一种檀香组培苗叶片不定芽直接诱导的方法与流程

[0001]
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种檀香组培苗叶片不定芽直接诱导的方法。


背景技术：

[0002]
檀香(santalum album l.)为檀香科檀香属珍稀小乔木，具有很高的药用价值和经济价值。檀香因其用途广，经济价值高，在国际市场上供不应求，因此，大力推广檀香种植对于解决国内檀香资源紧缺问题具有重大意义。推广种植檀香需解决种苗的问题，但现有的播种生产种苗的方法除了受资源限制，还存在生产周期长、种子出芽不整齐等问题，远远不能满足生产的需求，因此开展组培快繁很有必要。
[0003]
贺红(2002年5月，基层中药杂志)卢瑜等(2012年9月，热带林业)先后以檀香实生苗的下胚轴和茎段为材料，分别通过愈伤组织不定芽诱导及茎段丛生芽诱导对檀香组培快繁进行了探讨。上述研究所使用的材料均取自实生苗，研究结果对于檀香成年树的无性系快繁借鉴意义有限；其次，通过愈伤组织不定芽诱导容易产生变异，且培养周期长；通过茎段丛生芽诱导其增殖率有限。


技术实现要素：

[0004]
针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种檀香组培苗叶片不定芽直接诱导的方法。
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为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
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一种檀香组培苗叶片不定芽直接诱导的方法，包括以下步骤：
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1)于秋季采摘檀香生长健壮、芽体饱满、无病虫害的半木质化枝条；
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2)将采摘的枝条剪成茎段，并进行消毒处理；
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3)将步骤2)经过消毒处理的茎段接种在诱发培养基上进行腋芽诱发培养一个月；
[0010]
4)将腋芽萌发后的嫩茎剪离母体后，接种至增殖培养基中培养1个月进行试管苗增殖培养；
[0011]
5)将增殖的试管苗从母株分离，接种到继代培养基中进行试管苗继代培养；
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6)剪取完成继代培养的试管苗叶片，沿着主脉剪成叶块，然后将叶块平铺在不定芽诱导培养基上进行培养。
[0013]
进一步的，在步骤2)将采摘的枝条剪成茎段，并进行消毒处理时，按照如下步骤进行：将采摘的枝条剪成3-4cm的枝段，先用自来水冲洗2小时，将水沥干，然后将枝段进一步剪成2cm的带一个芽的茎段；将剪好的茎段用70％乙醇进行浸泡20s，之后用无菌水冲洗茎段3次；接着将茎段用0.1％升汞进行震荡处理15分钟，之后再用无菌水冲洗茎段4次；最后将茎段的水分用无菌纸吸干。
[0014]
进一步的，步骤3)中，诱发培养基为ms+0.05mg/l naa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8。
[0015]
进一步的，步骤4)中，将腋芽萌发后长至2cm的嫩茎剪离母体后，接种至增殖培养基中培养1个月进行试管苗增殖培养；增殖培养基为ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8。
[0016]
进一步的，步骤5)中，继代培养基为ms+0.5mg/l 6-ba+0.1mg/l naa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8；继代培养的时间为45天。
[0017]
进一步的，步骤3)、4)、5)的培养条件均为：温度25℃，光照强度2000lux。
[0018]
进一步的，步骤6)中，剪取完成继代培养的试管苗顶端2-3片叶，沿着主脉剪成3mm宽的叶块，然后将叶块平铺在不定芽诱导培养基上进行培养。
[0019]
进一步的，步骤6)中，叶块在不定芽诱导培养基上为叶面向上的平铺方式。
[0020]
进一步的，步骤6)中，不定芽诱导培养基为ms+5mg/l 6-ba+0.5mg/l naa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8。
[0021]
进一步的，步骤6)的培养条件为：温度25℃，先暗培养1周，然后进行光照培养，光照强度为2000lux。
[0022]
有益效果：相比于现有技术，本发明的优点为：
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本发明提供了一种基于檀香组培苗叶片不定芽诱导的方法，与现有技术相比，本发明提供的不定芽诱导方法具有取材方便、周期短、变异率低、增殖率高等特点，更加适合檀香成年树的高效稳定快速繁殖。
附图说明
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图1为本发明经过暗培养后的组培苗叶块图；
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图2为本发明从叶块上再生不定芽的状态图；
[0026]
图3为本发明从叶块上直接再生不定芽的情况图。
具体实施方式
[0027]
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
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实施例1
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一种檀香组培苗叶片不定芽直接诱导的方法，包括以下步骤：
[0030]
(1)于秋季(9-10月)从檀香成年树上采摘生长健壮、芽体饱满、无病虫害的半木质化枝条；
[0031]
(2)将采摘的枝条剪成3-4cm的枝段，先用自来水冲洗2小时，将水沥干，然后将枝段进一步剪成2cm左右的带一个芽的茎段；
[0032]
(3)先用70％乙醇将剪好的茎段进行浸泡，浸泡时间为20s；之后用无菌水冲洗茎段3次；接着用0.1％升汞将茎段进行震荡处理，处理时间为15分钟；之后再用无菌水冲洗茎段4次，最后将茎段的水分用无菌纸吸干；
[0033]
(4)将经过消毒处理的茎段接种在诱发培养基中培养1个月诱导腋芽萌发；诱发培养基配方为ms+0.05mg/l naa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8；培养条件为室内温度为25℃，光照强度为2000lux；
[0034]
(5)将腋芽萌发后长至2cm左右的嫩茎剪离母体后，接种至增殖培养基中进行增殖
培养1个月；增殖培养基配方为ms+1.0mg/l 6-ba+0.2mg/l naa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8；培养条件为室内温度为25℃，光照强度为2000lux；
[0035]
(6)将获得的增殖苗从母株分离，然后单株接种到继代培养基中培养45天；继代培养基配方为ms+0.5mg/l 6-ba+0.1mg/l naa，添加琼脂粉7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8；培养条件为室内温度为25℃，光照强度为2000lux；
[0036]
(7)将完成继代培养的试管苗顶端最上方2-3片叶取下，沿着主脉剪成3mm宽的叶块，然后将叶块的叶面向上平铺在不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导；不定芽诱导培养基配方为ms+5mg/l 6-ba+0.5mg/l naa，添加琼脂粉为7g/l，蔗糖30g/l，ph为5.8；培养条件为室内温度为25℃，先暗培养1周，然后进行光照培养，光照强度为2000lux。
[0037]
对比例檀香叶片愈伤组织不定芽诱导方法
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剪取完成继代培养的试管苗叶片，沿着主脉剪成3mm宽的叶块，然后将叶块平铺在愈伤组织诱导培养基上，先进行暗培养，等叶块边缘有少量愈伤组织出现时(大该需2周)，然后取出进行光照培养，待叶块长出大量愈伤组织时，将愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上进行芽诱导培养。叶片愈伤组织不定芽诱导与叶片不定芽直接诱导对比结果如表1所示。
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表1叶片愈伤组织不定芽诱导及叶片不定芽直接诱导对比结果
[0040][0041]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不局限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。