一种转基因平菇Pofst3+的栽培方法

一种转基因平菇pofst3
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的栽培方法
技术领域
1.本发明属于菌种栽培技术领域，具体涉及一种转基因平菇pofst3
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的栽培方法。


背景技术：

2.平菇是我国栽培分布最广泛的一种食用菌之一。目前我国平菇工厂化生产方法较少。平菇生产周期短，适于工厂化栽培，可以保证平菇市场日供应，产品质量和安全也比较有保障，是今后平菇栽培发展的主要方向。工厂化栽培，大部分关键技术参数处于保密状态，这在一定程度上，影响了平菇工厂化生产技术的进步。特别是生产模式、菌丝培养与催蕾环境条件、出菇环境条件等参数，与目前实验室及自然季节生产相差较大。菌种方面，也与工厂化金针菇、杏鲍菇、蟹味菇等主流工厂化生产品种差异很大。具有优良农艺性状的平菇品种是保证工厂化生产的关键环节之一，平菇pofst3
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是将平菇转录因子编码基因pofst3转化平菇后得到的转基因品系，实验室内研究显示比非转基因平菇具有现原基数量适中，出菇整齐度高的特点。
3.综上所述，现有技术存在的问题是：平菇工厂化栽培起步晚，适合于工厂化栽培的平菇品种函待选育，实验室及常规农法栽培技术中有关的培养料配方、配制工艺、菌袋制作、菌丝培养、催蕾工艺、出菇管理等均不适合平菇工厂化栽培，且生物学效率低，出菇整齐度差。
4.为解决上述问题，提供一种转基因平菇pofst3
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的栽培方法尤为重要。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种转基因平菇pofst3
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的栽培方法，该制备方法能够实现转基因平菇pofst3
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原基数量适宜，出菇整齐度高，可以满足平菇的工厂化生产中对平菇品种的要求。
6.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种转基因平菇pofst3
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的栽培方法，该方法包括以下步骤：
7.s1、配制菌种培养基，得到栽培种；
8.s2、配制培养料；
9.s3、装瓶：将s2中配制的培养料装进培养瓶中，所述培养瓶为1000ml～1200ml的聚乙烯塑料瓶，每瓶装培养料0.25kg～0.30kg；
10.s4、灭菌：装瓶后用高温高压灭菌器进行灭菌；
11.s5、菌丝培养：将s1中得到的栽培种装进灭菌后的培养瓶中，得到菌瓶；将所述菌瓶放到培养室中进行菌丝培养，培养室内的温度为20℃～22℃，空气相对湿度控制在60％～70％，黑暗条件下避光培养25天～28天；
12.s6、出菇期管理：去掉瓶盖，给予100lx～300lx的散射光照，保持空气新鲜，二氧化碳浓度低于0.06％，温度控制在16℃～20℃，空气相对湿度控制在85％～90％，持续8～10天后采收。
13.优选地，s1中所述配制菌种培养基：母种培养基为蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、mgso4·
7h2o 0.5g、kh2po40.46g、k2hpo41g、葡萄糖20g和琼脂粉20g，加去离子水1000ml，在温度为115℃的条件下灭菌30min；原种和栽培种均采用麦粒培养基，所述麦粒培养基为优质小麦98kg，蔗糖1kg和碳酸钙1kg。
14.优选地，s2中所述配制培养料以棉籽壳和玉米芯为主料，所述培养料组分重量为棉籽壳42％、玉米芯42％、麸皮10％、石灰2％和豆粕4％，所述培养料的含水量为60％～65％。
15.优选地，s6中所述采收是在一茬菇子实体菌盖长至3.5～4.5厘米时，及时采收，只采一茬菇。
16.本发明还提供所述的一种转基因平菇pofst3
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的栽培方法的应用，其特征在于，所述栽培方法用于工厂化栽培。
17.转基因平菇pofst3
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在基因库的登录号为kj716894。
18.本发明与现有技术相比具有以下优点：
19.本发明方法可用于工厂化栽培的转基因平菇pofst3
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，可以作为一种平菇种质资源战略储备；同时使用本发明的平菇的栽培方法，可以实现平菇的工厂化天天生产，且保证产品的安全。同时使得生物学效率大大提高，第一茬菇生物学效率达42％～66％。出菇整齐度好。
20.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
附图说明
21.图1是本发明栽培方法的流程图。
具体实施方式
22.实施例1
23.本实施例转基因平菇pofst3
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的栽培方法，包括以下步骤：
24.s1、配制菌种培养基，得到栽培种；所述配制菌种培养基：母种培养基为蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、mgso4·
7h2o 0.5g、kh2po40.46g、k2hpo41g、葡萄糖20g和琼脂粉20g，加去离子水1000ml，在温度为115℃的条件下灭菌30min；原种和栽培种均采用麦粒培养基为：优质小麦98kg，蔗糖1kg，碳酸钙1kg；
25.母种制作过程：将制备好的母种培养基分装试管斜面，母种培养基凝固后，取出低温冰箱里保存的转基因平菇pofst3
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菌株，接种试管后置于培养箱内，在黑暗、温度为22℃～24℃的条件下培养两周；
26.原种和栽培种制作过程：将麦粒用水浸泡4小时后，煮沸20～30分钟，煮的过程加入蔗糖，麦粒熟而不开花时，滤去水分，在通风处摊开晾30分钟，以麦粒表皮不湿为宜，然后加石膏石灰搅拌均匀装瓶；用高压灭菌锅在0.14～0.5兆帕压力下灭菌1.5～2小时，制备好麦粒培养基；取下母种试管塞，用接种钩将母种斜面培养基横割成5～6块，然后钩取1块，然后取下原种瓶棉塞，将小块母种接入原种瓶，每瓶1块，要紧贴接种穴；将接种后的原种移入培养室，在温度为22～24℃的条件下避光进行培养30天；用原种扩接栽培种和用母种扩接原种的方法相同，只是取原种时挖取十几粒麦粒种；
27.s2、配制培养料：以棉籽壳和玉米芯为主料，所述培养料组分重量为棉籽壳42％、玉米芯42％、麸皮10％、石灰2％和豆粕4％，各种原料混合均匀后添加水至含水量为60％；
28.s3、装瓶：将s2中得到的培养料装进培养瓶中，所述培养瓶为1000ml的聚乙烯塑料瓶，每瓶装培养料0.25kg；
29.s4、灭菌：用高温高压灭菌器进行灭菌；灭菌为压力升至103.4kpa(1.05kg/cm2)，温度达121.3℃，维持时间为20分钟；
30.s5、菌丝培养：将s1中得到的栽培种装进灭菌后的培养瓶中，得到菌瓶；将所述菌瓶放到培养室中进行菌丝培养，培养室内的温度为20℃，空气相对湿度控制在70％，黑暗条件下避光培养25天；
31.s6、出菇期管理：去掉瓶盖，给予100lx的散射光照，保持空气新鲜，二氧化碳浓度低于0.06％，温度控制在16℃，空气相对湿度控制在90％，持续8天后采收，采收是在一茬菇子实体菌盖长至3.5～4.5厘米时，及时采收，只采一茬菇。
32.实施例2
33.本实施例转基因平菇pofst3
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的栽培方法，包括以下步骤：
34.s1、配制菌种培养基，得到栽培种；所述配制菌种培养基：母种培养基为蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、mgso4·
7h2o 0.5g、kh2po40.46g、k2hpo41g、葡萄糖20g和琼脂粉20g，加去离子水1000ml，在温度为115℃的条件下灭菌30min；原种和栽培种均采用麦粒培养基为：优质小麦98kg，蔗糖1kg，碳酸钙1kg；
35.母种制作过程：将制备好的母种培养基分装试管斜面，母种培养基凝固后，取出低温冰箱里保存的转基因平菇pofst3
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菌株，接种试管后置于培养箱内，在黑暗、温度为22℃的条件下培养两周；
36.原种和栽培种制作过程：将麦粒用水浸泡4小时后，煮沸20分钟，煮的过程加入蔗糖，麦粒熟而不开花时，滤去水分，在通风处摊开晾30分钟，以麦粒表皮不湿为宜，然后加石膏石灰搅拌均匀装瓶；用高压灭菌锅在0.14兆帕压力下灭菌2小时，制备好麦粒培养基；取下母种试管塞，用接种钩将母种斜面培养基横割成5块，然后钩取1块，然后取下原种瓶棉塞，将小块母种接入原种瓶，每瓶1块，要紧贴接种穴；将接种后的原种移入培养室，在温度为22℃的条件下避光进行培养30天；用原种扩接栽培种和用母种扩接原种的方法相同，只是取原种时挖取十几粒麦粒种；
37.s2、配制培养料：以棉籽壳和玉米芯为主料，所述培养料组分重量为棉籽壳42％、玉米芯42％、麸皮10％、石灰2％和豆粕4％，各种原料混合均匀后添加水至含水量为60％～65％；
38.s3、装瓶：将s2中得到的培养料装进培养瓶中，所述培养瓶为1200ml的聚乙烯塑料瓶，每瓶装培养料0.30kg；
39.s4、灭菌：用高温高压灭菌器进行灭菌；灭菌为压力升至103.4kpa(1.05kg/cm2)，温度达121.3℃，维持时间为20分钟；
40.s5、菌丝培养：将s1中得到的栽培种装进灭菌后的培养瓶中，得到菌瓶；将所述菌瓶放到培养室中进行菌丝培养，培养室内的温度为22℃，空气相对湿度控制在60％，黑暗条件下避光培养28天；
41.s6、出菇期管理：去掉瓶盖，给予100lx～300lx的散射光照，保持空气新鲜，二氧化
碳浓度低于0.06％，温度控制在20℃，空气相对湿度控制在85％，持续10天后采收，采收是在一茬菇子实体菌盖长至3.5～4.5厘米时，及时采收，只采一茬菇。
42.实施例3
43.本实施例转基因平菇pofst3
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的栽培方法，包括以下步骤：
44.s1、配制菌种培养基，得到栽培种；所述配制菌种培养基：母种培养基为蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、mgso4·
7h2o 0.5g、kh2po40.46g、k2hpo41g、葡萄糖20g和琼脂粉20g，加去离子水1000ml，在温度为115℃的条件下灭菌30min；原种和栽培种均采用麦粒培养基为：优质小麦98kg，蔗糖1kg，碳酸钙1kg；
45.母种制作过程：将制备好的母种培养基分装试管斜面，母种培养基凝固后，取出低温冰箱里保存的转基因平菇pofst3
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菌株，接种试管后置于培养箱内，在黑暗、温度为24℃的条件下培养两周；
46.原种和栽培种制作过程：将麦粒用水浸泡4小时后，煮沸30分钟，煮的过程加入蔗糖，麦粒熟而不开花时，滤去水分，在通风处摊开晾30分钟，以麦粒表皮不湿为宜，然后加石膏石灰搅拌均匀装瓶；用高压灭菌锅在0.5兆帕压力下灭菌1.5小时，制备好麦粒培养基；取下母种试管塞，用接种钩将母种斜面培养基横割成6块，然后钩取1块，然后取下原种瓶棉塞，将小块母种接入原种瓶，每瓶1块，要紧贴接种穴；将接种后的原种移入培养室，在温度为24℃的条件下避光进行培养30天；用原种扩接栽培种和用母种扩接原种的方法相同，只是取原种时挖取十几粒麦粒种；
47.s2、配制培养料：以棉籽壳和玉米芯为主料，所述培养料组分重量为棉籽壳42％、玉米芯42％、麸皮10％、石灰2％和豆粕4％，各种原料混合均匀后添加水至含水量为60％～65％；
48.s3、装瓶：将s2中得到的培养料装进培养瓶中，所述培养瓶为1100ml的聚乙烯塑料瓶，每瓶装培养料0.27kg；
49.s4、灭菌：用高温高压灭菌器进行灭菌；灭菌为压力升至103.4kpa(1.05kg/cm2)，温度达121.3℃，维持时间为20分钟；
50.s5、菌丝培养：将s1中得到的栽培种装进灭菌后的培养瓶中，得到菌瓶；将所述菌瓶放到培养室中进行菌丝培养，培养室内的温度为21℃，空气相对湿度控制在65％，黑暗条件下避光培养26天；
51.s6、出菇期管理：去掉瓶盖，给予200lx的散射光照，保持空气新鲜，二氧化碳浓度低于0.06％，温度控制在18℃，空气相对湿度控制在87％，持续9天后采收，采收是在一茬菇子实体菌盖长至3.5～4.5厘米时，及时采收，只采一茬菇。
52.以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。