一种息半夏组培苗的快繁方法和培养基与流程

1.本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种息半夏组培苗的快繁 方法和培养基。


背景技术：

2.息半夏为天南星科(araceae)半夏属(pinellia)多年生草本植物，为 一种常用的大宗中药材。作为传统中药材，半夏以块茎入药，因其块茎中含 有多种有效化学成分，诸如：生物碱、次黄嘌呤、氨基酸、β-谷甾醇-葡糖糖 苷、鞣质、半夏蛋白、草酸钙等等，具备燥湿化痰、抗衰老、温养胃部、抑 制肿瘤发生、缓解疼痛、乃至预防早孕的效果，它的主要适应症包括呕吐、 咳喘、心律失常等。在人工种植方面，半夏在高密度的种植过程中，会使一 些病毒在体内积累，以至于影响半夏的质量。此外，半夏在种植管理中需要 一定的技术含量，在种植过程中投资大，但是大部分药农不懂得恰当合理的 种植技术；在半夏幼苗成长时期，有一种块茎腐烂病，农田发生这种病的几 率很高，但是截止到目前还没有有效的治疗方法，只能靠人工预防；如果半 夏出现这种病，会造成严重的减产，甚至导致绝产。
3.目前，植物组织培养技术应用于多方面的领域。在园艺方面，可将植物 的茎尖、幼芽等作为外植体，使其分化诱导成芽、生根成苗，提高植物的繁 殖速度，促进植物规模化生长。在物种保护方面，用组培技术，可对濒临灭 绝的植物进行大量繁殖，使其物种能够延续下来。目前，人们试图用组织培 养技术来实现息半夏的快繁，但目前有关息半夏组织培养中试管苗的成活率 和成苗率比较低。因此，如何对息半夏的组织培养方式进行优化和改进以提 高息半夏组培苗的品质及移栽成活率，成为当前研究的关键问题。


技术实现要素：

4.为克服现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供了一种息半夏组培苗的 快繁方法和培养基，以提高息半夏成活率并实现息半夏的大规模生产，满足 人们日益增长的需求。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
6.本发明提供了一种息半夏组培苗的胚性愈伤组织形成培养基，所述胚性 愈伤组织形成培养基以ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分： 6-ba 1～3mg/l，naa 1.8～2.2mg/l，活性炭1.5～2g/l，琼脂5～6g/l和蔗糖 20～25g/l，所述胚性愈伤组织形成培养基的ph为5.8～6.4。
7.本发明还提供了一种息半夏组培苗的胚性愈伤组织增殖培养基，所述胚 性愈伤组织增殖培养基以ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分： 6-ba 2～4mg/l，naa 0.5～1mg/l，iaa 0.05～0.1mg/l，琼脂5～6g/l和蔗糖 20～25g/l，所述胚性愈伤组织增殖培养基的ph为5.8～6.4。
8.本发明还提供了一种息半夏组培苗的胚性愈伤组织分化培养基，所述胚 性愈伤组织分化培养基以ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分： 6-ba2～2.5mg/l，
naa0.1～0.5mg/l，2,4-d 1～1.5mg/l，甘氨酸0.04～0.06wt％， 琼脂5～6g/l和蔗糖20～25g/l，所述胚性愈伤组织分化培养基的ph为 5.8～6.4。
9.本发明还提供了一种息半夏组培苗的生根培养基，所述生根培养基以 ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：naa 0.4～0.6mg/l，iba 1～1.5mg/l，琼脂5～6g/l和蔗糖20～25g/l，所述生根培养基的ph为5.8～6.4。
10.本发明还提供了一种息半夏组培苗快繁的培养基组合，包括胚性愈伤组 织形成培养基、胚性愈伤组织增殖培养基、胚性愈伤组织分化培养基和生根 培养基。
11.本发明还提供了一种息半夏组培苗的快繁方法，包括如下步骤：
12.(1)将去除叶边缘的息半夏叶片切成0.3～0.5cm2的正方形小块，接种 于胚性愈伤组织形成培养基中暗培养20～25d，得息半夏胚性愈伤组织；
13.(2)将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织增殖培养基 中培养8～12d，得大量息半夏胚性愈伤组织；
14.(3)将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织分化培 养基中培养10～15d，得息半夏再生苗；
15.(4)将上述所得息半夏再生苗接种于生根培养基中培养15～20d，得息 半夏完整再生苗；
16.(5)对上述所得息半夏完整再生苗进行通风炼苗，得息半夏移栽苗；
17.(6)将上述所得息半夏移栽苗移入育苗基质中进行育苗培养，得息半 夏组培苗。
18.优选的，在步骤(1)之前还包括对息半夏叶片依次进行第一水洗、酒 精浸泡、第二水洗、升汞浸泡和第三水洗的步骤，所述酒精浸泡过程中酒精 的浓度为70～80vt％，所述酒精浸泡的时间为30～45s，所述升汞浸泡过程中 升汞的浓度为0.05～0.15vt％，所述升汞浸泡的时间为10～15min，所述第一水 洗、第二水洗和第三水洗的次数独立为2～4次，所述第一水洗、第二水洗和 第三水洗的时间独立为1～3min/次。
19.优选的，步骤(1)中所述暗培养的温度为20～30℃；
20.步骤(2)～步骤(4)中所述培养的温度独立为26～28℃，所述培养的 光照强度独立为2000～3000lx，所述培养的光照周期独立为17～19h/d。
21.优选的，步骤(5)中所述通风炼苗的温度为25～27℃，所述通风炼苗的 时间为5～7d。
22.优选的，步骤(6)中所述育苗基质包括草炭土、蛭石和细砂，所述草 炭土、蛭石和细砂的质量比为2～4:1～3:1～3；
23.所述育苗培养的光照强度为1500～2500lx，所述育苗培养的光照周期为 17～19h/d，所述育苗培养的温度为20～25℃，所述育苗培养的时间为13～15d。
24.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
25.本发明以去除叶边缘的息半夏叶片为外植体，依次对其进行胚性愈伤组 织诱导、胚性愈伤组织增殖、胚性愈伤组织分化及生根培养得到息半夏组培 苗。通过本发明方法获得的息半夏组培苗品质好，褐化现象少，且组培苗移 栽成活高，最高可达98％。本发明方法污染率低、生产效率高，保证了息半 夏原种的特性，为息半夏的大规模工业化生产提供了技术基础，也为其基因 工程改良和分子育种奠定了材料和技术基础。
附图说明
26.图1为本发明息半夏的胚性愈伤组织；
27.图2为本发明息半夏胚性愈伤增殖状态；
28.图3为本发明息半夏胚性愈伤分化出小芽；
29.图4为本发明息半夏芽生长14d的状态；
30.图5为本发明息半夏生根10d的状态；
31.图6为本发明息半夏移栽苗；
32.图7为本发明息半夏组培苗。
具体实施方式
33.本发明提供了一种息半夏组培苗的胚性愈伤组织形成培养基，所述胚性 愈伤组织形成培养基以ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分： 6-ba 1～3mg/l，naa 1.8～2.2mg/l，活性炭1.5～2g/l，琼脂5～6g/l和蔗糖 20～25g/l，所述胚性愈伤组织形成培养基的ph为5.8～6.4。
34.在本发明中，所述息半夏组培苗的胚性愈伤组织形成培养基中6-ba的 浓度为1～3mg/l，进一步优选为1.5～2.5mg/l，更进一步优选为2mg/l；naa 的浓度为1.8～2.2mg/l，进一步优选为1.9～2.2mg/l，更进一步优选为2.1mg/l； 活性炭的浓度为1.5～2g/l，进一步优选为1.6～1.8g/l，更进一步优选为1.7g/l； 琼脂的浓度为5～6g/l，进一步优选为5.2～5.8g/l，更进一步优选为5.5g/l； 蔗糖的浓度为20～25g/l，进一步优选为22～24g/l，更进一步优选为23g/l； 所述胚性愈伤组织形成培养基的ph为5.8～6.4，进一步优选为6.1。
35.本发明还提供了一种息半夏组培苗的胚性愈伤组织增殖培养基，所述胚 性愈伤组织增殖培养基以ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分： 6-ba 2～4mg/l，naa 0.5～1mg/l，iaa 0.05～0.1mg/l，琼脂5～6g/l和蔗糖 20～25g/l，所述胚性愈伤组织增殖培养基的ph为5.8～6.4。
36.在本发明中，所述息半夏组培苗的胚性愈伤组织增殖培养基中6-ba的 浓度为2～4mg/l，进一步优选为2.5～3.5mg/l，更进一步优选为3mg/l；naa 的浓度为0.5～1mg/l，进一步优选为0.6～0.8mg/l，更进一步优选为0.7mg/l； iaa的浓度为0.05～0.1mg/l，进一步优选为0.07～0.09mg/l，更进一步优选 为0.08mg/l；琼脂的浓度为5～6g/l，进一步优选为5.2～5.8g/l，更进一步优 选为5.5g/l；蔗糖的浓度为20～25g/l，进一步优选为22～24g/l，更进一步优 选为23g/l；所述胚性愈伤组织增殖培养基的ph为5.8～6.4，进一步优选为 6.1。
37.本发明还提供了一种息半夏组培苗的胚性愈伤组织分化培养基，所述胚 性愈伤组织分化培养基以ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分： 6-ba2～2.5mg/l，naa0.1～0.5mg/l，2,4-d 1～1.5mg/l，甘氨酸0.04～0.06wt％， 琼脂5～6g/l和蔗糖20～25g/l，所述胚性愈伤组织分化培养基的ph为 5.8～6.4。
38.在本发明中，所述息半夏组培苗的胚性愈伤组织分化培养基中6-ba的 浓度为2～2.5mg/l，进一步优选为2.1～2.3mg/l，更进一步优选为2.2mg/l； naa的浓度为0.1～0.5mg/l，进一步优选为0.2～0.4mg/l，更进一步优选为 0.3mg/l；2,4-d的浓度为1～1.5mg/l，进一步优选为1.1～1.3mg/l，更进一步 优选为1.2mg/l；甘氨酸的浓度为0.04～
0.06wt％，进一步优选为 0.045～0.055wt％，更进一步优选为0.05wt％；琼脂的浓度为5～6g/l，进一步 优选为5.2～5.8g/l，更进一步优选为5.5g/l；蔗糖的浓度为20～25g/l，进一 步优选为22～24g/l，更进一步优选为23g/l；所述胚性愈伤组织分化培养基 的ph为5.8～6.4，进一步优选为6.1。
39.本发明还提供了一种息半夏组培苗的生根培养基，所述生根培养基以 ms培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：naa 0.4～0.6mg/l，iba 1～1.5mg/l，琼脂5～6g/l和蔗糖20～25g/l，所述生根培养基的ph为5.8～6.4。
40.在本发明中，所述息半夏组培苗的生根培养基中naa的浓度为 0.4～0.6mg/l，进一步优选为0.45～0.55mg/l，更进一步优选为0.5mg/l；iba 的浓度为1～1.5mg/l，进一步优选为1.2～1.4mg/l，更进一步优选为1.3mg/l； 琼脂的浓度为5～6g/l，进一步优选为5.2～5.8g/l，更进一步优选为5.5g/l； 蔗糖的浓度为20～25g/l，进一步优选为22～24g/l，更进一步优选为23g/l； 所述生根培养基的ph为5.8～6.4，进一步优选为6.1。
41.本发明还提供了一种息半夏组培苗快繁的培养基组合，包括胚性愈伤组 织形成培养基、胚性愈伤组织增殖培养基、胚性愈伤组织分化培养基和生根 培养基。
42.本发明还提供了一种息半夏组培苗的快繁方法，包括如下步骤：
43.(1)将去除叶边缘的息半夏叶片切成0.3～0.5cm2的正方形小块，接种 于胚性愈伤组织形成培养基中暗培养20～25d，得息半夏胚性愈伤组织；
44.(2)将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织增殖培养基 中培养8～12d，得大量息半夏胚性愈伤组织；
45.(3)将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织分化培 养基中培养10～15d，得息半夏再生苗；
46.(4)将上述所得息半夏再生苗接种于生根培养基中培养15～20d，得息 半夏完整再生苗；
47.(5)对上述所得息半夏完整再生苗进行通风炼苗，得息半夏移栽苗；
48.(6)将上述所得息半夏移栽苗移入育苗基质中进行育苗培养，得息半 夏组培苗。
49.在本发明中，在步骤(1)之前还优选包括对息半夏叶片依次进行第一 水洗、酒精浸泡、第二水洗、升汞浸泡和第三水洗的步骤，所述酒精浸泡过 程中酒精的浓度优选为70～80vt％，进一步优选为72～78vt％，更进一步优选 为75vt％；所述酒精浸泡的时间优选为30～45s，进一步优选为35～40s，更进 一步优选为38s；所述升汞浸泡过程中升汞的浓度优选为0.05～0.15vt％，进 一步优选为0.08～0.12vt％，更进一步优选为0.1vt％；所述升汞浸泡的时间优 选为10～15min，进一步优选为12～14min，更进一步优选为13min；所述第 一水洗、第二水洗和第三水洗的次数独立优选为2～4次，进一步优选为3次； 所述第一水洗、第二水洗和第三水洗的时间独立优选为1～3min/次，进一步 优选为1.5～2.5min/次，更进一步优选为2min/次。采用上述步骤对息半夏叶 片进行消毒，可消灭附着在叶片表面的各种病菌，保证无菌组织培养的顺利 进行。
50.在本发明中，步骤(1)中所述将去除叶边缘的息半夏叶片切成0.3～0.5cm2的正方形小块，接种于胚性愈伤组织形成培养基中暗培养20～25d，得息半夏 胚性愈伤组织，进一步优选为将去除叶边缘的息半夏叶片切成0.4cm2的正方 形小块，接种于胚性愈伤组织形成培养基中暗培养22d，得息半夏胚性愈伤 组织。
51.在本发明中，步骤(1)中所述暗培养的温度优选为20～30℃，进一步优 选为22～28℃，更进一步优选为25℃。
52.在本发明中，步骤(2)中所述将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于 胚性愈伤组织增殖培养基中培养8～12d，得大量息半夏胚性愈伤组织，进一 步优选为将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织增殖培养基 中培养9d，得大量息半夏胚性愈伤组织。
53.在本发明中，步骤(3)中所述将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接 种于胚性愈伤组织分化培养基中培养10～15d，得息半夏再生苗，进一步优选 为将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织分化培养基中 培养12d，得息半夏再生苗。
54.在本发明中，步骤(4)中所述将上述所得息半夏再生苗接种于生根培 养基中培养15～20d，得息半夏完整再生苗，进一步优选为将上述所得息半夏 再生苗接种于生根培养基中培养16d，得息半夏完整再生苗。
55.在本发明中，步骤(2)～步骤(4)中所述培养的温度独立优选为26～28℃， 进一步优选为27℃；所述培养的光照强度独立优选为2000～3000lx，进一步 优选为2200～2800lx，更进一步优选为2500lx；所述培养的光照周期独立优 选为17～19h/d，进一步优选为18h/d。
56.在本发明中，步骤(5)中所述通风炼苗的温度优选为25～27℃，进一步 优选为26℃；所述通风炼苗的时间优选为5～7d，进一步优选为6d。
57.在本发明中，步骤(6)中所述育苗基质优选包括草炭土、蛭石和细砂， 所述草炭土、蛭石和细砂的质量比优选为2～4:1～3:1～3，进一步优选为3:2:2。
58.在本发明中，步骤(6)中所述育苗培养的光照强度优选为1500～2500lx， 进一步优选为1800～2200lx，更进一步优选为2000lx；所述育苗培养的光照 周期优选为17～19h/d，进一步优选为18h/d；所述育苗培养的温度优选为 20～25℃，进一步优选为22～24℃，更进一步优选为23℃；所述育苗培养的 时间优选为13～15d，进一步优选为14d。
59.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把 它们理解为对本发明保护范围的限定。
60.以下实施例和对比例中所用的息半夏的种植地为河南省信阳市息县。
61.实施例1
62.(1)将息半夏叶片先用无菌水冲洗2次，每次冲洗1min，然后用70vt％ 的酒精浸泡30s，酒精浸泡完成后用无菌水冲洗2次，每次冲洗1min，再用 0.05vt％的升汞浸泡10min，升汞浸泡完成后用无菌水冲洗2次，每次冲洗 1min。
63.(2)将上述处理完成的息半夏叶片去除叶边缘后切成0.3cm2的正方形 小块，接种于胚性愈伤组织形成培养基中(ms+6-ba 1mg/l+naa 1.8mg/l+ 活性炭1.5g/l+琼脂5g/l+蔗糖20g/l，所述胚性愈伤组织形成培养基的ph 为5.8)于20℃的条件下暗培养20d，得息半夏胚性愈伤组织；
64.(3)将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织增殖培养基 中(ms+6-ba2mg/l+naa0.5mg/l+iaa 0.05mg/l+琼脂5g/l+蔗糖20g/l， 所述胚性愈伤组织增殖培养基的ph为5.8)于温度为26℃，光照强度为 2000lx，光照周期为17h/d的条件下培养8d，得大量息半夏胚性愈伤组织；
65.(4)将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织分化培 养基中(ms
+6-ba2mg/l+naa 0.1mg/l+2,4-d 1mg/l+甘氨酸0.04wt％+琼脂 5g/l+蔗糖20g/l，所述胚性愈伤组织分化培养基的ph为5.8)于温度为26℃， 光照强度为2000lx，光照周期为17h/d的条件下培养10d，得息半夏再生苗；
66.(5)将上述所得息半夏再生苗接种于生根培养基中(ms+naa 0.4mg/l+iba 1mg/l+琼脂5g/l+蔗糖20g/l，所述生根培养基的ph为5.8) 于温度为26℃，光照强度为2000lx，光照周期为17h/d的条件下培养15d， 得息半夏完整再生苗；
67.(6)将上述所得息半夏完整再生苗于25℃的条件下通风炼苗5d，得息 半夏移栽苗；
68.(7)将上述所得息半夏移栽苗移入育苗基质中(草炭土:蛭石:细砂 ＝2:1:1)于光照强度为1500lx，光照周期为17h/d，温度为20℃的条件下进 行育苗培养13d，得息半夏组培苗。
69.实施例2
70.(1)将息半夏叶片先用无菌水冲洗3次，每次冲洗2min，然后用75vt％ 的酒精浸泡38s，酒精浸泡完成后用无菌水冲洗3次，每次冲洗2min，再用 0.1vt％的升汞浸泡13min，升汞浸泡完成后用无菌水冲洗3次，每次冲洗2min。
71.(2)将上述处理完成的息半夏叶片去除叶边缘后切成0.4cm2的正方形 小块，接种于胚性愈伤组织形成培养基中(ms+6-ba2mg/l+naa2.1mg/l+ 活性炭1.7g/l+琼脂5.5g/l+蔗糖23g/l，所述胚性愈伤组织形成培养基的ph 为6.1)于25℃的条件下暗培养22d，得息半夏胚性愈伤组织；
72.(3)将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织增殖培养基 中(ms+6-ba 3mg/l+naa 0.7mg/l+iaa 0.08mg/l+琼脂5.5g/l+蔗糖23g/l， 所述胚性愈伤组织增殖培养基的ph为6.1)于温度为27℃，光照强度为 2500lx，光照周期为18h/d的条件下培养9d，得大量息半夏胚性愈伤组织；
73.(4)将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织分化培 养基中(ms+6-ba2.2mg/l+naa 0.3mg/l+2,4-d 1.2mg/l+甘氨酸0.05wt％+ 琼脂5.5g/l+蔗糖23g/l，所述胚性愈伤组织分化培养基的ph为6.1)于温 度为27℃，光照强度为2500lx，光照周期为18h/d的条件下培养12d，得息 半夏再生苗；
74.(5)将上述所得息半夏再生苗接种于生根培养基中(ms+naa 0.5mg/l+iba 1.3mg/l+琼脂5.5g/l+蔗糖23g/l，所述生根培养基的ph为6.1) 于温度为27℃，光照强度为2500lx，光照周期为18h/d的条件下培养16d， 得息半夏完整再生苗；
75.(6)将上述所得息半夏完整再生苗于26℃的条件下通风炼苗6d，得息 半夏移栽苗；
76.(7)将上述所得息半夏移栽苗移入育苗基质中(草炭土:蛭石:细砂 ＝3:2:2)于光照强度为2000lx，光照周期为18h/d，温度为23℃的条件下进 行育苗培养14d，得息半夏组培苗。
77.实施例3
78.(1)将息半夏叶片先用无菌水冲洗4次，每次冲洗3min，然后用80vt％ 的酒精浸泡45s，酒精浸泡完成后用无菌水冲洗4次，每次冲洗3min，再用 0.15vt％的升汞浸泡15min，升汞浸泡完成后用无菌水冲洗4次，每次冲洗 3min。
79.(2)将上述处理完成的息半夏叶片去除叶边缘后切成0.5cm2的正方形 小块，接种于胚性愈伤组织形成培养基中(ms+6-ba 3mg/l+naa2.2mg/l+ 活性炭2g/l+琼脂6g/l+蔗糖25g/l，所述胚性愈伤组织形成培养基的ph为 6.4)于30℃的条件下暗培养25d，得息半夏胚性愈伤组织；
80.(3)将上述所得息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织增殖培养基 中(ms+6-ba 4mg/l+naa1mg/l+iaa 0.1mg/l+琼脂6g/l+蔗糖25g/l，所 述胚性愈伤组织增殖培养基的ph为6.4)于温度为28℃，光照强度为3000lx， 光照周期为19h/d的条件下培养12d，得大量息半夏胚性愈伤组织；
81.(4)将上述所得大量息半夏胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织分化培 养基中(ms+6-ba2.5mg/l+naa 0.5mg/l+2,4-d 1.5mg/l+甘氨酸0.06wt％+ 琼脂6g/l+蔗糖25g/l，所述胚性愈伤组织分化培养基的ph为6.4)于温度 为28℃，光照强度为3000lx，光照周期为19h/d的条件下培养15d，得息半 夏再生苗；
82.(5)将上述所得息半夏再生苗接种于生根培养基中(ms+naa 0.6mg/l+iba 1.5mg/l+琼脂6g/l+蔗糖25g/l，所述生根培养基的ph为6.4) 于温度为28℃，光照强度为3000lx，光照周期为19h/d的条件下培养20d， 得息半夏完整再生苗；
83.(6)将上述所得息半夏完整再生苗于27℃的条件下通风炼苗7d，得息 半夏移栽苗；
84.(7)将上述所得息半夏移栽苗移入育苗基质中(草炭土:蛭石:细砂 ＝4:3:3)于光照强度为2500lx，光照周期为19h/d，温度为25℃的条件下进 行育苗培养15d，得息半夏组培苗。
85.对比例1
86.(1)将息半夏叶片先用无菌水冲洗1次，每次冲洗4min，然后用75vt％ 的酒精浸泡20s，酒精浸泡完成后用无菌水冲洗1次，每次冲洗4min，再用 0.1vt％的升汞浸泡8min，升汞浸泡完成后用无菌水冲洗1次，每次冲洗4min。
87.(2)将上述处理完成的息半夏叶片直接切成0.4cm2的正方形小块，接 种于息半夏组培快繁培养基中(ms+6-ba 2mg/l+naa 1.5mg/l+琼脂8g/l+ 白糖30g/l，培养基的ph为5.8)于20℃的条件下暗培养18d，得息半夏胚 性愈伤组织；
88.(3)将上述所得息半夏胚性愈伤组织再次接种于息半夏组培快繁培养 基中(ms+6-ba2mg/l+naa 1.5mg/l+琼脂8g/l+白糖30g/l，培养基的ph 为5.8)于温度为20℃，光照强度为3000lx，光照周期为16h/d的条件下培 养10d，得大量息半夏胚性愈伤组织，之后继续将大量息半夏胚性愈伤组织 在同一培养条件下转接于息半夏组培快繁培养基中(ms+6-ba2mg/l+naa 1.5mg/l+琼脂8g/l+白糖30g/l，培养基的ph为5.8)进行培养，每隔15d 转接一次，连续转接3次，得息半夏组培苗。
89.实验例1
90.以本发明实施例1～3为实验组，对比例1为对照组，研究不同处理对息 半夏组培苗的影响，其中，褐化率(％)＝(褐变的外植体总数/接种的外植 体总数)
×
100％，结果如表1和表2所示。
91.表1不同处理对息半夏组培苗褐化现象的影响
92.处理接种的外植体总数/个褐变的外植体总数/个褐化率％
实施例16058.3实施例26035实施例36046.7对比例1601931.7
93.表2不同处理对息半夏组培苗移栽成活率的影响
94.处理移栽成活率％实施例195实施例298实施例393对比例178
95.由表1和表2可知，与对比例1相比，本发明实施例1～3所得的息半夏 组培苗的品质更优，褐化率明显更低，且组培苗移栽成活高，最高可达98％。
96.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普 通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润 饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。