本发明涉及植物脱毒培养快繁技术领域，具体涉及一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法。
背景技术：
生姜是姜科多年生草本植物姜(zingiberofficinaleroscoe)的新鲜根茎，别名有姜根、百辣云、勾装指、因地辛、炎凉小子、鲜生姜、蜜炙姜。姜的根茎(干姜)、栓皮(姜皮)、叶(姜叶)均可入药。性温，其特有的“姜辣素”能刺激胃肠黏膜，使胃肠道充血，消化能力增强，能有效地治疗吃寒凉食物过多而引起的腹胀、腹痛、腹泻、呕吐等。
现有技术存在以下不足：生姜的繁殖主要通过地下根状茎进行无性繁殖，由于其生长发育未经有性世代，病毒易在体内积累，导致生姜叶片皱缩、生长缓慢、产量降低及品质退化等问题。
技术实现要素：
为此，本发明提供一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，通过选取优质的生姜作为育苗母体，繁育过程中进行两次脱毒处理，达到优质的脱毒效果，可以减少病毒的危害，保证生姜苗品质优良，采用穴盘培育芽株的方式进行初步的土壤基质培养，提高作物品质，满足市场需求，成苗率得到显著提高，增强植株的抗病能力，以解决现有技术中由于无性繁殖，由于其生长发育未经有性世代，病毒易在体内积累，导致生姜叶片皱缩、生长缓慢、产量降低及品质退化导致的问题。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，具体包括如下步骤：
步骤一：生姜催芽：选取本色淡黄，外表粗糙干燥的生姜块，利用自来水冲洗干净，用75％酒精浸泡消毒30-40s，用无菌水冲洗1-2次，放入无菌水中等待生姜出芽；
步骤二：出芽提取：切取步骤一中生姜萌发的幼芽1-2cm，剥去幼芽的最外层，用无菌水冲洗干净，然后用75％酒精浸泡消毒1-2min，用无菌水冲洗2-3次，再用6％的次氯酸钠消毒10-15min，继续用无菌水冲洗3-4次，得到消毒幼芽；
步骤三：初代培养：步骤二中灭菌后的芽切取茎尖0.5-1cm接种到培养基上，在温度为22-25℃、在黑暗的条件下进行培养；
步骤四：继代提取培养：在步骤三中培养的芽茎尖长到1-2cm时取出，取茎尖0.5-1cm接种至新的培养基上，在温度为22-25℃的条件下进行暗培养9-10天，再在温度为20-21℃、光照强度为1500-1800lx、光照时间为12-16h/d的条件下进行培养，得到脱毒苗；
步骤五：增殖生根培养：选取步骤四中脱毒苗长至2-2.5cm的芽株，接种到快速增殖培养基上进行快速增殖生根培养；
步骤六：土壤基质培养：将步骤五中生根的芽株装入穴盘，植入土壤基质中进行培育，均匀浇洒0.1％多菌灵溶液定根，温度维持在20-28℃，每周喷施1次促根剂和1/2ms营养液，培养4-5周；
步骤七：移栽驯化；对步骤六中的生姜幼株进行拣选活株，并将成活品质好的植株移栽至泥炭土混合基质中，培养期间每周进行一次施肥，同时每月进行一次病虫防治。
进一步的，所述步骤3中和步骤4中所用培养基为含有6-ba0.3-0.5mg/l、kt1.0-1.2mg/l和naa0.05-0.07mg/l、蔗糖16-20g/l和5.0-6.0g/l琼脂的ms培养基，培养基ph为5.0-5.5。
进一步的，所述步骤5中所使用的快速增殖培养基为含有的0.5-1.0mg/l吲哚丁酸、0.1-0.3mg/l赤霉素、0.05-0.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤、18-23g/l蔗糖、5.0-6.0g/l琼脂的改良wpm培养基，改良wpm培养基ph为5.4-5.6。
进一步的，所述步骤三中切取的茎尖经过2-3次无菌水浸泡清洗后再接种至基础培养基。
进一步的，所述步骤四中对茎尖的切取环境为无菌环境。
进一步的，所述步骤五中增殖生根的条件为控制相对湿度控制为80％-90％，温度为22-25℃，培养20-30天。
进一步的，所述步骤六中对植入土壤基质中的芽株进行塑料薄膜和遮阳网覆盖处理，培养后2周对塑料薄膜和遮阳网进行去除。
进一步的，所述步骤七中泥炭土混合基质为泥炭土、蛭石和木屑按照体积比2-1:1-2：0.3-0.7，搅拌20％的多菌灵形成的混合物。
进一步的，所述步骤七中施肥用料为生物水溶肥料，包括以下重量份的组分：链霉素代谢物0.3-0.5份、氨基酸10-15份、氮磷钾85-90份。
本发明具有如下优点：
本发明通过选取优质的生姜作为育苗母体，茎尖脱毒培养得到初代脱毒苗，再进行初代脱毒苗茎尖组织再次脱毒培养得到继代脱毒苗，繁育过程中进行两次脱毒处理，达到优质的脱毒效果，可以减少病毒的危害，保证生姜苗品质优良，适合工厂化育苗，可商品化生产，同时采用穴盘培育芽株的方式进行初步的土壤基质培养，方便对成活品质好的幼株进行拣选，提高作物品质，满足市场需求，成苗率得到显著提高，增强植株的抗病能力。
具体实施方式
以下由特定的具体说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，具体包括如下步骤：
步骤一：生姜催芽：选取本色淡黄，外表粗糙干燥的生姜块，利用自来水冲洗干净，用75％酒精浸泡消毒30-40s，用无菌水冲洗1-2次，放入无菌水中等待生姜出芽；
步骤二：出芽提取：切取步骤一中生姜萌发的幼芽1-2cm，剥去幼芽的最外层，用无菌水冲洗干净，然后用75％酒精浸泡消毒1-2min，用无菌水冲洗2-3次，再用6％的次氯酸钠消毒10min，继续用无菌水冲洗3-4次，得到消毒幼芽；
步骤三：初代培养：步骤二中灭菌后的芽切取茎尖0.5-1cm接种到培养基上，在温度为22-25℃、在黑暗的条件下进行培养；
步骤四：继代提取培养：在步骤三中培养的芽茎尖长到1-2cm时取出，取茎尖0.5-1cm接种至新的培养基上，在温度为22-25℃的条件下进行暗培养9-10天，再在温度为20-21℃、光照强度为1500-1800lx、光照时间为12-16h/d的条件下进行培养，得到脱毒苗；
步骤五：增殖生根培养：选取步骤四中脱毒苗长至2-2.5cm的芽株，接种到快速增殖培养基上进行快速增殖生根培养；
步骤六：土壤基质培养：将步骤五中生根的芽株装入穴盘，植入土壤基质中进行培育，均匀浇洒0.1％多菌灵溶液定根，温度维持在20-28℃，每周喷施1次促根剂和1/2ms营养液，培养4-5周；
步骤七：移栽驯化；对步骤六中的生姜幼株进行拣选活株，并将成活品质好的植株移栽至泥炭土混合基质中，培养期间每周进行一次施肥，同时每月进行一次病虫防治。
进一步的，所述步骤3中和步骤4中所用培养基为含有6-ba0.3mg/l、kt1.0mg/l和naa0.05mg/l、蔗糖16g/l和5.0g/l琼脂的ms培养基，培养基ph为5.0。
进一步的，所述步骤5中所使用的快速增殖培养基为含有的0.5mg/l吲哚丁酸、0.1mg/l赤霉素、0.05mg/l6-苄氨基腺嘌呤、18g/l蔗糖、5.0g/l琼脂的改良wpm培养基，改良wpm培养基ph为5.4。
进一步的，所述步骤三中切取的茎尖经过2-3次无菌水浸泡清洗后再接种至基础培养基。
进一步的，所述步骤四中对茎尖的切取环境为无菌环境。
进一步的，所述步骤五中增殖生根的条件为控制相对湿度控制为80％-90％，温度为22-25℃，培养20-30天。
进一步的，所述步骤六中对植入土壤基质中的芽株进行塑料薄膜和遮阳网覆盖处理，培养后2周对塑料薄膜和遮阳网进行去除。
进一步的，所述步骤七中泥炭土混合基质为泥炭土、蛭石和木屑按照体积比2-1:1-2：0.3-0.7，搅拌20％的多菌灵形成的混合物。
进一步的，所述步骤七中施肥用料为生物水溶肥料，包括以下重量份的组分：链霉素代谢物0.3-0.5份、氨基酸10-15份、氮磷钾85-90份。
实施例2：
一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，具体包括如下步骤：
步骤一：生姜催芽：选取本色淡黄，外表粗糙干燥的生姜块，利用自来水冲洗干净，用75％酒精浸泡消毒30-40s，用无菌水冲洗1-2次，放入无菌水中等待生姜出芽；
步骤二：出芽提取：切取步骤一中生姜萌发的幼芽1-2cm，剥去幼芽的最外层，用无菌水冲洗干净，然后用75％酒精浸泡消毒1-2min，用无菌水冲洗2-3次，再用6％的次氯酸钠消毒10min，继续用无菌水冲洗3-4次，得到消毒幼芽；
步骤三：初代培养：步骤二中灭菌后的芽切取茎尖0.5-1cm接种到培养基上，在温度为22-25℃、在黑暗的条件下进行培养；
步骤四：继代提取培养：在步骤三中培养的芽茎尖长到1-2cm时取出，取茎尖0.5-1cm接种至新的培养基上，在温度为22-25℃的条件下进行暗培养9-10天，再在温度为20-21℃、光照强度为1500-1800lx、光照时间为12-16h/d的条件下进行培养，得到脱毒苗；
步骤五：增殖生根培养：选取步骤四中脱毒苗长至2-2.5cm的芽株，接种到快速增殖培养基上进行快速增殖生根培养；
步骤六：土壤基质培养：将步骤五中生根的芽株装入穴盘，植入土壤基质中进行培育，均匀浇洒0.1％多菌灵溶液定根，温度维持在20-28℃，每周喷施1次促根剂和1/2ms营养液，培养4-5周；
步骤七：移栽驯化；对步骤六中的生姜幼株进行拣选活株，并将成活品质好的植株移栽至泥炭土混合基质中，培养期间每周进行一次施肥，同时每月进行一次病虫防治。
进一步的，所述步骤3中和步骤4中所用培养基为含有6-ba0.5mg/l、kt1.2mg/l和naa0.07mg/l、蔗糖20g/l和6.0g/l琼脂的ms培养基，培养基ph为5.5。
进一步的，所述步骤5中所使用的快速增殖培养基为含有的1.0mg/l吲哚丁酸、0.3mg/l赤霉素、0.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤、23g/l蔗糖、6.0g/l琼脂的改良wpm培养基，改良wpm培养基ph为5.6。
进一步的，所述步骤三中切取的茎尖经过2-3次无菌水浸泡清洗后再接种至基础培养基。
进一步的，所述步骤四中对茎尖的切取环境为无菌环境。
进一步的，所述步骤五中增殖生根的条件为控制相对湿度控制为80％-90％，温度为22-25℃，培养20-30天。
进一步的，所述步骤六中对植入土壤基质中的芽株进行塑料薄膜和遮阳网覆盖处理，培养后2周对塑料薄膜和遮阳网进行去除。
进一步的，所述步骤七中泥炭土混合基质为泥炭土、蛭石和木屑按照体积比2-1:1-2：0.3-0.7，搅拌20％的多菌灵形成的混合物。
进一步的，所述步骤七中施肥用料为生物水溶肥料，包括以下重量份的组分：链霉素代谢物0.3-0.5份、氨基酸10-15份、氮磷钾85-90份
实施例3：
一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，具体包括如下步骤：
步骤一：生姜催芽：选取本色淡黄，外表粗糙干燥的生姜块，利用自来水冲洗干净，用75％酒精浸泡消毒30-40s，用无菌水冲洗1-2次，放入无菌水中等待生姜出芽；
步骤二：出芽提取：切取步骤一中生姜萌发的幼芽1-2cm，剥去幼芽的最外层，用无菌水冲洗干净，然后用75％酒精浸泡消毒1-2min，用无菌水冲洗2-3次，再用6％的次氯酸钠消毒12min，继续用无菌水冲洗3-4次，得到消毒幼芽；
步骤三：初代培养：步骤二中灭菌后的芽切取茎尖0.5-1cm接种到培养基上，在温度为22-25℃、在黑暗的条件下进行培养；
步骤四：继代提取培养：在步骤三中培养的芽茎尖长到1-2cm时取出，取茎尖0.5-1cm接种至新的培养基上，在温度为22-25℃的条件下进行暗培养9-10天，再在温度为20-21℃、光照强度为1500-1800lx、光照时间为12-16h/d的条件下进行培养，得到脱毒苗；
步骤五：增殖生根培养：选取步骤四中脱毒苗长至2-2.5cm的芽株，接种到快速增殖培养基上进行快速增殖生根培养；
步骤六：土壤基质培养：将步骤五中生根的芽株装入穴盘，植入土壤基质中进行培育，均匀浇洒0.1％多菌灵溶液定根，温度维持在20-28℃，每周喷施1次促根剂和1/2ms营养液，培养4-5周；
步骤七：移栽驯化；对步骤六中的生姜幼株进行拣选活株，并将成活品质好的植株移栽至泥炭土混合基质中，培养期间每周进行一次施肥，同时每月进行一次病虫防治。
进一步的，所述步骤3中和步骤4中所用培养基为含有6-ba0.4mg/l、kt1.1mg/l和naa0.06mg/l、蔗糖18g/l和5.5g/l琼脂的ms培养基，培养基ph为5.2。
进一步的，所述步骤5中所使用的快速增殖培养基为含有的0.7mg/l吲哚丁酸、0.2mg/l赤霉素、0.1mg/l6-苄氨基腺嘌呤、20g/l蔗糖、5.5g/l琼脂的改良wpm培养基，改良wpm培养基ph为5.5。
进一步的，所述步骤三中切取的茎尖经过2-3次无菌水浸泡清洗后再接种至基础培养基。
进一步的，所述步骤四中对茎尖的切取环境为无菌环境。
进一步的，所述步骤五中增殖生根的条件为控制相对湿度控制为80％-90％，温度为22-25℃，培养20-30天。
进一步的，所述步骤六中对植入土壤基质中的芽株进行塑料薄膜和遮阳网覆盖处理，培养后2周对塑料薄膜和遮阳网进行去除。
进一步的，所述步骤七中泥炭土混合基质为泥炭土、蛭石和木屑按照体积比2-1:1-2：0.3-0.7，搅拌20％的多菌灵形成的混合物。
进一步的，所述步骤七中施肥用料为生物水溶肥料，包括以下重量份的组分：链霉素代谢物0.3-0.5份、氨基酸10-15份、氮磷钾85-90份
实施例4：
一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，具体包括如下步骤：
步骤一：生姜催芽：选取本色淡黄，外表粗糙干燥的生姜块，利用自来水冲洗干净，用75％酒精浸泡消毒30-40s，用无菌水冲洗1-2次，放入无菌水中等待生姜出芽；
步骤二：出芽提取：切取步骤一中生姜萌发的幼芽1-2cm，剥去幼芽的最外层，用无菌水冲洗干净，然后用75％酒精浸泡消毒1-2min，用无菌水冲洗2-3次，再用6％的次氯酸钠消毒15min，继续用无菌水冲洗3-4次，得到消毒幼芽；
步骤三：初代培养：步骤二中灭菌后的芽切取茎尖0.5-1cm接种到培养基上，在温度为22-25℃、在黑暗的条件下进行培养；
步骤四：继代提取培养：在步骤三中培养的芽茎尖长到1-2cm时取出，取茎尖0.5-1cm接种至新的培养基上，在温度为22-25℃的条件下进行暗培养9-10天，再在温度为20-21℃、光照强度为1500-1800lx、光照时间为12-16h/d的条件下进行培养，得到脱毒苗；
步骤五：增殖生根培养：选取步骤四中脱毒苗长至2-2.5cm的芽株，接种到快速增殖培养基上进行快速增殖生根培养；
步骤六：土壤基质培养：将步骤五中生根的芽株装入穴盘，植入土壤基质中进行培育，均匀浇洒0.1％多菌灵溶液定根，温度维持在20-28℃，每周喷施1次促根剂和1/2ms营养液，培养4-5周；
步骤七：移栽驯化；对步骤六中的生姜幼株进行拣选活株，并将成活品质好的植株移栽至泥炭土混合基质中，培养期间每周进行一次施肥，同时每月进行一次病虫防治。
进一步的，所述步骤3中和步骤4中所用培养基为含有6-ba0.3mg/l、kt1.0mg/l和naa0.05mg/l、蔗糖16g/l和5.0g/l琼脂的ms培养基，培养基ph为5.0。
进一步的，所述步骤5中所使用的快速增殖培养基为含有的0.5mg/l吲哚丁酸、0.1mg/l赤霉素、0.05mg/l6-苄氨基腺嘌呤、18g/l蔗糖、5.0g/l琼脂的改良wpm培养基，改良wpm培养基ph为5.4。
进一步的，所述步骤三中切取的茎尖经过2-3次无菌水浸泡清洗后再接种至基础培养基。
进一步的，所述步骤四中对茎尖的切取环境为无菌环境。
进一步的，所述步骤五中增殖生根的条件为控制相对湿度控制为80％-90％，温度为22-25℃，培养20-30天。
进一步的，所述步骤六中对植入土壤基质中的芽株进行塑料薄膜和遮阳网覆盖处理，培养后2周对塑料薄膜和遮阳网进行去除。
进一步的，所述步骤七中泥炭土混合基质为泥炭土、蛭石和木屑按照体积比2-1:1-2：0.3-0.7，搅拌20％的多菌灵形成的混合物。
进一步的，所述步骤七中施肥用料为生物水溶肥料，包括以下重量份的组分：链霉素代谢物0.3-0.5份、氨基酸10-15份、氮磷钾85-90份。
实施例5：
一种生姜茎尖的高效脱毒繁育方法，具体包括如下步骤：
步骤一：生姜催芽：选取本色淡黄，外表粗糙干燥的生姜块，利用自来水冲洗干净，用75％酒精浸泡消毒30-40s，用无菌水冲洗1-2次，放入无菌水中等待生姜出芽；
步骤二：出芽提取：切取步骤一中生姜萌发的幼芽1-2cm，剥去幼芽的最外层，用无菌水冲洗干净，然后用75％酒精浸泡消毒1-2min，用无菌水冲洗2-3次，再用6％的次氯酸钠消毒15min，继续用无菌水冲洗3-4次，得到消毒幼芽；
步骤三：初代培养：步骤二中灭菌后的芽切取茎尖0.5-1cm接种到培养基上，在温度为22-25℃、在黑暗的条件下进行培养；
步骤四：继代提取培养：在步骤三中培养的芽茎尖长到1-2cm时取出，取茎尖0.5-1cm接种至新的培养基上，在温度为22-25℃的条件下进行暗培养9-10天，再在温度为20-21℃、光照强度为1500-1800lx、光照时间为12-16h/d的条件下进行培养，得到脱毒苗；
步骤五：增殖生根培养：选取步骤四中脱毒苗长至2-2.5cm的芽株，接种到快速增殖培养基上进行快速增殖生根培养；
步骤六：土壤基质培养：将步骤五中生根的芽株装入穴盘，植入土壤基质中进行培育，均匀浇洒0.1％多菌灵溶液定根，温度维持在20-28℃，每周喷施1次促根剂和1/2ms营养液，培养4-5周；
步骤七：移栽驯化；对步骤六中的生姜幼株进行拣选活株，并将成活品质好的植株移栽至泥炭土混合基质中，培养期间每周进行一次施肥，同时每月进行一次病虫防治。
进一步的，所述步骤3中和步骤4中所用培养基为含有6-ba0.5mg/l、kt1.2mg/l和naa0.07mg/l、蔗糖20g/l和6.0g/l琼脂的ms培养基，培养基ph为5.5。
进一步的，所述步骤5中所使用的快速增殖培养基为含有的1.0mg/l吲哚丁酸、0.3mg/l赤霉素、0.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤、23g/l蔗糖、6.0g/l琼脂的改良wpm培养基，改良wpm培养基ph为5.6。
进一步的，所述步骤三中切取的茎尖经过2-3次无菌水浸泡清洗后再接种至基础培养基。
进一步的，所述步骤四中对茎尖的切取环境为无菌环境。
进一步的，所述步骤五中增殖生根的条件为控制相对湿度控制为80％-90％，温度为22-25℃，培养20-30天。
进一步的，所述步骤六中对植入土壤基质中的芽株进行塑料薄膜和遮阳网覆盖处理，培养后2周对塑料薄膜和遮阳网进行去除。
进一步的，所述步骤七中泥炭土混合基质为泥炭土、蛭石和木屑按照体积比2-1:1-2：0.3-0.7，搅拌20％的多菌灵形成的混合物。
进一步的，所述步骤七中施肥用料为生物水溶肥料，包括以下重量份的组分：链霉素代谢物0.3-0.5份、氨基酸10-15份、氮磷钾85-90份。
分别取上述实施例1-5所制得的生姜苗株每组100株，同时设置一组未进行脱毒处理的生姜苗株100株作为对比例进行实验，每组生姜植株分布种植在同一实验田中，3个月后，得到以下数据：
由上表可知，实施例3中生姜植株成活率高，脱毒效果最好，成活率和脱毒率远大于对比例，且生姜产量高，生姜质量好。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。