一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法与流程

1.本发明涉及牡蛎繁殖技术领域，具体涉及一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法。


背景技术：

2.牡蛎，俗称海蛎子、蚝(蠔)、生蚝、蚵仔等，是一种广布性双壳贝类，目前已发现有100多种，世界沿海各国几乎都有生产，产量高居贝类之首。中国拥有丰富的牡蛎资源和利用这一资源的悠久历史。南方沿海一些地区的先民们早在汉朝时就掌握了插竹养蚝技术，至今已有2000余年的历史。新中国成立特别是改革开放政策实施以来，中国牡蛎产量不断增长，进入21世纪后更是呈现出快速大幅提升的态势，2017年占到了全球的83.29％，2018年再创新高，达到513.98万吨(附件1)。中国沿海地区分布着种类多样的牡蛎种群。其中，商业化利用程度最高的是长牡蛎(crassostrea gigas gigas)、福建牡蛎(c.gigas angulata)和香港牡蛎(c.hongkongensis)，而近江牡蛎(c.ariakensis)和熊本牡蛎(c.sikmea)也有一定的养殖规模。
3.牡蛎产业是中国渔业的重要组成部分，牡蛎养殖是中国沿海地区的一类重要活动，在某些偏远地区甚至是当地的主导产业。健康发展的牡蛎产业，在保障国家粮食安全、丰富动物蛋白种类、维持沿海地区稳定、拓宽就业渠道，增加渔农收入、扩大出口和赚取外汇、传承传统文化、清洁海域水质和固碳汇碳等方面，都发挥着重要的有些甚至是不可替代的作用。
4.中国专利申请号为cn201010595675.7公开了一种三倍体单体牡蛎培育方法，在说明书中记载有“，包括：亲贝获取精卵、三倍体牡蛎的生产、幼虫培育、采苗、单体牡蛎生产、倍性检测等步骤，将三倍体技术与单体牡蛎苗种培育技术相结合培育牡蛎新品种，同时可以规模化生产，使用该方法培育的单体牡蛎较现有牡蛎壳形规则、美观、壳深肉肥等明显的优点”，上述专利文件所繁殖的三倍体蚝苗虽然具有一定的糖原含量，但是其糖原含量不高，同时，在繁殖时，产成本高、牡蛎生长速度慢、牡蛎产量低，影响了所繁殖的三倍体蚝苗的品质及质量。
5.综上所述，研发一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法，仍是牡蛎繁殖技术领域中急需解决的关键问题。


技术实现要素：

6.针对现有技术所存在的上述缺点，本发明的目的在于提供一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法，本发明的三倍体的糖原含量高、品质和胃口好，采用海上浮筏养殖，相对于传统的方式，产成本低，容易管理、牡蛎生长速度快，个体壳型规则、牡蝠大小均匀、人为可操作性强、牡蛎产量高、产品不易丢失，这些特点决定了本发明培育的三倍体牡蛎有条件进入国内、国际高档牡蛎市场，替代改良现有牡蛎养殖品种，从而真正带动庞大的国内牡蛎养殖业实现产业升级。
7.为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
8.一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法，包括以下步骤：
9.s1、选择亲本：选择性腺成熟的贝体作为亲本。
10.s2、挤精卵：选择性腺成熟的亲贝用解剖法获取精卵，在卵子数量达到要求后，离体促熟，使卵内胚泡消失，在2h内进行受精。
11.s3、幼虫培育：在水温为23℃的条件下，经过20h孵化，将受精卵发育至d形幼虫，采用300目网箱及时选出，培育密度为5-8个/ml。
12.s4、附着基的投放：当眼点幼虫的比率达1/3以上，幼虫壳长为270-340μm时，开始投放附着基，每个家系投100片，在附着基投放4-5天后，每片附着基附着稚贝20-30粒，开始降温，降温梯度每日2-4℃，至接近自然海水水温。
13.s5、海上养殖：在稚贝壳长为0.6-1.0mm以上时，采用海上浮筏养殖。
14.s6、检测：用酶染色法测牡蛎的糖原含量。
15.通过采用上述技术方案：本发明采用二倍雄性和一倍雌性进行受精，并通过对幼虫培育进行培育，为幼虫培育提供良好的培育密度，通过附着基的投放和梯度降温，使得培育的稚贝能够更好的适于海上培养，通过诱导抑制微管的组装，使已有的微管解聚，从而阻止纺锤体的形成或破坏已形成的纺锤体，使细胞的染色体加倍而不分离，得到诱导率高的三倍体，使得获得三倍体的糖原含量高、品质和胃口好，采用海上浮筏养殖，相对于传统的方式，产成本低，容易管理、牡蛎生长速度快，个体壳型规则、牡蝠大小均匀、人为可操作性强、牡蛎产量高、产品不易丢失。
16.本发明进一步的设置为：在所述步骤s1中，选择性腺成熟的贝体作为亲本的方法为：
17.亲贝选择壳长8-9cm，生长好的1龄贝；将亲贝清洗、消毒装入网龙挂在亲贝培育池内蓄养；每个检查性腺成熟度。
18.通过采用上述技术方案：本发明通过选择亲贝，并对亲贝进行清洗、消毒培养，能够获得优质的亲贝。
19.本发明进一步的设置为：在亲贝培育池内蓄养时，密度为40-50个/m3，保持水温在20-28℃。
20.通过采用上述技术方案：本发明以密度为40-50个/m3，保持水温在20-28℃，在亲贝培育池内蓄养，能够为亲贝培养提供良好的培养空间和温度。
21.本发明进一步的设置为：在所述步骤s2中，离体促熟时间为30-60min，受精时，水温控制在23-25℃。
22.通过采用上述技术方案：本发明将水温控制在23-25℃，能够实现良好的离体促熟效果，使卵内胚泡消失。
23.本发明进一步的设置为：在所述步骤s2中，受精后30min后，在镜下观察，在40-50％第一极体出现后，加入秋水仙素，15-20min后倒入池中。
24.通过采用上述技术方案：本发明通过加入秋水仙素，抑制微管的组装，使已有的微管解聚，从而阻止纺锤体的形成或破坏已形成的纺锤体，使细胞的染色体加倍而不分离。
25.本发明进一步的设置为：在所述步骤s3中，当d形幼虫主纤毛消失，消化道形成，投小型金藻为开口饵料，投喂量根据所观察的幼虫胃含量来定，每天投喂4次。
26.通过采用上述技术方案：本发明能够保证d形幼虫能够良好的生长，可以在每天早
晨泼洒益生菌、黄药等，改善水质和促进牡蛎苗的消化。
27.本发明进一步的设置为：在所述步骤s4中，附着基采用处理干净的扇贝贝壳串制而成，每100片为1串，使用前用50mg/l的naoh溶液浸泡24小时，然后冲洗干净。
28.通过采用上述技术方案：本发明采用附着基能够为牡蛎生长提供良好的生长环境。
29.本发明进一步的设置为：在所述步骤s6中，用流式细胞仪检测糖原含量。
30.通过采用上述技术方案：本发明采用流式细胞仪能够对细胞进行自动分析和分选，提高了检测效率和检测的准确性。
31.有益效果
32.采用本发明提供的技术方案，与已知的公有技术相比，具有如下有益效果：
33.本发明通过对幼虫培育进行培育，为幼虫培育提供良好的培育密度，通过附着基的投放和梯度降温，使得培育的稚贝能够更好的适于海上培养，通过诱导抑制微管的组装，使已有的微管解聚，从而阻止纺锤体的形成或破坏已形成的纺锤体，使细胞的染色体加倍而不分离，得到诱导率高的三倍体，使得获得三倍体的糖原含量高、品质和胃口好，采用海上浮筏养殖，相对于传统的方式，产成本低，容易管理、牡蛎生长速度快，个体壳型规则、牡蝠大小均匀、人为可操作性强、牡蛎产量高、产品不易丢失，这些特点决定了本发明培育的三倍体牡蛎有条件进入国内、国际高档牡蛎市场，替代改良现有牡蛎养殖品种，从而真正带动庞大的国内牡蛎养殖业实现产业升级。
附图说明
34.图1为一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法的流程图。
具体实施方式
35.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
36.下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
37.实施例1
38.请参照图1所示，一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法，包括以下步骤：
39.步骤一、选择亲本：选择性腺成熟的贝体作为亲本。
40.选择性腺成熟的贝体作为亲本的方法为：
41.亲贝选择壳长8cm，生长好的1龄贝；将亲贝清洗、消毒装入网龙挂在亲贝培育池内蓄养；每个检查性腺成熟度。
42.在亲贝培育池内蓄养时，密度为40个/m3，保持水温在20℃。
43.步骤二、挤精卵：选择性腺成熟的亲贝用解剖法获取精卵，在卵子数量达到要求后，离体促熟，使卵内胚泡消失，在2h内进行受精。
44.离体促熟时间为30min，受精时，水温控制在23℃。
45.受精后30min后，在镜下观察，在40％第一极体出现后，加入秋水仙素，15min后倒
入池中。
46.步骤三、幼虫培育：在水温为23℃的条件下，经过20h孵化，将受精卵发育至d形幼虫，采用300目网箱及时选出，培育密度为5个/ml。
47.当d形幼虫主纤毛消失，消化道形成，投小型金藻为开口饵料，投喂量根据所观察的幼虫胃含量来定，每天投喂4次。
48.步骤四、附着基的投放：当眼点幼虫的比率达1/3以上，幼虫壳长为270μm时，开始投放附着基，每个家系投100片，在附着基投放4天后，每片附着基附着稚贝20粒，开始降温，降温梯度每日2℃，至接近自然海水水温。
49.附着基采用处理干净的扇贝贝壳串制而成，每100片为1串，使用前用50mg/l的naoh溶液浸泡24小时，然后冲洗干净。
50.步骤五、海上养殖：在稚贝壳长为0.6mm以上时，采用海上浮筏养殖。
51.s6、检测：用酶染色法测牡蛎的糖原含量。
52.用流式细胞仪检测糖原含量。
53.实施例2
54.本实施例所提供的一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法大致和实施例1相同，其主要区别在于：
55.在步骤一中，亲贝选择壳长9cm，生长好的1龄贝，在亲贝培育池内蓄养时，密度为45个/m3，保持水温在24℃。
56.在步骤二中，离体促熟时间为45min，受精时，水温控制在24℃，在45％第一极体出现后，加入秋水仙素，17min后倒入池中。
57.在步骤三中，幼虫培育：培育密度为6个/ml。
58.在步骤四中，幼虫壳长为305μm时，开始投放附着基，每个家系投100片，在附着基投放5天后，每片附着基附着稚贝25粒，开始降温，降温梯度每日3℃，至接近自然海水水温。
59.在步骤五中，在稚贝壳长为0.8mm以上时，采用海上浮筏养殖。
60.实施例3
61.本实施例所提供的一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法大致和实施例1相同，其主要区别在于：
62.在步骤一中，亲贝选择壳长9cm，生长好的1龄贝，在亲贝培育池内蓄养时，密度为50个/m3，保持水温在28℃。
63.在步骤二中，离体促熟时间为60min，受精时，水温控制在25℃，在50％第一极体出现后，加入秋水仙素，20min后倒入池中。
64.在步骤三中，幼虫培育：培育密度为8个/ml。
65.在步骤四中，幼虫壳长为340μm时，开始投放附着基，每个家系投100片，在附着基投放5天后，每片附着基附着稚贝30粒，开始降温，降温梯度每日4℃，至接近自然海水水温。
66.在步骤五中，在稚贝壳长为1.0mm以上时，采用海上浮筏养殖。
67.检测结果
68.为了进一步说明本发明的有益效果，本发明人选取两种三倍体牡蛎，选择了专利申请号为cn201010595675.7的三倍体单体牡蛎，下面简述为第一三倍体牡蛎，同时选择了专利申请号为cn200610046697.1的三倍体单体牡蛎，下面简述为第二三倍体牡蛎，同时选
择本发明制得的三倍体牡蛎，用流式细胞仪检测糖原含量检测，并检测生长速度，得到了以下数据，详见表1：
69.表1实验数据表
[0070] 糖原含量生长速度第一三倍体牡蛎6.23％较慢第二三倍体牡蛎7.21％较慢实施例112.50％较快实施例212.45％较快实施例312.48％较快
[0071]
通过分析上述表1中的相关数据可知，通过本发明所繁殖的三倍体牡蛎不仅具有糖原含量高，而且还具有良好的生长速度。由此表明本发明提供的一种蚝三倍体好蚝苗繁育方法具有更广阔的市场前景，更适宜推广。
[0072]
本发明通过对幼虫培育进行培育，为幼虫培育提供良好的培育密度，通过附着基的投放和梯度降温，使得培育的稚贝能够更好的适于海上培养，通过诱导抑制微管的组装，使已有的微管解聚，从而阻止纺锤体的形成或破坏已形成的纺锤体，使细胞的染色体加倍而不分离，得到诱导率高的三倍体，使得获得三倍体的糖原含量高、品质和胃口好，采用海上浮筏养殖，相对于传统的方式，产成本低，容易管理、牡蛎生长速度快，个体壳型规则、牡蝠大小均匀、人为可操作性强、牡蛎产量高、产品不易丢失，这些特点决定了本发明培育的三倍体牡蛎有条件进入国内、国际高档牡蛎市场，替代改良现有牡蛎养殖品种，从而真正带动庞大的国内牡蛎养殖业实现产业升级。
[0073]
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不会使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。