一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法

本发明属于水产养殖，具体涉及一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法。

背景技术：

1、洞穴鱼类被称为地质演变和生物进化的“活化石”，在自然状态下，它们的整个生活史或其中某一阶段必须在洞穴或地下水中进行。洞穴鱼类具有高度特化的洞穴特征，如眼睛退化、皮肤白化、鳞片消失、感觉器官的形态进一步发展或功能增强等。目前世界上有超过350种洞穴鱼类，而中国是世界上洞穴鱼类物种数量、特有种最多的国家。其中，中国特有金线鲃属鱼类仅分布于我国西南喀斯特地区。该属也是我国鲤科鱼类第一大属，有50多个不同的物种，约50％的种是洞穴鱼类。金线鲃鱼类的血糖低而稳定，它可望成为研究人类眼睛视力退化、白癜风、高血糖病分子机制的模式动物。

2、滇池金线鲃(sinocyclocheilusgrahami)，是1904年英国人regan描述的新种，是金线鲃属第一个种，是滇池流域的特有鱼类，2007年中国科学院昆明动物研究所突破滇池金线鲃人工繁殖，也是金线鲃属中最先实现人工繁殖的种类。犀角金线鲃(sinocyclocheilus rhinocerous)，是1994年发现的一种金线鲃属洞穴新种，2019年突破其人工繁殖技术。根据赵亚辉和张春光(2009)洞穴鱼类的定义，滇池金线鲃属非典型洞穴鱼类，犀角金线鲃属典型洞穴鱼类，滇池金线鲃与犀角金线鲃的杂交成功，将为中国洞穴鱼类的洞穴适应性研究和推进作为研究人类疾病的模式动物创造条件。然而经文献检索，未有滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交的相关报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，为洞穴鱼类的研究提供新的研究素材。

2、本发明提供了一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，包括以下步骤：

3、1)将滇池金线鲃和犀角金线鲃分别进行亲鱼培育；

4、所述滇池金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温16～22℃，水流的流速8～20cm/s，水的溶解氧6.0～7.5mg/l，水的ph值7.0～7.5；

5、所述犀角金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～22℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.5mg/l，水的ph值为7.0～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；

6、在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素d3钙片、多维元素片和水的混合物；所述质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素d3钙片、多维元素片和水的质量比为(250～280):(20～50)：(10～20):(8～20):300；

7、2)将性腺发育成熟的滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，得到精卵混合物；

8、3)将精卵混合物进行孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交种。

9、优选的，所述滇池金线鲃的亲鱼培育的环境参数按照以下要求进行节律性调节：

10、在12月～次年3月，水温16～20℃，水流的流速10～20cm/s，水的溶解氧7.0～8.0mg/l，水的ph值7.0～7.2；

11、在4～8月，水温18～22℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧7.0～7.5mg/l，水的ph值7.2～7.5；

12、在9～11月，水温16～20℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧6.0～7.0mg/l，水的ph值7.0～7.5。

13、优选的，所述犀角金线鲃的亲鱼培育的环境参数按照以下要求进行节律性调节：

14、在12月～次年3月，水温为16～20℃，水流的流速为15～20cm/s，水的溶解氧为7.0～7.5mg/l，水的ph值为7.0～7.2；

15、在4～8月，水温为18～22℃，水流的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/l，水的ph值为7.0～7.2；

16、在9～12月，水温为16～20℃，水的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/l，水的ph值为7.0～7.2。

17、优选的，在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，所述颗粒饲料的种类根据以下要求节律性调节：

18、在12月～次年3月，投喂饵料sf1，所述饵料sf1为质量比250:50:10:8:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素d3钙片、多维元素片和水的混合物；

19、在4～8月，投喂饵料sf2，所述饵料sf2为质量比280:30:20:10:300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素d3钙片、多维元素片和水的混合物；

20、在9～11月，投喂饵料sf3，所述饵料sf3为质量比250:20:20:20:300含质量浓度42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素d3钙片、维生素c和水的混合物。

21、优选的，所述人工授精包括滇池金线鲃为母本×犀角金线鲃为父本和/或滇池金线鲃为父本×犀角金线鲃为母本。

22、优选的，所述人工授精时，卵子和精子的数量比为(1～5)：(1～10)×105；

23、所述人工授精后，用渗透压280～300mosm/l、温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在载体上，形成粘附有载体的精卵混合物。

24、优选的，所述孵化的条件为：水位1.2m，水面在受精卵上方60～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的ph值7.0～7.2，水的溶解氧7.0～8.0mg/l；在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒5天，第6天开始有鱼苗孵出，第9天孵化结束。

25、优选的，所述鱼苗破膜后7天开始投喂饲料。

26、优选的，所述饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：

27、进食的第1～15天投喂浆状饵料sgrf1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10ml/m2，所述浆状饵料sgrf1为质量比300:200:30:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水的混合物；

28、第15～30天投喂饵料sgrf2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料sgrf2为质量比250:30:250:10:750的煮熟蛋黄、虾、黄豆豆浆、多维元素片和水的混合物；

29、第31～60天投喂饵料sgrf3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料sgrf3为质量比250:20:250:10:10:750的现磨黄豆豆浆、虾、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素c、多维元素片和水的混合物；

30、进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投加，每次投喂量在15～30min内吃完。

31、优选的，在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15～20g/m2的量添加来调节水质。

32、本发明提供了一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，本发明对滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃亲鱼进行亲鱼培养，通过严格控制亲鱼培育过程的环境参数和饲喂用人工颗粒饲料种类，为滇池金线鲃和犀角金线鲃模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生滇池金线鲃和野生犀角金线鲃更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而实现在人工环境下自然产精产卵，为后续人工杂交提供质量和数量俱佳的卵子精子；同时本发明经过人工授精后，将受精卵进行孵化获得孵化的鱼苗。本发明通过亲鱼培养、人工授精和人工孵育三个步骤共同干预滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交过程，打破种水平的物种生殖隔离，创造性地培育得到兼具两种亲本各自特征的杂交鱼种类。

33、同时，本发明在亲鱼培育过程中通过模拟两种鱼的各自生存环境，在不使用催产素的情况下，仅在人工环境条件下实现自然产精产卵的效果。因此，本发明提供的方法降低了生产成本、使操作更加简便易行。

34、进一步的，本发明具体限定了根据不同季节节律性调整亲鱼培育的各自参数和饲料的种类，有利于更加精细模拟自然环境，同时减少野生鱼类对人工环境的应激，利于其对人工环境的适应性，避免因环境的改变造成鱼类的生长和生殖方面的紊乱，使产精产卵的数量和质量更佳。

35、进一步的，本发明具体限定了在鱼苗饲养阶段根据不同季节节律性调整饲料的种类和投喂方法、投喂量等，该方法是根据不同鱼苗不同生长时期的特点设置的，有利于鱼苗生长，同时提高鱼苗的成活率和减少鱼苗的畸形率。