一种海带白化病的预防治疗方法与流程

本发明属于海藻病害防治技术领域，具体涉及一种海带白化病的预防治疗方法。

背景技术：

海带隶属褐藻门的海带属，为大型褐藻，是多年生大型食用藻类。山东、福建和辽宁是我国的海带主产地，占全国总产量的90％以上。像农作物一样，经济作物海带在育苗期也会发生严重病害。近些年来，白化病是海带育苗后期(育苗开始后一个半月或两个月时)经常发生的一种病害。主要病症是在育苗的后期，随着光照强度的增加，海带幼苗的尖端(远离基部生长点的组织)产生白色斑块，如得不到很好的控制，会从发病部位发生绿烂，绿烂病症扩大到整个幼苗叶片，极大地影响健康海带种苗的供应及后续的养殖生产。

在海带苗期一旦发现有白化的幼苗，主要的治疗方法是降低育苗车间的温度、光照强度以及增加换水次数等来达到抑制致病菌的繁殖和降低致病菌的数量，但效果并不好。目前并没有非常有效的防控海带白化病爆发的措施和方法。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种海带白化病的预防治疗方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明所提供的海带白化病的预防治疗方法，是使用蓝光或白光来抑制海带白化病致病菌；

所述的白光的光照强度小于40μmol·m^-2·s^-1或大于160μmol·m^-2·s^-1；

所述的蓝光，其光照强度不低于40μmol·m^-2·s^-1；

所述的海带白化病致病菌，其一种为假交替单胞菌属菌株，是一种具体菌株，为杀鱼假交替单胞菌x-8株(pseudoalteromonaspiscicidax-8),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.20099，保藏日期为2020年06月17日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明可为海带育苗企业制定正确、合适的光照强度管理提供理论依据，并为筛选抗白化病海带品系提供光照强度参数。

附图说明

图1-1：光对致病菌假交替单胞菌x-8生长的影响图(光照强度：40μmol·m^-2·s^-1)；

图1-2光对致病菌假交替单胞菌x-8生长的影响图(光照强度：80μmol·m^-2·s^-1)；

图1-3光对致病菌假交替单胞菌x-8生长的影响图(光照强度：160μmol·m^-2·s^-1)；

图2：光对致病菌假交替单胞菌x-8运动性的影响图，其中(a)蓝光；(b)红光；(c)白光；(d)黑暗。光强度：80μmol·m^-2·s^-1，温度：10±1°c。

图3：不同光谱条件下假交替单胞菌x-8侵染海带幼苗的图片，其中培养温度为10±1℃，光照强度80μmol·m^-2·s^-1，光周期l：d＝12h：12h。bars：a：0.1mm。

具体实施方式

在目前的海带的育苗过程中，育苗场会严格控制温度在8-10℃，随着海带幼苗逐渐生长，生产管理上会相应地增加光强，以满足海带幼苗正常发育所需。在育苗初期，育苗车间中午平均光强是25-35μe·m^-2·s^-1；一个半月或两个月时，海带幼苗长度达到大约1.0cm，中午平均的光强增加到80-90μe·m^-2·s^-1，也就是在这个时间点发现少量的白化病幼苗，当育苗后期光强逐渐增加，白化病也逐渐加重。因此，我们推测海带苗期白化病的爆发与光强的增加密切相关。为了确定光是否影响海带白化病致病菌生长和运动性，通过设置不同光谱及不同光照强度来研究其对海带致病菌生长及运动性的影响。

下面结合具体实施例和附图对本发明进行详细的描述。

实施例1：光对致病菌假交替单胞菌x-8生长的影响

申请人首先对海带白化病致病菌假交替单胞菌x-8进行实验。

其中致病菌假交替单胞菌x-8是在2017年12月从山东荣成某海带育苗场的白化病海带幼苗中筛选获得，复染实验证明该菌株能够使健康海带幼苗产生白化病。

在zobell2216e培养基中培养，当x-8长到指数期时，使用uv-6000uv-vis分光光度计(metash)在od600(600nm处的光密度)下测量细菌生长的吸光度。在宁波江南仪器厂购买白光、蓝光(400-450nm)和红光(620-760nm)两种单色led光源。将白光、蓝光和红光的光强度分别设置为40μmol·m^-2·s^-1、60μmol·m^-2·s^-1、、160μmol·m^-2·s^-1。培养条件：10±1℃，光周期：14：10(l：d)。将锥形瓶中处于对数生长期的x-8菌液放在不同的光照培养箱中培养，摇床转速为120r/min，每隔12h使用分光光度计测定此时菌液的吸光值，不同光照下各设置三个重复。根据初步结果发现，40μmol·m^-2·s^-1下的蓝光抑制菌液的生长。不同光照条件下的红光促进了假交替单胞菌x-8的生长。发现当白光的光照强度小于40μmol·m^-2·s^-1或大于160μmol·m^-2·s^-1时会抑制x-8的增长。然而，黑暗条件不能抑制假交替单胞菌x-8的生长。

实施例2：群集运动性分析

在黑暗条件下，于25℃下将假交替单胞菌x-8培养至对数生长期。随后，将菌液在室温下以6000g离心10分钟以获得细胞沉淀匀浆。使用接种环将细菌沉淀物接种到细菌固体培养基上。在蓝光，红光，白光和黑暗条件下培养24小时温度为10±1℃。每组实验设计三个重复。光照强度为80μmol·m^-2·s^-1。结果发现，在80μmol·m^-2·s^-1的条件下，白光和蓝光抑制了假交替单胞菌x-8的运动，而红光和黑暗促进了假交替单胞菌x-8的运动。

实施例3：致病菌-海带复染实验

从-20℃冰箱取出保存的菌液，吸取1ml于100mlzobell2216e液体培养基中在振荡培养箱中培养，24h后吸取1ml于100mlzobell2216e液体培养基中继续培养，12h后吸取2ml过夜培养液于200mlzobell2216e液体培养基中继续培养，培养条件为25℃，转速为120r/min。4h后吸取菌液测量菌液的浓度；此时菌液生长处于对数生长期。

选取生长状态良好、健康的海带幼苗，置于盛有无菌海水的培养皿中，然后用灭菌刀片将孢子体切割成小块(1.0cmx1.0cm)。将海带组织块放入培养板中，并在培养板中加入1ml假交替单胞菌x-8菌液(浓度10⁸cfu/ml)，分别置于红光、蓝光、白光及黑暗条件下培养。培养温度为10±1℃，光照强度80μmol·m^-2·s^-1，光周期l：d＝12h：12h。6h后在显微镜下观察海带受侵染情况。结果发现，红光条件下，受侵染的海带幼苗出现病烂现象；白光条件下观察到有轻微病烂；但蓝光和黑暗条件下，海带没有出现病烂现象。

因此，针对海带苗期后期白化病爆发的情况，在育苗生产管理中可采用光照强度40--80μmol·m^-2·s^-1的蓝光(光周期l：d＝12h：12h)来预防白化病的发生。

根据蓝光、白光影响海带幼苗白化病致病菌假交替单胞菌x-8的生长及群集运动性的实验结果，在海带苗期后期的生产管理中可通过给予蓝光及白光照射来预防白化病的爆发。