一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法与流程

1.本发明属于水蛭养殖技术领域，具体涉及一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法。


背景技术：

2.水蛭用于治病，在国内外都有相当悠久的历史。在我国水蛭作为一种传统中药，始载于《神农本草经》，谓其能“逐恶血、淤血”，破“血瘕积聚”，是目前《中国药典》唯一收录的以动物血液为食物来源的水蛭药材种类。近年来随着对水蛭临床研究的不断深入，水蛭还具有抗血栓、抗炎症、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化等作用，尤其在治疗严重威胁人类健康的心脑血管疾病和癌症等疾病方面，显示出巨大的优越性和广阔的前景，因此水蛭养殖拥有良好的市场前景和经济效益。
3.由于大量农药和消毒剂的使用加上人为的肆意抓捕，水蛭野生资源遭到严重破坏，根本不能满足市场日益高涨的需求。虽然水蛭的人工养殖在一定程度上缓解了水蛭的供需矛盾，但传统的养殖方法和养殖模式普遍存在成活率低的问题，同时人工养殖条件下水蛭抗凝血酶活性较野生水蛭偏低，在制药过程中利用价值降低甚至不能使用。水蛭在投喂过程中产生的血水还会对当地环境造成一定的污染。这些问题严重阻碍了水蛭的大规模养殖，不能从根本上解决国内外市场对水蛭需求的供需矛盾。


技术实现要素：

4.为解决现有水蛭人工养殖下抗凝血酶活性较野生水蛭严重偏低的问题，本发明提出一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法。
5.本发明一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
6.s1、设置网箱；
7.s2、投放种苗；
8.s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
9.s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按5-10：2-5的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；
10.s5、控制光照强度：每天8-20点控制环境光照强度在20-50lux，其他时间控制环境光照强度为0lux。
11.进一步的，所述步骤s1中，设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网。
12.进一步的，所述步骤s2中，种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放。
13.进一步的，所述步骤s4中，营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预
防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为20-30mg/ml。
14.进一步的，所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0015][0016]
进一步的，所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0017][0018]
进一步的，所述步骤s4中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0019]
进一步的，所述步骤s4中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为3-5：0.5-1.5：0.5-1.5：0.5-1.5：2-5加水大火熬制，制成浓度120-180mg/ml的药液。
[0020]
进一步的，所述步骤s4中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为4：1：1：1：3加水大火熬制，制成浓度150mg/ml的药液。
[0021]
进一步的，所述步骤s4中，营养液与新鲜猪血液按7：3的比例配比混匀。
[0022]
进一步的，所述步骤s5中，控制环境光照强度为：上午为40lux，下午为25lux，其他时间为0lux。
[0023]
本发明相比现有技术有以下优点：
[0024]
1、准确控制水蛭生活环境的光照强度，大大提高了水蛭抗凝血酶活性和生长速度。
[0025]
2、饵料中加入营养液，解决了单一血液饵料来源造成的营养不足及营养不均衡，同时解决了水蛭吸食血液后引起的消化不良或细菌感染引起的相关疾病，并提高了水蛭抗凝血酶活性和生长速度。
[0026]
3、利用新鲜猪血作为诱食剂，并确定最佳配比，解决了人工配合饲料摄食不佳的情况。
[0027]
4、大大缓解了部分地区因新鲜血液不足而导致的阻碍水蛭大规模养殖的问题。
具体实施方式
[0028]
所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和
调整，仍属于本发明的保护范围。
[0029]
实施例1
[0030]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0031]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0032]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0033]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0034]
s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按5：2的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；所述营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为20mg/ml。
[0035]
s5、控制光照强度：每天8-20点控制环境光照强度在20lux，其他时间控制环境光照强度为0lux。
[0036]
所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0037][0038]
其中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0039]
其中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为3：1.5：0.5：1.5：2加水大火熬制，制成浓度120mg/ml的药液。
[0040]
实施例2
[0041]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0042]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0043]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0044]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0045]
s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按7：3的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；所述营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为25mg/ml。
[0046]
s5、控制光照强度：控制环境光照强度为：上午为40lux，下午为25lux，其他时间为0lux。
[0047]
所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0048][0049]
其中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0050]
其中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为4：1：1：1：3加水大火熬制，制成浓度150mg/ml的药液。
[0051]
实施例3
[0052]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0053]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0054]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0055]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0056]
s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按10：5的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；所述营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为30mg/ml。
[0057]
s5、控制光照强度：每天8-20点控制环境光照强度在50lux，其他时间控制环境光照强度为0lux。
[0058]
所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0059][0060][0061]
其中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0062]
其中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为5：0.5：1.5：0.5：5加水大火熬制，制成浓度180mg/ml的药液。
[0063]
实施例4
[0064]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0065]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0066]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0067]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0068]
s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按10：2的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；所述营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为28mg/ml。
[0069]
s5、控制光照强度：每天8-20点控制环境光照强度在30lux，其他时间控制环境光照强度为0lux。
[0070]
所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0071][0072]
其中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0073]
其中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为4：1：1：1：2.5加水大火熬制，制成浓度160mg/ml的药液。
[0074]
对比例1(实施例2不含营养液)
[0075]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0076]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0077]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0078]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0079]
s4、饵料投喂：将新鲜猪血灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；
[0080]
s5、控制光照强度：控制环境光照强度为：上午为40lux，下午为25lux，其他时间为0lux。
[0081]
对比例2(与实施例2光照条件不同，保持低强度光照)
[0082]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0083]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0084]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0085]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0086]
s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按7：3的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；所述营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为25mg/ml。
[0087]
s5、控制光照强度：每天8-20点保持0-10lux，其他时间为0lux。
[0088]
所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0089][0090]
其中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0091]
其中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为4：1：1：1：3加水大火熬制，制成浓度150mg/ml的药液。
[0092]
对比例3(与实施例2光照条件不同，保持较高强度光照)
[0093]
一种提高水蛭抗凝血酶活性的养殖方法，包括以下步骤：
[0094]
s1、设置网箱：设置网箱长、宽、高分别为120cm、60cm、45cm，在网箱底部中间位置设置25cm
×
25cm排水口，安装20目防逃网；
[0095]
s2、投放种苗：种苗投放密度按1500克/箱，即规格0.3克/条水蛭5000条/箱投放；
[0096]
s3、水质管理：养殖用水采用井水，水温保持在22-28℃范围内，ph值保持在6.8-7.2范围内，养殖箱中水体采用微流水；
[0097]
s4、饵料投喂：将营养液与新鲜猪血液按7：3的比例配比混匀，然后灌入到洗净的猪肠衣中，并将两端捆扎确保不渗漏；将其放入水蛭养殖箱中，供水蛭吸食，间隔7天再次投喂；所述营养液为蛋白质、复合维生素、复合氨基酸、复合酶和预防药物组成的营养物质的水溶液，营养液浓度为25mg/ml。
[0098]
s5、控制光照强度：控制环境光照强度为：每天8-20点保持150-200lux，其他时间为0lux。
[0099]
所述步骤s4中，营养物质由以下质量比的各物质组成：
[0100]
[0101][0102]
其中，蛋白质为可溶性鱼浆蛋白；复合维生素为维生素a、b1、b2、c、d、e的复合物；复合氨基酸为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸的复合物；复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、中性蛋白酶及载体的复合物。
[0103]
其中，预防药物为板蓝根、黄莲、黄柏、黄芩、山楂按质量比为4：1：1：1：3加水大火熬制，制成浓度150mg/ml的药液。
[0104]
将实施例1-4和对比例1、2进行抗凝血酶活性、成活率、增重率测试：
[0105]
抗凝血酶活性检测方法：
[0106]
取将养殖60天后的水蛭直接打成水蛭浆，取水蛭浆约1g，精密称定，用5ml大肚移液管精密加入0.9％氯化钠溶液5ml，充分搅拌混匀，盖上塞子，浸提30分钟，并时时振摇，放入离心机，以2000r/min的转速，离心5分钟。倾出溶液至另一10ml离心管中，再放入离心机，以2000r/min的转速，离心5分钟。用100μl进样器精密量取上清液100μl，置9
×
110mm的小试管中，用500μl进样器加入含0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(临用配制)200μl，摇匀，置崩解仪的水浴(37℃
±
0.5℃)中温浸5分钟。用100μl进样器滴加每1ml含56单位或43单位的凝血酶溶液(每1分钟滴加一次，每次5μl，边滴加边轻轻摇匀)至凝固，记录消耗凝血酶溶液的体积数，按下式计算：
[0107][0108]
式中：u——每1g含抗凝血酶活性单位，u/g；
[0109]
c1——凝血酶溶液的浓度，u/ml；
[0110]
c2——供试品溶液的浓度，g/ml；
[0111]
v1——消耗凝血酶溶液的体积，μl；
[0112]
v2——供试品溶液的加入量，μl。
[0113][0114][0115]
实施例1-4和对比例1、2进行抗凝血酶活性、成活率、增重率测试结果如下：
[0116] 抗凝血酶活性(u/g)成活率(％)增重率(％)实施例112995433实施例215298526实施例313391439实施例414596502对比例19065133对比例28078166对比例39280172
[0117]
通过实验数据对比，在养殖周期60天，本发明养殖水蛭抗凝血酶达到129-152u/g，成活率达到91-98％，增重率达到433-526％，各项数据都要显著优于传统养殖方法。
[0118]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。