技术特征：
1.一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法包括以下步骤：步骤一，进行试验动物的确定及分组；步骤二，进行仪器和试剂的确定；步骤三，进行样品的采集；步骤四，进行指标的测定；步骤五，进行统计分析。2.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤一中，所述试验动物的确定及分组，包括：从犬场购进2岁，体重为4
±
1kg的贵宾犬15只；购进后进行身体全面检查，确保犬只健康；试验前期进行2周的适应性饲养，将犬随机分为3组：空白对照组，即c组每天饲喂基础犬粮，自由饮用自来水；40mg腺嘌呤模型组在饲喂基础犬粮的同时按体重添加腺嘌呤40mg/kg
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d；75mg腺嘌呤模型组在饲喂基础犬粮的同时按体重添加腺嘌呤75mg/kg
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d；试验周期为15天，犬只饲养采用自由采食和饮水的饲养方式，定期观察犬的饮食、饮水和精神状况；试验过程中环境条件、基础犬粮、饲养管理均保持一致；根据剂量换算，由大鼠剂量200-250mg/kg
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d查表换算出犬造模剂量为40-75mg/kg
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d；整个试验严格按照华中农业大学动物保护与利用委员会中国武汉批准的规程进行。3.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤二中，所述仪器和试剂，包括所述仪器，包括动物专用掌上尿液分析仪，台式高速冷冻离心机，光学显微镜，标准试剂型纯水仪，移液枪以及酶标仪；所述试剂，包括血肌酐，血尿素氮，纯度≥99.5％的腺嘌呤，纯度≥99％的纳米硒以及2ml、5ml的注射器。4.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤三中，所述样品的采集，包括：(1)血样的采集在试验的第1、8和15天，用真空采血管和采血针经犬的前肢头静脉采血3ml，分离血清后于冰箱冻存，检测血肌酐和血尿素氮；(2)尿液的采集在试验的第1、8和15天，用注射器经膀胱穿刺采尿2ml，在30min以内送至华中农业大学动物医院检验科进行尿常规检测；(3)肾组织的采集在试验最后一天采集左侧肾脏，分离脂肪囊和纤维膜后，将肾脏组织切成小块固定于4％的多聚甲醛中，用于制作石蜡切片，剩下部分冻存超低温冰箱。5.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤四中，所述指标的测定，包括：(1)进行尿常规的测定；(2)进行犬血清肌酐指标测定；(3)进行犬血清尿素氮指标测定；
(4)进行肾脏组织切片观察。6.如权利要求5所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述尿常规的测定，包括：收集的尿液样本于30min内进行尿液常规检测；将尿液倒入灭菌的离心管中，使尿液检测试纸条全部被尿液浸润，将浸润的试纸条放于尿液分析仪上进行检测并记录结果。7.如权利要求5所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述犬血清肌酐指标测定，包括：使用肌酐测定试剂盒利用除蛋白法进行检测；分别设立试剂空白管、标准管以及测定管，测定管分别标号1～15号；在测定管中加入0.2ml血清，再加入钨酸蛋白沉淀剂2ml，充分混匀，3500r/min，离心10min，取上清液备用；每管加入苦味酸溶液0.5ml，0.75mol/l氢氧化钠溶液0.5ml；空白管加入双蒸水1.6ml，标准管加入50μmol/l肌酐标准品1.6ml，测定管加入1.6ml上一步制备的上清液；充分混合后置于37℃水浴锅中水浴10min后取出流水冷却，波长510nm，光径1cm，双蒸水调零，测定各管的吸光度od值；计算公式为：8.如权利要求5所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述犬血清尿素氮指标测定，包括：分别设立试剂空白管、标准管以及测定管，测定管分别标号1～15号；空白管、标准管以及测定管中分别加入1g/l肟溶液和酸溶液各1ml；空白管中加入双蒸水0.02ml，标准管中加入0.02ml的10mmol/l尿素氮标准品，测定管中加入0.02ml的待测血清，充分混合后置于沸水中准确水浴15min后取出流水冷却，波长520nm，光径1cm，双蒸水调零，测定各管的吸光度od值；计算公式为：9.如权利要求5所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述肾脏组织切片观察，包括：将固定的肾组织从多聚甲醛中取出，修整切块，将修整好的组织块放入石蜡中进行包埋后，进行切片；在切片机上将组织块切成5μm厚的切片，经过二甲苯和不同梯度的酒精进行脱水透明后，再用苏木素伊红进行染色，最后用中性树胶封片以后进行光学显微镜的观察。10.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤五中，所述统计分析，包括：用spss 16.0统计软件进行数据分析，所有数据均以平均数
±
标准差，即mean
±
sd表示，采用单因素方差分析；#表示与空白对照组c相比，
#
p<0.05表示差异显著，
##
p<0.05表示差异极显著。
技术总结
本发明属于急性肾衰竭模型构建技术领域，公开了一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法，试验动物的确定及分组；仪器和试剂的确定；样品的采集；指标的测定；统计分析。本发明提供的犬的急性肾衰竭模型建立的方法，采用腺嘌呤来诱导建立犬急性肾衰竭的模型，通过血液和尿液等指标的检测及肾脏组织病理学变化来判断模型是否成功建立，进而确定腺嘌呤诱导犬急性肾衰竭的最佳剂量。综合结果表明，给犬添加75mg/kg
技术研发人员：周东海 李霞 张嘉宾 刘佳琪 史箐箐 刘鑫 张梦迪
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：2021.11.19
技术公布日：2022/3/18