一种利用三七叶片直接诱导出苗的方法

1.本发明涉及一种利用三七叶片直接诱导出苗的方法，属于三七培育技术领域。


背景技术：

2.三七别名田七粉，金不换。性温，味甘微苦，入肝、胃、大肠经。又称北人参，南三七。人参补气第一，三七补血第一。其主要有效成分是皂苷，目前还没有人工合成方法；三七属喜阴植物三七对生长条件要求非常高，喜冬暖夏凉的环境，畏严寒酷热。喜潮湿但怕积水，土壤含水量以22％～40％为宜。夏季气温不超过35℃，冬季气温不低于零下5℃，温度18～25℃等种植环境条件下均能生长。三七对土壤要求不严，适应范围广，但以土壤疏松、排水良好的砂壤土为好。凡过黏、过砂以及低洼易积水的地段不宜种植。忌连作，土壤酸碱度4.5～8。
3.三七主要采用选用3
‑
4年生植株所结种子繁殖，然后再育苗移栽，幼苗生长1年，于12月至翌年1月移栽。全世界只有少数几个地方可以种植三七，而且三七生长周期长，病虫害严重，因此市场上三七资源供应不足，价格比较贵。通过组织培养技术可以可以很好的解决三七资源的紧缺。在三七的组织培养领域，各项技术都不是很成熟，需要得到快速生长的组培苗，还需要进一步研究。
4.组织培养是利用植物细胞具有全能性的特点，将外植体(如茎、叶等)经愈伤组织诱导、脱分化和再分化等阶段，培养出幼苗的技术；目前三七组织培养存在愈伤组织难以诱导出幼苗等技术难点。本方法创新的采用茎段直接诱导出苗，避开了愈伤组织阶段，显著提高了三七外植体组织培养的出苗率与成功率。


技术实现要素：

5.目前传统的组培技术是由外植体诱导愈伤组织，再经愈伤组织脱分化和再分化得到幼苗；这种方法周期长，且由于三七自身特点，导致愈伤组织不易出苗。
6.本发明的目的在于提供一种利用三七叶片直接诱导出苗的方法，该方法将三七叶柄从茎段撕下直接诱导三七小苗，可以跳过愈伤组织直接出苗，大大缩短了诱导出苗的时间；并且避开了三七愈伤组织不易出苗这一技术难点，实现了在短期内大量诱导三七组培苗，具体包括以下步骤：
7.(1)将多余叶片切去，只留下叶柄1～2cm；将其从茎段撕下，并且迅速放置于培养基上，避免脱水。
8.(2)轻压组织，使伤口与培养基接触；注意观察，待伤口处膨大后转移至二次培养基继续培养，诱导出苗。
9.所用培养基为ms培养基，添加的植物激素为以下2种：
10.①
初次培养基：水杨酸0.1
‑
1mg/l+naa0.01
‑
2mg/l。
11.②
伤口膨大后二次培养基：naa0.01
‑
2mg/l。
12.优选的本发明步骤(1)所述叶片为三七组培苗叶片、一年生三七叶片或者二年生
三七叶片，组培苗叶片无需消毒，一年生三七叶片或者二年生三七叶片进行消毒消毒，消毒过程为：无菌水清洗3次、75％乙醇浸泡90s、无菌水清洗3次、20％次氯酸钠浸泡20min、无菌水清洗5次。
13.优选的，本发明ms培养基成分为：ms粉1.1g/l、蔗糖30g/l、琼脂3.2g/l。
14.本发明的有益效果：
15.(1)本发明所述方法选择三七叶片作为培养组织，材料易得，可以实现大量诱导三七组培苗。
16.(2)三七叶片直接诱导出苗可以跳过愈伤组织，极大的缩短了组培苗诱导时间。
17.(3)三七叶片直接诱导出苗可以避开三七愈伤组织难以诱导出苗的技术难点，从而实现快速诱导组培苗。
附图说明
18.图1为实施例1得到的三七苗。
具体实施方式
19.下面结合具体实施例本发明作进一步的详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。
20.本发明实施例所需材料：超净台、培养基、200ul移液枪及枪头、无菌培养皿、无菌水等灭菌。
21.实施例1
22.一种利用三七叶片直接诱导出苗的方法，具体包括以下步骤：
23.(1)将大田三七苗外植体消毒：无菌水清洗3次、75％乙醇浸泡90s、无菌水清洗3次、20％次氯酸钠浸泡20min、无菌水清洗5次(组培苗无需此步骤)。
24.(2)将多余叶片切去，只留下叶柄约1cm；用镊子将其从茎段撕下，并且迅速放置于培养基上，避免脱水。
25.(3)轻压组织，使伤口与培养基接触；注意观察，待伤口处膨大后转移至二次培养基继续培养，诱导出苗；组培室温度保持在24
‑
25℃，12h光照，12h黑暗培养。
26.本实施例所述培养基配方为：培养基为ms培养基：ms粉(sigma公司)1.1g/l、蔗糖30g/l、琼脂3.2g/l，添加的植物激素为以下2种：
27.①
初次培养基:sa0.2mg/l+naa 1mg/l(ms培养基)
28.②
伤口膨大后二次培养基:naa 1mg/l(ms培养基)
29.培养2到3周撕叶片的伤口处开始出现膨大及愈伤组织，此时更换为诱导出苗的培养基；继续培养1个月左右愈伤组织出生长出芽点，成功出苗(图1)，图1中a，b，c表示诱导出苗的生长过程，从小到大。
30.实施例2
31.一种利用三七叶片直接诱导出苗的方法，具体包括以下步骤：
32.(4)将大田三七苗外植体消毒：无菌水清洗3次、75％乙醇浸泡90s、无菌水清洗3次、20％次氯酸钠浸泡20min、无菌水清洗5次(组培苗无需此步骤)。
33.(5)将多余叶片切去，只留下叶柄约1cm。用镊子将其从茎段撕下，并且迅速放置于
培养基上，避免脱水。
34.(6)轻压组织，使伤口与培养基接触；注意观察，待伤口处膨大后转移至二次培养基继续培养，诱导出苗；组培室温度保持在24
‑
25℃，12h光照，12h黑暗培养。
35.本实施例所述培养基配方为：培养基为ms培养基：ms粉(sigma公司)1.1g/l、蔗糖30g/l、琼脂3.2g/l，添加的植物激素为以下2种：
36.①
初次培养基:sa0.5 mg/l+naa 1.5mg/l(ms培养基)
37.②
伤口膨大后二次培养基:naa 1.5mg/l(ms培养基)。
38.培养2到3周撕叶片的伤口处开始出现膨大及愈伤组织，此时更换为诱导出苗的培养基；继续培养1个月左右愈伤组织出生长出芽点，成功出苗。
39.实施例3
40.一种利用三七叶片直接诱导出苗的方法，具体包括以下步骤：
41.(7)将大田三七苗外植体消毒：无菌水清洗3次、75％乙醇浸泡90s、无菌水清洗3次、20％次氯酸钠浸泡20min、无菌水清洗5次(组培苗无需此步骤)。
42.(8)将多余叶片切去，只留下叶柄约1cm。用镊子将其从茎段撕下，并且迅速放置于培养基上，避免脱水。
43.(9)轻压组织，使伤口与培养基接触；注意观察，待伤口处膨大后转移至二次培养基继续培养，诱导出苗；组培室温度保持在24
‑
25℃，12h光照，12h黑暗培养。
44.本实施例所述培养基配方为：培养基为ms培养基：ms粉(sigma公司)1.1g/l、蔗糖30g/l、琼脂3.2g/l，添加的植物激素为以下2种：
45.①
初次培养基:sa0.8 mg/l+naa 1.8mg/l(ms培养基)
46.②
伤口膨大后二次培养基:naa 1.8mg/l(ms培养基)。
47.培养2到3周撕叶片的伤口处开始出现膨大及愈伤组织，此时更换为诱导出苗的培养基；继续培养1个月左右愈伤组织出生长出芽点，成功出苗。
48.本发明实施例利用三七叶片作为诱导出苗材料，并且与诱导培养基相结合，可以快速诱导三七出苗。本方法诱导的三七组培苗长势健壮，有利于后期炼苗移栽。本发明方法操作简单，材料易得，可以通过本技术手段得到大量的三七组培苗。目前三七种植业急需大量的种苗，而三七种子产量低，不易保存等特点，导致种苗供应不能完全满足市场需求。利用三七叶片直接诱导出苗的组培技术可以部分解决目前种苗量少不易得的现状，促进三七产业发展。