洗2次，最后用6％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗9min，在超净工作台上用无菌水冲洗4次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用50mg/l的赤霉素溶液浸泡35min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种25min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba10mg/l+naa1.5mg/l，培养条件为：光照强度1300lx，光照时间12小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养36天后，凤凰木小苗生长到高度为9.2厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.24mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的2％海藻酸钠溶液中加入4mg/l6-ba和10mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡3min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡16min，形成人工种子后用无菌水冲洗4次，吸取表面水分得到人工种子。
实施例10：
步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。配制ms培养基和激素母液，配制好的ms培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min。配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。
步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗55min，再用60％的酒精浸泡冲洗10min，用无菌水冲洗3次，最后用7％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗7min，在超净工作台上用无菌水冲洗4次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。
步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用60mg/l的赤霉素溶液浸泡40min，然后用质量分数为98％的浓硫酸拌种20min,再用清水洗净，然后接种在添加有琼脂和激素的ms培养基中培养，所述培养基的配方为：ms+6-ba11mg/l+naa2mg/l，培养条件为：光照强度1200lx，光照时间12小时/天，温度23℃±2℃。
步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养38天后，凤凰木小苗生长到高度为9.7厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种子的胚。
步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.3mol/l氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/l青霉素，获得a溶液。在预先配制的4％海藻酸钠溶液中加入5mg/l6-ba和8mg/lnaa，获得半凝胶状态的b溶液。
步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入b溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡2min，然后用滴管吸取混合有b溶液的人工种胚滴入a溶液内浸泡15min，形成人工种子后用无菌水冲洗2次，吸取表面水分得到人工种子。
对比例：
采用当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子。
试验方法：
(1)从凤凰木所在地区采集足够数量的原生壤土，与细沙按照1:1的比例进行混合并分装在花盆中；
(2)保证种子萌发所需的土壤环境，给其适宜的温度、湿度和所需的养分。
利用上述实施例2-10和对比例的种子，从下表的结果可以看出，实施例中凤凰木人工种子的技术指标远超过对比例。
表1实施例设计方案与对比例效果的比较
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。