本发明属于食用菌人工栽培
技术领域：
，具体涉及一种治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物，并进一步公开其制备方法。
背景技术：
：桑黄(phellinusigniarius)属于担子菌亚门(basidiomycotina)、层菌纲(hymenomycetes)、非褶菌目(aphyllophorales)、锈革孔菌科(hymenochaeyaceae)、针层孔菌属(phellinu)，是火木层孔菌(p.igniarius)、鲍氏针层孔菌(p.baumii)和裂蹄针层孔菌(p.linteus)的商品名，通常生于杨、桑、柳、白桦、榉树、桃等阔叶树的枯立木及立木树干上。桑黄是近几年开发的一种多年生的珍贵药用真菌，有“森林黄金”之美称。据《中药大辞典》记载，桑黄可以治血崩、血淋、带下、闭经等妇科疾病；现代医学研究也表明，桑黄具有抗肿瘤、抗菌、抗纤维化、抗氧化及提高人体免疫力等显著效果，是目前国际公认的生物抗肿瘤效果第一的珍稀药用真菌，广泛应用于医药、食品、日用化工、保健品等行业。目前，由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，桑黄在自然界中形成子实体较为困难，造成天然的桑黄数量非常稀少，自然界中可供药用的资源有限，加之国内外市场对桑黄的需求量越来越大，致使国内各产地药农掠夺性采集，子实体无法大量形成，难以成为稳定的工业产品来源，对桑黄产业的发展十分不利，因此，通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。但是，桑黄人工栽培极其困难，存在着培养条件苛刻、生长周期长的问题。目前，人工栽培桑黄的方法主要有两种，其一种是以桑树、杨树、栎树的段木栽培为主，但段木栽培需要大量的木材资源，资源浪费比较严重，难以规模化栽培；另一种则是袋料栽培，但是存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题。如中国专利cn1720785a公开的桑黄人工高产栽培方法，该方案即采用袋料栽培，为了解决培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题，通过在培养基中添加了生长素，但是，生长素的添加没有从根本上解决培养基的问题，而且生长素的添加对桑黄的品质有影响，同时不利于桑黄的天然生长。又如中国专利cn102786333a公开的桑黄袋料栽培培养基及采用该培养基栽培桑黄子实体的方法，该方法充分利用桑枝、桑叶等资源，能够有效减少段木资源的浪费，并可快速、规模化栽培桑黄子实体，近似野生桑黄，且质量稳定；但却依然存在培养时间较长的问题。偏头痛是反复发作的一种搏动性头痛，属众多头痛类型中的“大户”，发作前常伴有闪光、视物模糊、肢体麻木等先兆，同时可伴有神经、精神功能障碍。偏头痛是一种可逐步恶化的疾病，发病频率通常越来越高。偏头痛主要包括典型性偏头痛、普通型偏头痛和丛集性偏头痛三大类，以及包括家族偏瘫性偏头痛、腹痛性偏头痛、神经精神性偏头痛、基底动脉性偏头痛、视网膜性偏头痛和月经期偏头痛等。目前，常用的治疗和/或预防偏头痛的药物主要有阿斯匹林、布洛芬、麦角胺制剂、舒马曲坦、普萘洛尔、苯噻啶、美西麦角、尼莫地平、氟桂利嗪、丙戊酸钠、阿米替林、可乐定等化学品，然而人们仍然期待有新的治疗和/或预防偏头痛的方法，特别是使用天然产物来治疗和/或预防偏头痛的方法。技术实现要素：为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物；本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法。为解决上述技术问题，本发明所述的一种治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，包括人工栽培桑黄子实体的步骤，以及，对所述桑黄子实体进行提取的步骤，具体包括如下步骤：(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20-30重量份、酿酒废渣30-50重量份、糖蜜10-30重量份、活性污泥颗粒3-8重量份、生石灰1-5重量份、kh2po40.2-0.5重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入桑黄母种，并将接种后的栽培袋料进行恒温培养，至所述栽培袋料长满菌丝体；(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续进行恒温培养，至子实体成熟并采收；(4)将所述桑黄子实体进行粉碎得到粉体，加入乙醇水溶液进行浸渍回流提取，分别收集乙醇提取液和残渣；(5)向上述残渣中加水进行煎煮提取，收集煎煮液；(6)合并所述乙醇提取液和煎煮液，减压浓缩至无醇味，真空干燥即得所需人工栽培桑黄子实体提取物。具体的，所述步骤(1)中，所述活性污泥颗粒为好氧活性污泥颗粒。具体的，所述步骤(1)中，所述栽培基质与水的质量比为40-50％：50-60％。具体的，所述步骤(2)中，所述桑黄母种的接种量为所述栽培基质量的5-10wt％。具体的，所述步骤(2)中，所述菌丝体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为25-30℃，空气湿度50-80％，光照强度10-20lux。具体的，所述步骤(3)中，所述子实体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为25-30℃，空气湿度70-80％，光照强度30-100lux。具体的，所述步骤(4)中：所述乙醇水溶液的体积百分含量为60-80v/v％；所述桑黄子实体粉体与所述乙醇水溶液的用量比为10g：200-300ml。具体的，所述步骤(5)中，所述桑黄子实体粉体与所述水的用量比为10g：200-300ml。本发明还公开了由所述方法制备得到的治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物。本发明还公开了所述桑黄子实体提取物用于制备治疗偏头痛药物的用途。具体的，所述桑黄子实体提取物可以按照常规手段添加常规辅料制成临床上可接受的内服制剂。本发明所述治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物，以桑黄子实体为原料，进行乙醇及水提取所得，所得提取物可有效促进脑血液循环、抑制5-ht、致病性肽类及p物质等活性，具有活血化淤、通络、缓解血管痉挛的作用，具有较好的镇痛效果，可有效缓解并治疗偏头痛症状，并且具有安全、无毒副作用等优点。本发明所述提取物选取的桑黄子实体原料，采用人工袋料进行高效栽培，基于传统人工袋料式培养方试进行桑黄子实体的栽培，精选桑枝木屑、酿酒废渣和糖蜜为主要栽培原料，在满足桑黄栽培营养成分的情况下实现了对酿酒废渣和糖蜜等工业废弃料的再利用；而进一步添加的活性污泥颗粒，则依赖其含有的微生物及有机质等成分，大幅促进了栽培原料营养成分的吸收和桑黄菌丝体及子实体的成型，不仅大幅缩短了桑黄的栽培周期，且有效提升了桑黄子实体的栽培效率，为桑黄的下游应用提供了产量和质量保证。具体实施方式本发明下述实施例中，所述桑黄母种是采用常规方法分离纯化得到桑黄菌株，以常规pda平板培养基进行活化后，接种到常规pd母种培养基中培养，进而获得桑黄母种。本发明下述实施例中，所述好氧活性污泥颗粒为现有技术中市售的常规性产品即可。本发明下述实施例中，所述酿酒废渣为一般性白酒酿酒工艺产生的废渣，如一般性高粱酒的酿造工艺获得的废渣，例如，包括如下步骤：(1)取高粱90kg粉碎至高粱4-8瓣/粒，混合均匀后、并添加55kg的水(75℃)进行润糁18h，再进行装甑蒸料80min，得到粮糟；(2)将步骤s1中所述粮糟出甑，并加入28kg的冷水进行扬冷处理，扬冷后加入10kg的大曲和0.03kg的生香活性干酵母，得到大渣，并于12℃入池进行大渣发酵28天；(3)取上述发酵后的所述大渣，加入15kg的稻壳混合均匀后，装甑进行蒸馏50min，得到大渣酒和粮糟，备用；(4)将步骤s3得到的所述粮糟出甑，加30kg的水，扬冷后加入8kg的大曲和0.02kg的生香活性干酵母，得到二渣，于15℃入缸进行二渣发酵28天；(5)取发酵后的所述二渣，加入占所述二渣重量10wt％的稻壳混合均匀后装甑，进行蒸馏50min，得到二渣酒；(6)将得到的所述大渣酒和所述二渣酒按45:55的质量比进行勾兑，混合勾兑后降到54度，即得所述酒。取上述各个步骤中固液分离产生的废渣混合，即为通常酿酒工艺的酿酒废渣，将所述酿酒废渣经固液分离及干燥处理至含水率低于10％。实施例1本发明所述治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20重量份、酿酒废渣50重量份、糖蜜10重量份、好氧活性污泥颗粒8重量份、生石灰1重量份、kh2po40.5重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500ml浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并分别收集滤液和残渣；(5)取上述乙醇提取残渣加入500ml水进行煎煮提取2h；(6)合并上述乙醇提取滤液和煎煮液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。实施例2本发明所述治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑30重量份、酿酒废渣30重量份、糖蜜30重量份、好氧活性污泥颗粒3重量份、生石灰5重量份、kh2po40.2重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500ml浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并分别收集滤液和残渣；(5)取上述乙醇提取残渣加入500ml水进行煎煮提取2h；(6)合并上述乙醇提取滤液和煎煮液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。实施例3本发明所述治疗偏头痛的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑25重量份、酿酒废渣40重量份、糖蜜20重量份、活性污泥颗粒5重量份、生石灰3重量份、kh2po40.3重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500ml浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并分别收集滤液和残渣；(5)取上述乙醇提取残渣加入500ml水进行煎煮提取2h；(6)合并上述乙醇提取滤液和煎煮液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。对比例1本对比例所述人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法同实施例3，其区别仅在于，所述栽培基质中不添加所述好氧活性污泥颗粒。实验例1、桑黄子实体性状分别记录上述实施例1-3及对比例1中培养的桑黄菌丝体和子实体的时间，并对采收的桑黄子实体的重量、质量进行检测，记录结果见下表1。表1桑黄子实体培养情况从上表结果可见，本发明基于人工袋料栽培桑黄子实体的方法，可有效缩短桑黄子实体的栽培时间，提高桑黄子实体的栽培质量。2、药物对硝酸甘油致大鼠偏头痛模型的影响硝酸甘油是一种脂溶性化合物，易透过血脑屏障，是一氧化氮(no)的供体。偏头痛患者输注硝酸甘油一段时间后可出现偏头痛样头痛，而使用no合酶抑制物能够终止偏头痛的急性发作，这说明了no在偏头痛的发病机制中起着重要的作用，此造模方法简单、经济，实验条件容易控制，能在短时间内复制大量的动物模型供研究使用，且能够在清醒状态下观察到动物的挠头、甩头等行为学反应，是目前国内偏头痛研究中运用最多的模型，故在本次研究中主要采用这种模型进行研究。取sd大鼠40只(体重200±20g)，雌雄各半，按体重分层随机分为4组，每组10只，分别为模型组、阳性组、实验组(实施例3提取物)、对照组(对比例1提取物)；其中，模型组：与实验组等体积的滴鼻生理盐水；阳性药组：盐酸氟桂利嗪胶囊，市售品，5mg/粒，给药剂量为2mg/kg(临床等效量的两倍)，灌胃给药；实验组：给药制剂为实施例3中制得提取物，配制混悬液进行滴鼻给药，给药剂量按照提取物量计为0.5mg/kg体重；对照组：给药制剂为对比例1中制得提取物，配制混悬液进行滴鼻给药，给药剂量按照提取物量计为0.5mg/kg体重。上述各组动物皮下注射硝酸甘油注射剂10mg/kg，0.2ml/100g，造模后2分钟，实验组经滴鼻给药1次，给药后连续观察180分钟大鼠的偏头痛反应。从造模开始，以每30min为一个时段，采用持续时间分段方法，分别记录大鼠每一时段挠头和爬笼的次数，计算全部大鼠总的爬笼次数和总的挠头次数，测试结果见表2所示；同时记录大鼠第一次出现挠头的时间和耳红发生率，测试结果见表3所示。表2总爬笼次数和总挠头累计次数表3、第一次挠头时间和耳红率由上表2-3中数据可知，本发明所述桑黄子实体提取物具有治疗偏头痛的作用和效果。3、荧光法测定脑组织和血清中5-ht、na及da的含量在上述实验例2中的动物整体体征的行为学观察结束后，将各组大鼠断头取出脑组织，在冰台上进行，剔除小脑，去除脑膜和血管，用冰冷的生理盐水冲洗，除去血迹，滤纸拭干，切取下丘脑部分，加入冰冷的生理盐水，制备脑组织匀浆。测定各组动物的脑组织中5-ht、da、ne的含量，并以未进行上述模型处理的空白组大鼠为空白组，直接取脑组织测定5-ht、da、ne的含量。测试结果见表4所示。表4脑组织5-ht、na及da的含量(ng/g)组别5-htnada模型组6554951735阳性组13456092252实验组13195982261对照组13085952240正常组13826152430由表4中结果可知，本发明所述桑黄子实体提取物具有治疗偏头痛的作用和效果。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12