TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用与流程

文档序号:23708961发布日期:2021-01-23 15:33阅读:来源:国知局

技术特征:
1.tfr1肺组织特异性敲除小鼠模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、将tfr1-/-转基因小鼠和sftpc-creert2转基因小鼠进行杂交,得到f1代,经鉴定,基因型分别为tfr1
+/-;sftpc-creert2和tfr1
+/-;步骤二、将f1代tfr1
+/-;sftpc-creert2转基因小鼠和f1代tfr1
+/-转基因小鼠进行杂交,得到f2代,经鉴定,基因型分别为tfr1
+/-;sftpc-creert2、tfr1
+/+
;sftpc-creert2和tfr1
+/+
;步骤三、将f2代tfr1
+/-;sftpc-creert2转基因小鼠进行杂交,经鉴定,得到f3代tfr1-/-;sftpc-creert2纯合子基因敲除小鼠,即tfr1肺组织特异性敲除小鼠模型。2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,步骤一中,f1代小鼠基因型鉴定过程如下:(1)pcrtfr1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下:tfr1-/-f:ttcagttcccagtgaccaca;tfr1-/-r:tcctttctgtgcccagttct;sftpc-creert2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下:sftpc-creert2(1):acaccggccttattccaag;sftpc-creert2(2):tgcttcacagggtcggtag;sftpc-creert2(3):cattacctggggtaggacca;扩增反应体系20μl,其中,ddh
2
o 7μl、2
×
taq plus mastermix 10μl、dna模板1μl、引物各1μl;反应条件:94℃3min,94℃30s,60℃30s,72℃1min,重复3个步骤35个循环,72℃5min,12℃保持;(2)琼脂糖凝胶电泳pcr扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳;tfr1-/-基因敲除结果判定指标:出现约165bp条带的为野生型小鼠,出现约310bp条带的为转基因小鼠;sftpc-creert2基因敲除结果判定指标:出现约327bp条带的为野生型小鼠,出现约210bp条带的为转基因小鼠;(3)tfr1基因型鉴定结果为:f1代小鼠全部显示165bp和310bp双条带,f1代全部为杂合子小鼠,基因型为tfr1
+/-;sftpc-creert2基因型鉴定结果为:一部分f1代小鼠显示210bp和327bp双条带,为杂合子小鼠,基因型为tfr1
+/-;sftpc-creert2;另一部分f1代小鼠只显示327bp条带,为野生型小鼠,基因型为tfr1
+/-。3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,步骤一中,f2代小鼠基因型鉴定过程如下:(1)pcrtfr1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下:tfr1-/-f:ttcagttcccagtgaccaca;tfr1-/-r:tcctttctgtgcccagttct;
sftpc-creert2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下:sftpc-creert2(1):acaccggccttattccaag;sftpc-creert2(2):tgcttcacagggtcggtag;sftpc-creert2(3):cattacctggggtaggacca;扩增反应体系20μl,其中,ddh
2
o 7μl、2
×
taq plus mastermix 10μl、dna模板1μl、引物各1μl;反应条件:94℃3min,94℃30s,60℃30s,72℃1min,重复3个步骤35个循环,72℃5min,12℃保持;(2)琼脂糖凝胶电泳pcr扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳;tfr1-/-基因敲除结果判定指标:出现约165bp条带的为野生型小鼠,出现约310bp条带的为转基因小鼠;sftpc-creert2基因敲除结果判定指标:出现约327bp条带的为野生型小鼠,出现约210bp条带的为转基因小鼠;(3)鉴定结果为:f2代小鼠包括sftpc-creert2基因小鼠,基因型为tfr1
+/-;sftpc-creert2和tfr1
+/+
;sftpc-creert2;f2代小鼠还包括野生型小鼠,基因型为tfr1
+/+
。4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,步骤一中,f3代小鼠基因型鉴定过程如下:(1)pcrtfr1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下:tfr1-/-f:ttcagttcccagtgaccaca;tfr1-/-r:tcctttctgtgcccagttct;sftpc-creert2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下:sftpc-creert2(1):acaccggccttattccaag;sftpc-creert2(2):tgcttcacagggtcggtag;sftpc-creert2(3):cattacctggggtaggacca;扩增反应体系20μl,其中,ddh
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o 7μl、2
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taq plus mastermix 10μl、dna模板1μl、引物各1μl;反应条件:94℃3min,94℃30s,60℃30s,72℃1min,重复3个步骤35个循环,72℃5min,12℃保持;(2)琼脂糖凝胶电泳pcr扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳;tfr1-/-基因敲除结果判定指标:出现约165bp条带的为野生型小鼠,出现约310bp条带的为转基因小鼠;sftpc-creert2基因敲除结果判定指标:出现约327bp条带的为野生型小鼠,出现约210bp条带的为转基因小鼠;(3)鉴定结果为:f3代小鼠包括tfr1-/-纯合子小鼠,基因型为tfr1-/-;sftpc-creert2;f3代小鼠包括tfr1
+/-杂合子小鼠,基因型为tfr1
+/-;sftpc-creert2;f3代小鼠包括杂合子小鼠,基因型为tfr1
+/-;f3代小鼠还包括tfr1
+/+
;sftpc-creert2基因型小鼠、tfr1
+/+
基因型
小鼠和tfr1-/-基因型小鼠。5.如权利要求1所述的构建方法获得的tfr1肺组织特异性敲除小鼠模型。6.如权利要求2所述的tfr1肺组织特异性敲除小鼠模型在筛选制备检测和/或治疗抗肺癌药物中的应用。
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