一种简便的相思开放式瓶内扦插生根方法与流程

本发明是申请号为201610831258.5，申请日为2016.09.19，发明名称为“一种简便的相思开放式瓶内扦插生根方法”，申请人为中国林业科学研究院热带林业研究所的中国专利申请的分案申请。

本发明属于植物栽培技术领域，特别涉及一种简便的相思开放式瓶内扦插生根方法。

背景技术：

无性繁殖能最大限度保持其优良母株的优良性状，利于优树优良性状的固定。扦插是木本植物重要的无性快繁方式之一。已开展了许多林木树种的扦插技术研究(孙红梅，2011；胡勐鸿等，2014；王书胜等，2015)，扦插生根机理研究则是一大热点，不定根的形成受到许多内在因子和环境因子影响的，包括光强、光质和温度，植物激素和碳水化合物等(leakey，2004)。学者以炭化稻壳和泥炭按体积比1：1混合为扦插基质，研究欧洲云杉扦插生根过程中内源激素和酚类物质的变化(欧阳芳群等，2015)；以泥炭土和珍珠岩(1：3)为扦插基质，研究糙叶杜鹃生根过程中内源激素及营养物质的变化(赵云龙等，2013)。扦插生根机理的研究却一直没有得到很好的进展，主要原因是学者们的研究，主要是在各种不同的扦插基质上进行，如黄心土、砂石、蛭石、泥炭土等等成分复杂的物质，这些基质成分的未知性，导致了生根机理研究结果的不准确。因此，建立一种全新的扦插技术体系，对今后深入、准确地开展扦插生根机理研究具有十分重要的意义。

本课题组长期从事相思育种理论和技术方面的研究(黄烈健等，2013；胡峰等，2015；施琼等，2015；黄烈健等，2015)，建立了完善的相思扦插技术体系(易敏等，2010；易敏等，2011；易敏等，2014)，但仍以成分未知的基质进行扦插，扦插技术并未得到实质性的改变，导致对相思扦插生根机制的研究受限。

技术实现要素：

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种简便的相思开放式瓶内扦插生根方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种简便的相思开放式瓶内扦插生根方法，包括如下步骤：

当年生腋芽饱满枝条为外植体，消毒，浸泡，再开放式接种至扦插基质中，培养。

所述的相思为马大杂种相思(a.mangium×a.auriculiformis)、马占相思(acaciamangium)或大叶相思(a.auriculiformis)。

将当年生腋芽饱满枝条，洗衣粉水浸泡，刷净后流水冲洗，剪成长2.0～3.0cm带腋芽的茎段。优选取中部带叶茎段(即第3～5腋芽带叶茎段)。

所述的洗衣粉水浸泡的时间优选为10～60min；所述的流水冲洗的时间优选为1～3h。

进一步的，所述的洗衣粉水浸泡的时间为30min；所述的流水冲洗的时间为2h。

所述的消毒是以多菌灵进行消毒；

所述的多菌灵的浓度为0.2～1.0g·l^-1；消毒的时间为1～15min。

进一步的，所述的多菌灵的浓度为0.8g·l^-1；消毒的时间为3min。

所述的浸泡是用生根剂iba浸泡；

所述的生根剂iba的浓度优选为0.1g·l^-1～1.5g·l^-1。

所述的浸泡的时间优选为1～3h。

进一步的，所述的生根剂iba的浓度为0.2g·l^-1～1.4g·l^-1。所述的浸泡的时间为2～3h。

进一步的，马大杂种相思的浸泡是用生根剂iba0.4～1.0g·l^-1浸泡2～3h；更进一步的，用生根剂iba1.0g·l^-1浸泡2h；

进一步的，马占相思的浸泡是用生根剂iba0.2～1.4g·l^-1浸泡2h；更进一步的，用生根剂iba0.6g·l^-1浸泡2h；

进一步的，大叶相思的浸泡是用生根剂iba0.4～1.0g·l^-1浸泡2～3h；更进一步的，用生根剂iba0.8g·l^-1浸泡3h；

所述的扦插基质为百菌清0.1～1.0g·l^-1+琼脂5～8g·l^-1。

进一步的，所述的扦插基质为百菌清0.2～0.8g·l^-1+琼脂5～8g·l^-1；更进一步的，所述的扦插基质为百菌清0.2g·l^-1+琼脂7g·l^-1；

所述的培养的条件为培养温度为25℃±2℃，每日光照12h，光照强度2500lx。

本发明的机理是：本研究以马大杂种相思，马占相思、大叶相思采穗圃当年生枝条为外植体，将其扦插至装入玻璃瓶的极简化的基质中，在室内进行生根，对外植体种类及消毒方式进行研究，同时对基质中加入的抑菌剂种类和浓度进行筛选，并对促进生根的生长调节剂的种类和浓度进行筛选，获得了成分可控的扦插基质，并能在室内进行开放式扦插培养。建立的开放式扦插方法，由于基质的成分简单、可控制，为今后深入研究相思扦插生根机理创制了一个良好的技术平台，同时该扦插生根技术方法，也将为其他林木树种开展扦插生根机理研究提供很好的借鉴。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：

(1)本发明对马大杂种相思、马占相思、大叶相思进行瓶内扦插生根研究，以建立三种相思可带菌进行培养，扦插基质简单，不需特殊培养条件的瓶内生根体系。

(2)本发明中三种相思均以百菌清为适宜的抑菌剂；以中部带叶为最佳外植体，并以多菌灵0.8g·l^-1浸泡3min对外植体进行预处理，并iba1.0g·l^-1处理2h(马大杂种相思)、iba0.6g·l^-1处理2h(马占相思)、iba0.8g·l^-1处理3h(大叶相思)，在开放的实验台上接种至扦插基质中，生根率均高于90％，分别为：100％，94.33％，100％。

(3)本发明在扦插基中加入抑菌剂，不使用高温高压灭菌、超净工作台，利用植物的光自养能力在无营养元素的基质上进行扦插，获得了较高的生根率，建立了三种相思开放式瓶内生根技术体系。

附图说明

图1是实施例1中的抑菌剂百菌清0.2g·l^-1的情况；

图2是实施例1中的中部带叶茎段外植体，多菌灵消毒3min的情况；

图3是实施例1中的生根剂iba1.0g·l^-1处理2h对生根的影响；

图4是实施例2中的抑菌剂百菌清0.2g·l^-1的情况；

图5是实施例2中的中部带叶茎段外植体，多菌灵消毒3min的情况；

图6是实施例2中的生根剂iba0.6g·l^-1处理2h对生根的影响；

图7是实施例3中的抑菌剂百菌清0.2g·l^-1的情况；

图8是实施例3中的中部带叶茎段外植体，多菌灵消毒3min的情况；

图9是实施例3中的生根剂iba0.8g·l^-1，处理3h对生根的影响；

图10是生长调节剂浓度及处理时间对马大杂种相思扦插生根率的影响；

图11是生长调节剂浓度及处理时间对马占种相思扦插生根率的影响；

图12是生长调节剂浓度及处理时间对大叶相思扦插生根率的影响。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

1材料方法

1.1材料

从中国林业科学研究院热带林业研究所马大杂种相思16年生试验林中选取优良单株，在优良单株上采集枝条，先通过扦插繁殖，建立采穗圃，从一年生的采穗圃中采集腋芽饱满的枝条为研究材料。

1.2方法

1.2.1抑菌剂种类及浓度对马大杂种相思扦插的影响

于8月剪取马大杂种相思采穗圃的当年生腋芽饱满枝条，将采集的枝条剪去叶片，洗衣粉水浸泡30min，刷净后流水冲洗2h，剪成长2.0～3.0cm带腋芽的茎段。扦插于加入抑菌剂：百菌清或多菌灵的培养基中，两种抑菌剂分别设4个浓度：0.2，0.4，0.6，0.8g·l^-1。每个处理接种24个茎段，重复3次。

1.2.2外植体类型和消毒方式对马大杂种相思扦插的影响

将马大杂种相思当年生腋芽饱满枝条的第1～2腋芽茎段(上段)、第3～5腋芽茎段(中段)、分别剪成带叶、不带叶两种类型的长2.0～3.0cm带腋芽茎段，扦插于培养基中。每个处理接种21个茎段，重复3次。

1.2.3iba、naa、abt浓度及处理时间对马大杂种相思扦插的影响

马大杂种相思：以iba、naa、abt浓度0.4，0.6，0.8，1.0g·l^-1，处理时间分别为：2，3h。每个处理接种24个茎段，重复3次。

1.3培养条件

培养基中添加琼脂7g·l^-1，控制ph值为6.0(抑菌剂加入前测定)，在实验室开放的实验台上接种，培养温度为25℃±2℃，每日光照12h，光照强度2500lx。培养45d后统计褐化率、污染率、存活率、生根率。

1.4数据处理

使用excel，spss19.0对数据进行处理和方差分析，以最小显著差数法(lsd)评价差异的显著性。

污染率％＝污染数÷接种数×100％................................①

褐化率％＝褐化数÷接种数×100％..................................②

存活率％＝存活数÷接种数×100％....................................③

总生根率％＝生根的外植体数÷总接种外植体数×100％................④

存活生根率％＝生根的外植体数÷存活的外植体数×100％...............⑤

其中，①+②+③＝100％。

2结果与分析

2.1抑菌剂种类及浓度对马大杂种相思外植体的影响

从表1可以看出，2种抑菌剂对马大杂种相思外植体的影响，总体来说，多菌灵的污染率较百菌清的高，多菌灵不适宜作为马大杂种相思扦插生根的抑菌剂。

而百菌清对马大杂种相思外植体的影响，随着浓度的升高，褐化率增加，污染率的变化不太明显(马大杂种相思，在百菌清0.8g·l^-1时，污染率较为严重，为20.83％)，外植体存活率也显著降低。

综合来看，百菌清浓度为0.2g·l^-1时，马大杂种相思的外植体存活率最高，为80.55％(图1)。

表1抑菌剂种类和浓度对3种相思扦插的影响①

①同列数据小写字母不同表示lsd检验差异显著(p<0.05)，下同。

2.2外植体类型和消毒方式对马大杂种相思外植体的影响

从表2可以看出，马大杂种相思不同外植体类型，采用不同的消毒方式，其褐化率、污染率和存活率均有显著性差异。其中，上部带叶、中部不带叶茎段，无论采用哪种消毒方式，它们的褐化率均显著高于中部带叶的茎段；而存活率则显著低于中部带叶的茎段。因此，中部带叶的茎段是马大杂种相思适宜的外植体。

马大杂种相思的中部带叶茎段，采用不同方式消毒，褐化率、污染率和存活率部分有显著差异，表现为多菌灵处理3min的效果最好(图2)，存活率为96.83％。

表2外植体类型及消毒方式对3种相思扦插的影响①

2.3生长调节剂浓度及处理时间对马大杂种相思扦插的影响

马大杂种相思接种于培养基后30d左右开始生根，40d左右根伸长至4cm左右。iba1.0g·l^-1处理2h时，开放扦插生根率最高，为100％(图3、图10)。三种生长调节剂处理中，iba处理的生根效果最优，其次是abt。iba处理2h的效果优于3h的(表3)。iba处理时间为2h时随着iba浓度的增加，生根率持续上升，直至iba1.0g·l^-1时生根率达100％；处理时间为3h时生根率随着iba浓度上升呈现先上升后下降的趋势，0.8g·l^-1对应的生根率为56.03％(显著低于此浓度2h的生根率)，且iba浓度继续增加，生根率急剧下降，iba1.0g·l^-1时生根率仅为13.90％。naa处理2h，3h生根率均随着naa浓度的增加呈现上升趋势，但不同处理时间和浓度对应的生根率并无显著差异。abt处理2h时生根率随浓度增加不断下降，3h时生根率随着浓度的增加呈现先上升后下降趋势。

表3生长调节剂浓度及处理时间对马大杂种相思扦插生根的影响①

实施例2

1材料方法

1.1材料

从中国林业科学研究院热带林业研究所马占相思16年生试验林中选取优良单株，在优良单株上采集枝条，先通过扦插繁殖，建立采穗圃，从一年生的采穗圃中采集腋芽饱满的枝条为研究材料。

1.2方法

1.2.1抑菌剂种类及浓度对马占相思扦插的影响

于8月剪取马占相思采穗圃的当年生腋芽饱满枝条，将采集的枝条剪去叶片，洗衣粉水浸泡30min，刷净后流水冲洗2h，剪成长2.0～3.0cm带腋芽的茎段。扦插于加入抑菌剂：百菌清或多菌灵的培养基中，两种抑菌剂分别设4个浓度：0.2，0.4，0.6，0.8g·l^-1。每个处理接种24个茎段，重复3次。

1.2.2外植体类型和消毒方式对马占相思扦插的影响

将马占相思当年生腋芽饱满枝条的第1～2腋芽茎段(上段)、第3～5腋芽茎段(中段)、分别剪成带叶、不带叶两种类型的长2.0～3.0cm带腋芽茎段，扦插于培养基中。每个处理接种21个茎段，重复3次。

1.2.3iba、naa、abt浓度及处理时间对马占相思扦插的影响

马占相思：以iba浓度0.2，0.6，1.0，1.4g·l^-1，处理时间为：2h。每个处理接种24个茎段，重复3次。

1.3培养条件

培养基中添加琼脂7g·l^-1，控制ph值为6.0(抑菌剂加入前测定)，在实验室开放的实验台上接种，培养温度为25℃±2℃，每日光照12h，光照强度2500lx。培养45d后统计褐化率、污染率、存活率、生根率。

1.4数据处理

使用excel，spss19.0对数据进行处理和方差分析，以最小显著差数法(lsd)评价差异的显著性。

污染率％＝污染数÷接种数×100％..................................①

褐化率％＝褐化数÷接种数×100％..................................②

存活率％＝存活数÷接种数×100％...................................③

总生根率％＝生根的外植体数÷总接种外植体数×100％..................④

存活生根率％＝生根的外植体数÷存活的外植体数×100％...............⑤

其中，①+②+③＝100％。

2结果与分析

2.1抑菌剂种类及浓度对马占相思外植体的影响

从表1可以看出，2种抑菌剂对马占相思外植体的影响，总体来说，多菌灵的污染率较百菌清的高，多菌灵不适宜作为马占相思扦插生根的抑菌剂。

而百菌清对马占相思外植体的影响，随着浓度的升高，褐化率增加，污染率的变化不太明显，外植体存活率也显著降低。

综合来看，百菌清浓度为0.2g·l^-1时，马占相思的外植体存活率最高，为86.11％(图4)。

2.2外植体类型和消毒方式对马占相思外植体的影响

从表2可以看出，马占相思不同外植体类型，采用不同的消毒方式，其褐化率、污染率和存活率均有显著性差异。其中，上部带叶、中部不带叶茎段，无论采用哪种消毒方式，它们的褐化率均显著高于中部带叶的茎段；而存活率则显著低于中部带叶的茎段。因此，中部带叶的茎段是马占相思适宜的外植体。

马占相思的中部带叶茎段，采用不同方式消毒，褐化率、污染率和存活率部分有显著差异，表现为多菌灵处理3min的效果最好(图5)，存活率为90.48％。

2.3生长调节剂浓度及处理时间对马占相思扦插的影响

马占相思扦插于培养基中35d左右开始生根，45d左右根伸长至4cm左右。三种生长调节剂对马占相思生根影响效果最优的是iba，其次是abt，naa效果最差(图11)。高浓度abt会导致高的褐化率，abt浓度为1.0g·l-1时褐化率高达48.61％，1.4g·l^-1时褐化率增加到52.78％，显著高于其它处理。各处理的污染率均较低，并无显著差异。iba、naa处理的褐化率较低，naa浓度增加，生根率上升，但最高生根率仅为51.39％；随着iba浓度增加，马占相思生根率先上升后下降。iba0.6g·l^-1时和1.0g·l^-1时得总生根率无显著差异，但iba0.6g·l^-1时存活生根率最高，为94.33％，显著高于其它处理(表4)。因此，iba0.6g·l^-1处理2h为马占相思开放扦插生根最优处理(图6)，生根率为94.33％。

表4生长调节剂浓度及处理时间对马占相思扦插生根的影响①

实施例3

1材料方法

1.1材料

从中国林业科学研究院热带林业研究所大叶相思16年生试验林中选取优良单株，在优良单株上采集枝条，先通过扦插繁殖，建立采穗圃，从一年生的采穗圃中采集腋芽饱满的枝条为研究材料。

1.2方法

1.2.1抑菌剂种类及浓度对大叶相思扦插的影响

于8月剪取大叶相思采穗圃的当年生腋芽饱满枝条，将采集的枝条剪去叶片，洗衣粉水浸泡30min，刷净后流水冲洗2h，剪成长2.0～3.0cm带腋芽的茎段。扦插于加入抑菌剂：百菌清或多菌灵的培养基中，两种抑菌剂分别设4个浓度：0.2，0.4，0.6，0.8g·l^-1。每个处理接种24个茎段，重复3次。

1.2.2外植体类型和消毒方式对大叶相思扦插的影响

将大叶相思当年生腋芽饱满枝条的第1～2腋芽茎段(上段)、第3～5腋芽茎段(中段)、分别剪成带叶、不带叶两种类型的长2.0～3.0cm带腋芽茎段，扦插于培养基中。每个处理接种21个茎段，重复3次。

1.2.3iba、naa、abt浓度及处理时间对大叶相思扦插的影响

大叶相思：以iba浓度0.4，0.6，0.8，1.0g·l^-1，naa、abt浓度0.4，0.6，0.8g·l^-1，分别处理2h，3h。每个处理接种24个茎段，重复3次。

1.3培养条件

培养基中添加琼脂7g·l^-1，控制ph值为6.0(抑菌剂加入前测定)，在实验室开放的实验台上接种，培养温度为25℃±2℃，每日光照12h，光照强度2500lx。培养45d后统计褐化率、污染率、存活率、生根率。

1.4数据处理

使用excel，spss19.0对数据进行处理和方差分析，以最小显著差数法(lsd)评价差异的显著性。

污染率％＝污染数÷接种数×100％....................................①

褐化率％＝褐化数÷接种数×100％....................................②

存活率％＝存活数÷接种数×100％....................................③

总生根率％＝生根的外植体数÷总接种外植体数×100％..................④

存活生根率％＝生根的外植体数÷存活的外植体数×100％................⑤

其中，①+②+③＝100％。

2结果与分析

2.1抑菌剂种类及浓度对大叶相思外植体的影响

从表1可以看出，2种抑菌剂对大叶相思外植体的影响，总体来说，多菌灵的污染率较百菌清的高，多菌灵不适宜作为大叶相思扦插生根的抑菌剂。

而百菌清对大叶相思外植体的影响，随着浓度的升高，褐化率增加，污染率的变化不太明显，外植体存活率也显著降低。

综合来看，百菌清浓度为0.2g·l^-1时，大叶相思的外植体存活率最高，为83.33％(图7)。

2.2外植体类型和消毒方式对大叶相思外植体的影响

从表2可以看出，大叶相思不同外植体类型，采用不同的消毒方式，其褐化率、污染率和存活率均有显著性差异。其中，上部带叶、中部不带叶茎段，无论采用哪种消毒方式，它们的褐化率均显著高于中部带叶的茎段；而存活率则显著低于中部带叶的茎段。因此，中部带叶的茎段是3种相思适宜的外植体。

大叶相思的中部带叶茎段，采用不同方式消毒，褐化率、污染率和存活率部分有显著差异，表现为多菌灵处理3min的效果最好(图8)，存活率为100.00％。

2.3生长调节剂浓度及处理时间对大叶相思扦插的影响

大叶相思扦插于基质中25d左右开始生根，35d左右根伸长至4cm左右，最高生根率为100％。三种生长调节剂不同处理时间的扦插生根率有显著差异，处理时间对生根的影响大于生长调节剂种类的影响(表5、图12)。三种生长调节剂的处理时间为3h时对应的扦插生根率均高于各自处理2h时的生根率。naa对应的生根率总体较低，其处理2h时浓度高于0.4g·l^-1(生根率为39.74％)生根率大幅增加，0.8g·l^-1时生根率为78.65％；处理3h时浓度的变化几乎不会引起生根率的变化。abt2h时生根率随浓度升高而升高，但最高也仅为85.00％；3h时生根率随浓度增加先上升后下降，当浓度为0.6g·l^-1时生根率最高为87.83％。iba3h时生根率随浓度上升而升高，至iba0.8g·l^-1时生根率最高(100％)，iba2h时生根率先上升后下降，最高生根率为92.28％。故大叶相思扦插生根最优生长调节剂为iba0.8g·l^-1，处理3h(图9)。

表5生长调节剂浓度及处理时间对大叶相思扦插生根的影响①

3结论与讨论

3.1结论

马大杂种相思、马占相思及大叶相思扦插生根的研究并不多，且尚未见对三者进行开放扦插生根的研究。本实验结合开放组培的思路，以一种全新的方式对三种相思进行扦插：

加入抑菌剂进行开放式培养，并不要求严格无菌，在整个培养环节中完全不使用高温高压灭菌和超净工作台，区别于目前开放式光自养微繁技术，不使用任何特殊的培养设备及培养条件，培养环境中允许有菌；借鉴前人对培养基研究的经验，选择最简化的培养基质，进行扦插研究。本研究以课题组已成功建立的开放操作，对抑菌剂种类、浓度，适宜的外植体类型，以及扦插生根促成剂进行筛选，获得更为简单易行，生根率较高的扦插生根体系：以琼脂7g·l^-1，加抑菌剂百菌清0.2g·l^-1为培养基质，外植体选择中部带叶类型，以多菌灵0.8g·l^-1消毒3min后，以适宜的生根剂浸泡：iba1.0g·l^-1处理2h(马大杂种相思)、iba0.6g·l^-1处理2h(马占相思)、iba0.8g·l^-1处理3h(大叶相思)，在开放的实验台上接种至扦插基质中，生根率分别为：100％，94.33％，100％。建立的开放生根体系，使三种相思的扦插基质成分简单可控，对今后深入开展相思扦插生根机理研究具有重要的现实意义。

3.2讨论

找到适宜的抑菌剂是脱离严格无菌环境进行培养的关键，但适宜的抑菌剂筛选较困难，不同物种对抑菌剂的种类、浓度及组合方式有不同的要求，难以找到具有普适性的抑菌剂。对多菌灵、代森锰锌、利福平、山梨酸钾、链霉素、青霉素、氨苄西林钠、硫酸庆大霉素、羧苄青霉素9种抑菌剂进行筛选，发现仅多菌灵和代森锰锌适宜长柄扁桃的培养(孙占育等，2013)。多菌灵对微球菌和杜氏青霉不能有效抑制，百菌清仅能抑制黑曲霉菌种(张薪薪等，2005)。多种植物中提取的生物组成物，与植物组织亲和力高，可渗入植物内部，对植物内生菌有一定抑制作用，对植物的外植体的伤害也较小(崔刚等，2004)，但此类合成型抑菌剂成分较多，获取不易，不利于在生产、研究中的运用。本研究中选取了生产中常用的效果较好的广谱性抑菌剂：百菌清、多菌灵，结果三种相思适宜的抑菌剂均为百菌清，适宜的浓度0.2g·l^-1，污染率较低；多菌灵的污染率均较高，对微生物的抑制效果较差，这与张薪薪等人(2005)的研究结果不一致，这可能是抑菌剂在不同培养环境、不同物种培养中表现出的差异性导致。因此，在今后不同物种培养中，仍应重视对抑菌剂筛选工作，以求找到能适应多个物种培养的方便获取的抑菌剂。

在培养瓶内进行扦插生根，外植体的预处理和选择是培养成功的首要关键步骤，目前多用浓度较高的升汞对外植体进行消毒，对外植体的毒害作用较大。也有学者们对其它具有抑菌作用的物质进行了尝试，用利福平溶液对番木瓜侧芽预处理，有效降低了污染率，并对生长无毒副作用(reuvenio，etal.，1990)。用多菌灵、聚乙烯吡咯烷酮、抗坏血酸、柠檬酸、氨苄青霉素的混合液对宽叶紫荆木的茎段进行预处理，减少了霉菌、细菌的污染(singhp，etal.，1992)。但由于这些具有抑菌效果的物质并不是对所有微生物都有效，且不同来源的外植体带的主要微生物也不同，针对不同树种、来源的外植体需要进行对应的筛选。本实验中选用多菌灵0.8g·l^-1对外植体进行预处理，三种相思均选中部带叶的茎段为外植体，以0.8g·l^-1浸泡3min，均获得了高的存活率：96.83％(马大杂种相思)、90.48％(马占相思)、100％(大叶相思)。

培养基中无糖，进行外植体光自养培养，能进一步简化培养基，使培养的污染可能性大幅下降，但目前的光自养技术多依托于特殊的培养条件：需要特殊的培养容器、培养环境中co2浓度需控制、以及特殊的光照模式。开放式光自养，以生根为目的时，使用透气性好(如蛭石、珍珠岩、河沙等)的培养基质生根效果较好(丁国昌等，2009)。但对黒木相思光自养微繁的研究中，使用透气性较差的琼脂培养基，获得的生根率(85％)也较高(丁国昌等，2010)。本研究以水加琼脂为扦插基质，以适宜的生长调节剂处理，获得了更高的生根率，100％(马大杂种相思)，94.33％(马占相思)，100％(大叶相思)。可见透气性差的琼脂培养基同样适于做光自养微繁生根的培养基质。另，此成分简单可控的基质可运用于生根机制的研究，对科学研究而言，具有如蛭石等复杂培养基质不具备的优势。

抑菌剂的加入对外植体的生长有一定影响，外植体对生长调节剂处理的响应会有何变化的研究尚少。本课题组以黄心土为扦插基质，已获得三种相思传统扦插方式的适宜处理，iba处理的效果最佳，马大杂种相思以iba0.4g·l^-1处理2h，生根率为93.33％(易敏等，2014)；马占相思以iba0.4g·l^-1处理2h，生根率为84.2％(易敏等，2010)；大叶相思以iba0.2g·l^-1处理2h，生根率为90％(易敏等，2011)。本实验中适宜的生长调节剂均为iba，与传统扦插的一致，但iba浓度及处理时间上有所差别：iba1.0g·l^-1处理2h(马大杂种相思)、iba0.6g·l^-1处理2h(马占相思)、iba0.8g·l^-1处理3h(大叶相思)，适宜浓度均高于传统的扦插培养，处理时间也有更长的趋势，具体原因有待进一步的实验探究。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。