一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法与流程

1.本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法。


背景技术：

2.红螯螯虾一般指四脊滑螯虾，是拟螯虾科、滑螯虾属动物。四脊滑螯虾体表披一层光滑的坚硬外壳，体色呈淡青绿色。身体分头胸部和腹部，头胸部稍大，背腹路扁平，头胸部与腹部均匀连接。四脊滑螯虾营底栖生活，喜栖息于水草、树枝、石隙等隐蔽物中。该虾昼伏夜出，不喜强光，在正常条件下，白天多隐藏在水中较深处或隐蔽物中，很少活动。四脊滑螯虾是广食性动物，食性在不同的发育阶段稍有差异。成虾兼食动植物，主食植物碎屑、动物尸体，也摄食水蚯蚓、摇蚊幼虫、小型甲壳类及一些水生昆虫。
3.由于市场对虾苗的需求日益增大，在进行育苗时需要进行高密度的繁殖育苗，但这种育苗方式需要有良好的水体环境以及充足的氧气，来满足虾卵的良好生长。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法，用于解决背景技术中的问题。
5.本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
6.一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法，具体包括如下步骤：
7.步骤一：将亲虾加入消毒后的繁殖池中进行繁殖育种，并加入乙二胺四乙酸二钠；
8.步骤二：将产卵亲虾移入催熟池中，对产卵亲虾进行催熟，2-3天后，使用浓度为20-30ml/l的聚维酮碘对产卵亲虾进行浸泡2-3min，使用生理盐水清洗干净后移入产卵池，产卵后使用消毒后的镊子将虾卵从亲虾腹部分离，得到虾卵；
9.步骤三：取出虾卵，使用生理盐水对虾卵进行浸泡清洗，然后将清洗后的虾卵加入装有孵化液的孵化池中，孵化密度为1500-1600粒/l，池内溶氧保持在12-14mg/l，孵化温度设置为25-27℃，孵化结束后得到虾苗。
10.作为本发明进一步的方案：步骤一中亲虾为雌虾和雄虾按数量比为4：1组成。
11.作为本发明进一步的方案：步骤一中乙二胺四乙酸二钠的用量为3-5g/l。
12.作为本发明进一步的方案：所述孵化液由如下重量份原料混合而成：复合维生素0.4-1.2份、葡萄糖8-16份、葡萄糖酸钙3.2-5.2份、水解蛋白3.5-7.5份、磷酸二氢钙0.4-0.6份、豆油2-3份、矿物质1-2份、添加料8.2-10.2份、水100-120份。
13.作为本发明进一步的方案：所述复合维生素由维生素a，维生素d，维生素c，维生素e，维生素k，维生素b1，维生素b2，维生素b6，维生素b12，烟酸，泛酸，叶酸，生物素按等质量比混合而成。
14.作为本发明进一步的方案：所述矿物质由硫酸铜、硫酸铁、硫酸锌、硫酸锰、亚硒酸钠、碘化钾、氯化钴按质量比1：10：8：5：0.2：0.2：0.1混合而得。
15.作为本发明进一步的方案：所述添加料由如下步骤制成：
16.步骤s1：将对氨基苯甲酸与去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜和dmf，在温度70℃下反应3h，制得对氨基苯甲酰氯；将2-羟基苯甲酸、对氨基苯甲酰氯以及四氢呋喃加入烧瓶中，然后加入三乙胺，在温度15-25℃下反应4-5h，制得中间物1；其中，对氨基苯甲酸、二氯亚砜、dmf的用量比为0.01mol：0.01mol：0.005ml；所述对氨基苯甲酰氯、2-羟基苯甲酸、四氢呋喃、乙二胺的用量比为0.1mol：0.12mol：100ml：0.11mol；
17.对氨基苯甲酸在二氯亚砜的作用下羧基被酰化转变为酰氯基团，得到了对氨基苯甲酰氯，利用对氨基苯甲酰氯为原料和2-羟基苯甲酸的羟基发生酯化反应，得到中间物1，反应过程如下：
[0018][0019]
步骤s2：将中间物1、丙酮加入烧瓶中，然后加入碳酸钾，回流30min，将1,2-二溴乙烷加入体系中，继续回流反应5h，制得中间物2；所述中间物1、丙酮、碳酸钾、1，2-二溴乙烷的用量比为0.01mol：100ml：17g：0.011mol；
[0020]
中间物1的氨基与1,2二溴丙烷一端的溴发生取代反应，生成中间物2；反应过程如下所示：
[0021][0022]
步骤s3：将中间物2，二甲胺盐酸盐，koh加入装有四氢呋喃的烧瓶中，搅拌后回流反应4-5h，制得中间物3；其中，中间物2、二甲胺盐酸盐、koh、四氢呋喃的用量比为0.02mol：0.1mol：7.4g：130ml；
[0023]
利用中间物2一端的溴与二甲胺发生取代反应，生产带有叔胺基团的中间物3，为下一步季铵化反应做准备，反应过程如下：
[0024][0025]
步骤s4：将中间物3加入装有乙腈的烧瓶中，然后加入1,3-丙磺酸内酯，加热回流反应24h，制得中间物4；所述中间物3、乙腈、1,3-丙磺酸内酯的用量比为0.006mol：20ml：0.006mol；
[0026]
1,3-丙磺酸内酯开环与中间物3的叔按基团发生季铵化反应生成具有带正电的季铵结构与带负电的磺酸结构的两性侧链的中间物4，反应过程如下：
[0027][0028]
步骤s5：将中间物4、去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜与dmf，在温度75℃下反应4h，制得吸附剂；其中，中间物4、二氯亚砜、dmf的用量比为0.1mol：0.12mol：0.05ml；
[0029]
中间物4的羧基在二氯亚砜的作用下发生酰化反应，转变为酰氯基，酰氯基具有很高的反应活性，可以很容易的与羟基、氨基等基团进行反应，吸附剂的分子结构式如下所示：
[0030][0031]
步骤s6：将壳聚糖加入质量分数为1％的醋酸溶液中，搅拌分散后，将吸附剂与dmf的混合溶液滴加进壳聚糖分散液中，然后加入三乙胺，在40℃下反应12h，冷冻干燥后制得添加料，其中壳聚糖、醋酸溶液、吸附剂与dmf的混合溶液的用量比为1g：100ml：50ml，所述吸附剂与dmf的混合溶液为吸附剂和dmf按用量比为0.05mol：100ml混合而得；
[0032]
吸附剂的酰氯基团与壳聚糖的氨基与羟基反应，结合到壳聚糖分子上，使其带有两性侧链，带正电的季铵基团可以吸附水中的带负电的微生物等物质，带正电的磺酸基，可以与水中产生的金属离子废物进行结合，保证整个孵化环境的健康，且该吸附剂带有苯环结构使壳聚糖在水中的溶解性得到降低，对废物进行吸附后，便于后续的处理，具有良好的环保性能。
[0033]
本发明提供了一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法，与现有技术相比具备以下有益效果：
[0034]
(1)本发明通过亲虾育种、催熟产卵亲虾、取卵、孵化等步骤进行育苗，在亲虾育种过程中进行消毒处理，且加入乙二胺四乙酸二钠保证水质的安全无毒，催熟后采用无毒的镊子取卵，再使用生理盐水清洗，全程保证安全无毒的进行，有效的提高抱卵率，在孵化过程使用孵化液，且使孵化液中的溶解氧保持在12-14mg/l，保证高密度育种的氧气充足，使每一颗虾卵都能有良好的氧气环境生长，有益于虾苗产率的提升。
[0035]
(2)本发明在进行虾卵孵化时制备了一种孵化液，孵化液中含有维生素、矿物质等营养元素，保证虾卵的发育，同时加入了一种添加料，该添加料以壳聚糖为基体，使之带有具有正电荷的季铵基团和具有负电荷的磺酸基，带正电荷的季铵基团可以与表面带有负电荷的微生物结合，起到结合杀灭有害微生物的作用，带负电荷的磺酸基则可以与孵化液中产生的金属离子废物结合，利用这种两性侧链双重保障虾卵孵化的环境良好，且壳聚糖本身也具有良好的吸附金属离子、有机废物的作用，进一步地对虾卵孵化的环境条件起到良好的保障作用。
具体实施方式
[0036]
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0037]
实施例1
[0038]
制备添加料
[0039]
步骤s1：将对氨基苯甲酸与去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜和dmf，在温度70℃下反应3h，制得对氨基苯甲酰氯；将2-羟基苯甲酸、对氨基苯甲酰氯以及四氢呋喃加入烧瓶中，然后加入三乙胺，在温度15℃下反应4h，制得中间物1；其中，对氨基苯甲酸、二氯亚砜、dmf的用量比为0.01mol：0.01mol：0.005ml；所述对氨基苯甲酰氯、2-羟基苯甲酸、四氢呋喃、乙二胺的用量比为0.1mol：0.12mol：100ml：0.11mol；
[0040]
步骤s2：将中间物1、丙酮加入烧瓶中，然后加入碳酸钾，回流30min，将1,2-二溴乙烷加入体系中，继续回流反应5h，制得中间物2；所述中间物1、丙酮、碳酸钾、1，2-二溴乙烷的用量比为0.01mol：100ml：17g：0.011mol；
[0041]
步骤s3：将中间物2，二甲胺盐酸盐，koh加入装有四氢呋喃的烧瓶中，搅拌后回流反应4h，制得中间物3；其中，中间物2、二甲胺盐酸盐、koh、四氢呋喃的用量比为0.02mol：0.1mol：7.4g：130ml；
[0042]
步骤s4：将中间物3加入装有乙腈的烧瓶中，然后加入1,3-丙磺酸内酯，加热回流反应24h，制得中间物4；所述中间物3、乙腈、1,3-丙磺酸内酯的用量比为0.006mol：20ml：0.006mol；
[0043]
步骤s5：将中间物4、去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜与dmf，在温度75℃下反应4h，制得吸附剂；其中，中间物4、二氯亚砜、dmf的用量比为0.1mol：0.12mol：0.05ml；
[0044]
步骤s6：将壳聚糖加入质量分数为1％的醋酸溶液中，搅拌分散后，将吸附剂与dmf的混合溶液滴加进壳聚糖分散液中，然后加入三乙胺，在40℃下反应12h，冷冻干燥后制得添加料，其中壳聚糖、醋酸溶液、吸附剂与dmf的混合溶液的用量比为1g：100ml：50ml，所述
吸附剂与dmf的混合溶液为吸附剂和dmf按用量比为0.05mol：100ml混合而得。
[0045]
实施例2
[0046]
制备添加料
[0047]
步骤s1：将对氨基苯甲酸与去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜和dmf，在温度70℃下反应3h，制得对氨基苯甲酰氯；将2-羟基苯甲酸、对氨基苯甲酰氯以及四氢呋喃加入烧瓶中，然后加入三乙胺，在温度20℃下反应4.5h，制得中间物1；其中，对氨基苯甲酸、二氯亚砜、dmf的用量比为0.01mol：0.01mol：0.005ml；所述对氨基苯甲酰氯、2-羟基苯甲酸、四氢呋喃、乙二胺的用量比为0.1mol：0.12mol：100ml：0.11mol；
[0048]
步骤s2：将中间物1、丙酮加入烧瓶中，然后加入碳酸钾，回流30min，将1,2-二溴乙烷加入体系中，继续回流反应5h，制得中间物2；所述中间物1、丙酮、碳酸钾、1，2-二溴乙烷的用量比为0.01mol：100ml：17g：0.011mol；
[0049]
步骤s3：将中间物2，二甲胺盐酸盐，koh加入装有四氢呋喃的烧瓶中，搅拌后回流反应4.5h，制得中间物3；其中，中间物2、二甲胺盐酸盐、koh、四氢呋喃的用量比为0.02mol：0.1mol：7.4g：130ml；
[0050]
步骤s4：将中间物3加入装有乙腈的烧瓶中，然后加入1,3-丙磺酸内酯，加热回流反应24h，制得中间物4；所述中间物3、乙腈、1,3-丙磺酸内酯的用量比为0.006mol：20ml：0.006mol；
[0051]
步骤s5：将中间物4、去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜与dmf，在温度75℃下反应4h，制得吸附剂；其中，中间物4、二氯亚砜、dmf的用量比为0.1mol：0.12mol：0.05ml；
[0052]
步骤s6：将壳聚糖加入质量分数为1％的醋酸溶液中，搅拌分散后，将吸附剂与dmf的混合溶液滴加进壳聚糖分散液中，然后加入三乙胺，在40℃下反应12h，冷冻干燥后制得添加料，其中壳聚糖、醋酸溶液、吸附剂与dmf的混合溶液的用量比为1g：100ml：50ml，所述吸附剂与dmf的混合溶液为吸附剂和dmf按用量比为0.05mol：100ml混合而得。
[0053]
实施例3
[0054]
制备添加料
[0055]
步骤s1：将对氨基苯甲酸与去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜和dmf，在温度70℃下反应3h，制得对氨基苯甲酰氯；将2-羟基苯甲酸、对氨基苯甲酰氯以及四氢呋喃加入烧瓶中，然后加入三乙胺，在温度25℃下反应5h，制得中间物1；其中，对氨基苯甲酸、二氯亚砜、dmf的用量比为0.01mol：0.01mol：0.005ml；所述对氨基苯甲酰氯、2-羟基苯甲酸、四氢呋喃、乙二胺的用量比为0.1mol：0.12mol：100ml：0.11mol；
[0056]
步骤s2：将中间物1、丙酮加入烧瓶中，然后加入碳酸钾，回流30min，将1,2-二溴乙烷加入体系中，继续回流反应5h，制得中间物2；所述中间物1、丙酮、碳酸钾、1，2-二溴乙烷的用量比为0.01mol：100ml：17g：0.011mol；
[0057]
步骤s3：将中间物2，二甲胺盐酸盐，koh加入装有四氢呋喃的烧瓶中，搅拌后回流反应5h，制得中间物3；其中，中间物2、二甲胺盐酸盐、koh、四氢呋喃的用量比为0.02mol：0.1mol：7.4g：130ml；
[0058]
步骤s4：将中间物3加入装有乙腈的烧瓶中，然后加入1,3-丙磺酸内酯，加热回流反应24h，制得中间物4；所述中间物3、乙腈、1,3-丙磺酸内酯的用量比为0.006mol：20ml：0.006mol；
[0059]
步骤s5：将中间物4、去离子水加入烧瓶中，然后加入二氯亚砜与dmf，在温度75℃下反应4h，制得吸附剂；其中，中间物4、二氯亚砜、dmf的用量比为0.1mol：0.12mol：0.05ml；
[0060]
步骤s6：将壳聚糖加入质量分数为1％的醋酸溶液中，搅拌分散后，将吸附剂与dmf的混合溶液滴加进壳聚糖分散液中，然后加入三乙胺，在40℃下反应12h，冷冻干燥后制得添加料，其中壳聚糖、醋酸溶液、吸附剂与dmf的混合溶液的用量比为1g：100ml：50ml，所述吸附剂与dmf的混合溶液为吸附剂和dmf按用量比为0.05mol：100ml混合而得。
[0061]
实施例4
[0062]
制备孵化液
[0063]
孵化液由如下重量份原料混合而成：复合维生素0.4份、葡萄糖8份、葡萄糖酸钙3.2份、水解蛋白3.5份、磷酸二氢钙0.4份、豆油2份、矿物质1份、实施例2制备的添加料8.2份、水100份。
[0064]
实施例5
[0065]
制备孵化液
[0066]
孵化液由如下重量份原料混合而成：复合维生素0.8份、葡萄糖12份、葡萄糖酸钙4.2份、水解蛋白5.5份、磷酸二氢钙0.5份、豆油2.5份、矿物质1.5份、实施例2制备的添加料9.2份、水110份。
[0067]
实施例6
[0068]
制备孵化液
[0069]
孵化液由如下重量份原料混合而成：复合维生素1.2份、葡萄糖16份、葡萄糖酸钙5.2份、水解蛋白7.5份、磷酸二氢钙0.6份、豆油3份、矿物质2份、实施例2制备的添加料10.2份、水120份。
[0070]
实施例4-6中复合维生素由维生素a，维生素d，维生素c，维生素e，维生素k，维生素b1，维生素b2，维生素b6，维生素b12，烟酸，泛酸，叶酸，生物素按等质量比混合而成，矿物质由硫酸铜、硫酸铁、硫酸锌、硫酸锰、亚硒酸钠、碘化钾、氯化钴按质量比1：10：8：5：0.2：0.2：0.1混合而得。
[0071]
实施例7
[0072]
一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法，具体包括如下步骤：
[0073]
步骤一：将亲虾按雌虾和雄虾按数量比为4：1加入消毒后的繁殖池中进行繁殖育种，并按用量3g/l加入乙二胺四乙酸二钠；
[0074]
步骤二：将产卵亲虾移入催熟池中，对产卵亲虾进行催熟，2天后，使用浓度为20ml/l的聚维酮碘对产卵亲虾进行浸泡2min，使用生理盐水清洗干净后移入产卵池，产卵后使用消毒后的镊子将虾卵从亲虾腹部分离，得到虾卵；
[0075]
步骤三：取出虾卵，使用生理盐水对虾卵进行浸泡清洗，然后将清洗后的虾卵加入装有实施例5制得的孵化液的孵化池中，孵化密度为1500粒/l，池内溶氧保持在12mg/l，孵化温度设置为25℃，孵化结束后得到虾苗。
[0076]
实施例8
[0077]
一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法，具体包括如下步骤：
[0078]
步骤一：将亲虾按雌虾和雄虾按数量比为4：1加入消毒后的繁殖池中进行繁殖育种，并按用量4g/l加入乙二胺四乙酸二钠；
[0079]
步骤二：将产卵亲虾移入催熟池中，对产卵亲虾进行催熟，2.5天后，使用浓度为25ml/l的聚维酮碘对产卵亲虾进行浸泡2.5min，使用生理盐水清洗干净后移入产卵池，产卵后使用消毒后的镊子将虾卵从亲虾腹部分离，得到虾卵；
[0080]
步骤三：取出虾卵，使用生理盐水对虾卵进行浸泡清洗，然后将清洗后的虾卵加入装有实施例5制得的孵化液的孵化池中，孵化密度为1550粒/l，池内溶氧保持在13mg/l，孵化温度设置为26℃，孵化结束后得到虾苗。
[0081]
实施例9
[0082]
一种环保型高密度红螯螯虾的繁殖育苗方法，具体包括如下步骤：
[0083]
步骤一：将亲虾按雌虾和雄虾按数量比为4：1加入消毒后的繁殖池中进行繁殖育种，并按用量5g/l加入乙二胺四乙酸二钠；
[0084]
步骤二：将产卵亲虾移入催熟池中，对产卵亲虾进行催熟，3天后，使用浓度为30ml/l的聚维酮碘对产卵亲虾进行浸泡3min，使用生理盐水清洗干净后移入产卵池，产卵后使用消毒后的镊子将虾卵从亲虾腹部分离，得到虾卵；
[0085]
步骤三：取出虾卵，使用生理盐水对虾卵进行浸泡清洗，然后将清洗后的虾卵加入装有实施例5制得的孵化液的孵化池中，孵化密度为1600粒/l，池内溶氧保持在14mg/l，孵化温度设置为27℃，孵化结束后得到虾苗。
[0086]
对比例1：与实施例8相比使用不添加添加料的孵化液。
[0087]
对比例2：与实施例8相比使用壳聚糖作为添加料的孵化液。
[0088]
对比例3：公开号为cn111543363a中实施例1的繁育方法。
[0089]
对实施例7-9和对比例1-3的繁育方法所得到的抱卵率和虾苗亩产量进行检测记录，得到结果如下表所示：
[0090]
项目抱卵率(％)虾苗亩产率(万尾)实施例784.37.1实施例884.67.2实施例984.57.1对比例184.76.1对比例284.66.4对比例376.46.3
[0091]
由上表可以看出实施例7-9的虾苗亩产率均显著的高于对比例1-3，实施例7-9和对比例1、对比例2的抱卵率相差不大，但都要高于对比例3。
[0092]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0093]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。