一种黑色钩弄蝶的室内扩繁方法

1.本发明属于昆虫饲养技术领域，具体涉及一种黑色钩弄蝶的室内扩繁方法。


背景技术：

2.阳春砂（amomum villosumlour.）广泛种植于我国云南、广东、海南和广西等地区，是我国著名的四大南药之一，其中云南的阳春砂产量占全国的60%以上，阳春砂也是著名的十大云药之一，其具有健胃健脾、理气安胎等主要功效，同时也是云南西双版纳州等地区农户种植广泛的重要傣药之一。但随着人工栽培面积的不断扩大，阳春砂虫害发生日趋猖獗，严重影响了阳春砂的产量和品质，阻碍了其规范化种植及相关产业链的可持续发展。
3.黑色钩弄蝶（ancistroidesnigritalatreille）属鳞翅目（lepidoptera）弄蝶科（hesperidae）钩弄蝶属（ancistroides butler），是申请者在云南省西双版纳傣族自治州首次发现的一种阳春砂上的新害虫，其具有分布广、繁殖能力强和危害隐蔽性强等特点。该虫广泛分布于泰国、柬埔寨、缅甸、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、印度、锡金、孟加拉和不丹等，国内则主要分布于云南和海南。黑色钩弄蝶寄主植物主要有阳春砂、姜等姜科的多种植物。
4.黑色钩弄蝶主要以幼虫为害阳春砂叶片，将卵产在阳春砂叶部，初孵幼虫偏好取食阳春砂嫩叶，常造成大量不规则缺刻，大龄幼虫进入暴食期，能够转移危害；该虫幼虫危害阳春砂时，常吐丝将叶片从叶缘处有规律的进行缝合，形成饺子状的虫苞，藏于其内进行取食发育，其危害具有较强的隐蔽性。危害严重时，造成砂仁植株叶片出现大面积虫苞，叶片被取食殆尽，引起植株整株枯萎，甚至死亡。因此，开展黑色钩弄蝶的生物学生态学基础理论研究至关重要，是构建阳春砂虫害绿色防控关键技术体系的主要内容。
5.目前，国内仅有少数关于黑色钩弄蝶形态特征的描述，尚未有关于该虫生物学特性及饲养技术方面的报道。而如何建立该虫室内稳定的实验种群，获得大量一致的标准化稳定虫源用于研究，为系统开展该虫的生物学、生态学、毒理学以及综合防控技术等系列研究奠定基础。可见，缺乏黑色钩弄蝶室内繁育的关键技术成为了研究其基础生物学、生态学以及毒理学等基础研究的技术瓶颈。因此，一方面，建立一套规范化、标准化的黑色钩弄蝶室内扩繁技术，从而持续为该虫的相关研究提供稳定一致的可靠虫源，为该虫的基础生物学及综合防控提供技术支撑，是当前亟需解决的技术问题。另一方面，饲养获得的大量规模化成虫，可以作为蝴蝶标本及蝴蝶园的重要资源进一步开发利用，变害为宝。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种黑色钩弄蝶的室内扩繁方法。
7.本发明所采取的技术方案是：本发明提供一种黑色钩弄蝶的室内扩繁方法，包括以下步骤：1)以阳春砂叶片作为产卵基质，将阳春砂叶片置于添加有外源补充营养液的养虫
笼中，叶柄插入中药提取液中，引入黑色钩弄蝶成虫进行交配产卵培养；2)收集携带黑色钩弄蝶卵的产卵基质；3)将携带黑色钩弄蝶卵的产卵基质置于底部含有抗菌保湿基质的养虫盒中进行孵化和幼虫培养，待到有蛹出现时收集蛹，进行成虫饲养，所述抗菌保湿基质吸附有所述中药提取液；其中，所述中药提取液的活性成分为傣百解、绞股蓝、肾茶的水提取液。
8.在一些实例中，所述中药提取液中绞股蓝、傣百解和肾茶的质量比为（1～5）:（1～5）:（1～5）。
9.在一些实例中，所述中药提取液的制备方法为：将绞股蓝、傣百解和肾茶混合，加水浸泡后煎煮，得到的煎煮液过滤后，用水稀释至质量百分比为4.5%～5.5%，即得中药提取液。
10.在一些实例中，所述步骤1中外源补充营养液质量比组成为：7.5%～12%糖类物质，余量为水。
11.在一些实例中，所述糖类物质选自蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖中的至少一种。
12.在一些实例中，所述步骤1中黑色钩弄蝶成虫的雌雄数量比为（1～3）:1。
13.在一些实例中，所述步骤3中抗菌保湿基质的质量组成为：0.5%～1.5%凝胶物质，1.5%～2.5%中药提取液，96%～98%水。
14.在一些实例中，所述步骤1和3中养虫笼和养虫盒置于温度为24～29℃条件下饲养。
15.在一些实例中，所述步骤1和3中养虫笼和养虫盒置于湿度为70%
±
5%条件下饲养。
16.在一些实例中，所述步骤1和3中养虫笼和养虫盒置于每日光照时间为11～13 h条件下饲养。
17.本发明的有益效果是：本发明将饲养黑色钩弄蝶的寄主植物与黑色钩弄蝶的产卵载体均设置为阳春砂叶片，精简了饲养步骤，有助于黑色钩弄蝶标准化饲养扩繁。
18.本发明添加由傣百解、绞股蓝、肾茶三种傣药制成的中药液，可降低真菌感染率28.7%；抗菌保湿基质和对阳春砂叶片进行消毒保湿处理，可以将叶片保鲜时间由2天延长至12天左右；新羽化的成虫先交配再放入产卵装置中，可以将卵的孵化率显著提高到80％以上，成虫收集率在75％以上。
19.本发明方法简单实用，省时省工，提高了黑色钩弄蝶的存活率，减少了更换食料的频率，并降低真菌感染，避免了实验室种群的衰退，可短时间内获得大量虫龄一致的黑色钩弄蝶各虫态，可为实验室提供稳定虫源，为黑色钩弄蝶的生物学、生态学和毒理学等理论研究奠定基础。
附图说明
20.图1为种植基地的傣药阳春砂植株；图2为室内饲养的黑色钩弄蝶成虫；图3为产在阳春砂叶片上的黑色钩弄蝶卵；图4为饲养的低龄黑色钩弄蝶幼虫；
图5为饲养的大龄黑色钩弄蝶幼虫；图6为饲养的黑色钩弄蝶幼虫取食阳春砂叶片留下的不规则缺刻；图7为饲养的黑色钩弄蝶幼虫危害阳春砂叶片并形成虫苞；图8为饲养的黑色钩弄蝶老熟幼虫吐丝化蛹；图9为饲养收获的黑色钩弄蝶蛹；图10为饲养的黑色钩弄蝶雄成虫；图11为饲养的黑色钩弄蝶雌成虫。
具体实施方式
21.一种黑色钩弄蝶的室内扩繁方法，包括以下步骤：1)以阳春砂叶片作为产卵基质，将阳春砂叶片置于添加有外源补充营养液的养虫笼中，叶柄插入中药提取液中，引入黑色钩弄蝶成虫进行交配产卵培养；2)收集携带黑色钩弄蝶卵的产卵基质；3)将携带黑色钩弄蝶卵的产卵基质置于底部含有抗菌保湿基质的养虫盒中进行孵化和幼虫培养，待到有蛹出现时收集蛹，进行成虫饲养，所述抗菌保湿基质吸附有所述中药提取液；其中，所述中药提取液的活性成分为傣百解、绞股蓝、肾茶的水提取液。
22.为了减少感染率，阳春砂叶片在使用前进行消毒处理，如使用酒精等无残留的组分对其表面进行擦拭处理。
23.在一些实例中，所述中药提取液中绞股蓝、傣百解和肾茶的质量比为（1～5）:（1～5）:（1～5）。优选的，绞股蓝、傣百解和肾茶的质量为1：1：1。
24.在一些实例中，所述中药提取液的制备方法为：将绞股蓝、傣百解和肾茶混合，加水浸泡后煎煮，得到的煎煮液过滤后，用水稀释至质量百分比为4.5%～5.5%，即得中药提取液。
25.外源补充营养液的作用在于黑色钩弄蝶成虫提供必要的能量，可以使用本领域通用的营养液，给在一些实例中，所述步骤1中外源补充营养液质量比组成为：7.5%～12%糖类物质，余量为水。
26.在一些实例中，所述糖类物质选自蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖中的至少一种。这些单糖或二糖更鉴于被黑色钩弄蝶利用。
27.在一些实例中，所述步骤1中黑色钩弄蝶成虫的雌雄数量比为（1～3）:1。
28.在一些实例中，所述步骤3中抗菌保湿基质的质量组成为：0.5%～1.5%凝胶物质，1.5%～2.5%中药提取液，96%～98%水。
29.在一些实例中，所述步骤1和3中养虫笼和养虫盒置于温度为24～29℃条件下饲养。
30.在一些实例中，所述步骤1和3中养虫笼和养虫盒置于湿度为70%
±
5%条件下饲养。
31.在一些实例中，所述步骤1和3中养虫笼和养虫盒置于每日光照时间为11～13 h条件下饲养。
32.下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明
各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
33.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。
34.实施例中使用到的离心管、养虫盒、养虫笼、收虫笼、培养皿以及镊子等相关工具在清洗干净后，使用75%酒精进行消毒处理，晾干后再使用。
35.实施例11、阳春砂的获取寄主植物傣药阳春砂（amomum villosumlour.)叶片采自云南省景洪市中国医学科学院药用植物研究所云南分所阳春砂种植基地。阳春砂整个生长期有专人进行正常栽培管理，不施用任何农药，基地的阳春砂植物（如图1所示）可为试验提供寄主植物保障。
36.2、中药液的配置以配置140ml中药液为例：分别称取绞股蓝（gynostemmapentaphyllum）、傣百解（marsdeniatenacissima）和肾茶[clerodendranthusspicatus（thunb.) c. y. wu]三种傣药材各10 g置于锅中，再加入1000 ml水，浸泡40min后进行加热熬煮。先以武火煎煮20min，再以文火煎煮20min，得到煎煮液，最后使用纱布进行过滤，去除药渣，即获得中药液120ml，待冷却后冰箱保存备用；后续使用的5%中药液的配置方法为：按中药液：蒸馏水的重量百分比为5:95的标准往上述中药液中加入蒸馏水，即得到5%的中药液。
[0037]
3、抗菌保湿基质的配制及养虫盒的制备分别称取琼脂1.0g、中药液2.0g和水97ml，先将水煮沸，然后加入琼脂，待充分融化后加入中药液，然后趁热加入到养虫盒或培养皿内，以平铺养虫盒或培养皿底部1.0cm厚为准，待凝固并冷却后即为抗菌保湿基质。
[0038]
下面所述的孵化盒、养虫盒、幼虫饲养盒如没有特殊说明的，均为底部制备有抗菌保湿基质的塑料盒。
[0039]
4、卵的收集（1）产卵基质的准备：产卵基质为阳春砂种植基地的新鲜、无病虫害的阳春砂叶片。将20片阳春砂叶片放置在5l清水中进行清洗，然后在自来水下冲洗20s，之后再使用装有75%酒精的喷壶给叶片正反面均匀喷雾进行消毒，最后将消毒好的叶片逐个平铺在滤纸上，并使用吸水纸巾擦干叶片上的水滴备用。使用时，将阳春砂叶片的叶柄插入装满5%中药液的2ml塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定，并通过脱脂棉封紧离心管的管口。
[0040]
（2）设置产卵装置：产卵装置为一长方体的养虫笼，其长宽高为75.0 cm
×
50.0 cm
×
50.0 cm，侧面一面中央设置有长为50 cm、高为40 cm 的长方形开口拉链门，并在开口面上有一袖头（长为50cm，直径为20cm），方便去放样品及试验操作；并在每个产卵装置内放置插在装满5%中药液的塑料离心管中的阳春砂叶片。
[0041]
（3）设置产卵：从阳春砂种植园采集黑色钩弄蝶成虫，使用收虫笼往养虫笼中转移不超过20头该虫成虫，设置成虫的雌雄数量比为2:1，放置6h使成虫完成交配。然后再使用收虫笼往每个产卵装置内转移不超过20头经交配的黑色钩弄蝶成虫，设置成虫的雌雄数量比为2:1，关上拉链门及绑紧袖头进行饲养，饲养的温度为24-29℃，湿度为70%
±
5%，光周期为12l: 12d。
[0042]
（4）卵的收集：每天收集已携带黑色钩弄蝶卵的阳春砂叶片，并添加新的产卵基质，黑色钩弄蝶成虫会主动转移到新基质上。收集完之后补充同样数量的新鲜阳春砂叶片。
[0043]
5、卵的孵化及幼虫饲养设置黑色钩弄蝶孵化盒，孵化盒和幼虫饲养盒均为一样的塑料盒（其长宽高为10.0 cm
×
7.0 cm
×
5.0 cm，盒盖中央设置有长为5 cm、宽为2 cm 的长方形口，并在长方形口上粘上200目的纱网）。卵基本在产下后6 d左右孵化，每个孵化盒放置1片携带黑色钩弄蝶卵的阳春砂叶片，该叶片的叶柄插入装满5%中药液的2ml塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定，并通过脱脂棉封紧离心管的管口，然后将离心管倒放于底部含有抗菌保湿基质的幼虫饲养盒内，并盖好盖。第7d开始，依据取食情况，添加阳春砂叶片，该叶片的叶柄同样插入装满5%中药液的2ml塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定；进行幼虫饲养，饲养的温度为24-90℃，湿度为70%
±
5%，光周期为12l: 12d。
[0044]
6、蛹的收集每天观察幼虫饲养盒中黑色钩弄蝶老熟幼虫的化蛹情况，发现化蛹则收集到培养皿内（直径为9cm）。培养皿内含有抗菌保湿基质，并培养皿开口放于成虫饲养笼中。
[0045]
7、成虫饲养与收集每天观察养虫笼内培养皿中的黑色钩弄蝶蛹的羽化情况，笼内用盖子提供蘸有10%混合营养液的棉花团，饲喂成虫。在成虫饲养装置内（同产卵装置的养虫笼）成虫数量控制在20头以内为宜（雄虫不低于7头）；然后黑色钩弄蝶成虫可按照规定数量使用收虫笼捕获转移至新设的产卵装置中，继续进行产卵环节饲养。
[0046]
8、蛹的低温保存将部分黑色钩弄蝶的蛹进行收集保存，以合理调控该黑色钩弄蝶室内种群数量，并在大量实验需求的时候进行繁殖，能够提供虫龄一致且稳定的大量虫源供试验所需。将蛹放入塑料盒（长
×
宽
×
高为30
×
20
×
10cm）内，盒底装有抗菌保湿基质，每盒放20-30个，接着将塑料盒置于人工气候箱进行低温保存。黑色钩弄蝶蛹的低温保存条件和保存期限分别为在16℃-20℃条件下可贮藏保存21d，能保证成虫收集率75％以上。
[0047]
对比例1培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中离心管不做任何处理。
[0048]
对比例2培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中离心管只添加水，不添加中药液。
[0049]
对比例3培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中离心管中的中药液的组成为傣百解、绞股蓝和水。
[0050]
对比例4培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中饲养盒不添加抗菌保湿基质。
[0051]
对比例5培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中饲养
盒只添加湿滤纸。
[0052]
对比例6培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中饲养盒只添加琼脂。
[0053]
对比例7培育方法及条件与实施例1相同，不同之处在于步骤5卵的孵化及幼虫饲养中饲养盒的抗菌保湿基质的中药液的组成为傣百解、绞股蓝和水。
[0054]
然后对以上实施例和对比例进行添加中药液对阳春砂叶片保鲜时间的影响（20次重复）、抗菌保湿基质对黑色钩弄蝶真菌病害感染率的影响（10次重复）、黑色钩弄蝶的发育历期观察（10次重复）、黑色钩弄蝶成虫寿命观察（10次重复）、不同温度保存条件下黑色钩弄蝶的成虫收集率（10次重复）、黑色钩弄蝶成虫种群消长规律（10次重复）、黑色钩弄蝶成虫日活动规律（10次重复）等试验，结果如表1～7所示。
[0055]
表1 添加中药液对阳春砂叶片保鲜时间的影响
处理组平均保鲜时间（d）实施例（离心管+水+中药液）12.2对比例1（不做处理的空离心管）1.6对比例2（离心管+水）7.4对比例3[离心管+水+中药液（中药提取液组成为傣百解、绞股蓝和水）]9.3
表2 抗菌保湿基质对黑色钩弄蝶真菌病害感染率的影响
处理组黑色钩弄蝶病害感染率（%）实施例（饲养盒+琼脂+中药液）3.5对比例4（不做处理的空饲养盒）32.2对比例5（饲养盒+湿滤纸）34.0对比例6（饲养盒+琼脂）31.4对比例7[饲养盒+琼脂+中药液（中药提取液组成为傣百解、绞股蓝和水）]7.6
表3 黑色钩弄蝶的发育历期（d）虫态天（d）卵期5.40幼虫期22.32蛹期9.46产卵前期2.14世代历期39.32表4 黑色钩弄蝶成虫寿命处理组成虫平均寿命（d）110215314412513614
7158169171015表5 不同温度保存条件下黑色钩弄蝶的成虫收集率低温保存条件成虫平均收集率（%）16℃/14d83.216℃/21d75.420℃/14d87.820℃/21d82.0表6 黑色钩弄蝶成虫种群消长规律（云南西双版纳）月份成虫数量（头）102033465961471681198105117124表7 黑色钩弄蝶成虫日活动规律（云南西双版纳6-7月份）时间段成虫数量（头）7:00-8:0019:00-10:00811:00-12:00513:00-14:00115:00-16:00417:00-18:002由表1可见，添加中药液处理组可以明显延长阳春砂叶片的保鲜时间，为12d；由表2可见，添加抗菌保湿基质处理组可以有效降低黑色钩弄蝶真菌病害的感染率，可降低28.7%。表3 研究结果表明，黑色钩弄蝶的世代历期为39.32d，幼虫期占整个世代的56.8%。表4 可见，黑色钩弄蝶成虫寿命为14.00 d。由表5可见，在16℃-20℃下低温贮藏21d，成虫收集率可达75%以上。
[0056]
由表6可见，该虫成虫在版纳的种群消长规律为3月份开始增加，6-7月份出现为成虫高峰，11月份该虫种群数量有所波动。表7可见，该虫成虫的日活动高峰主要在上午的9：
00-12:00，15:00-16:00有所波动，其余时段其数量较少。
[0057]
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。