一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法与流程

本发明涉及微生物菌剂，具体涉及一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法。

背景技术：

1、微生物农药是指应用活体微生物及其代谢产物对农业病虫害进行防治。微生物农药具有选择性强，对人、畜、农作物和自然环境安全，不易产生抗药性等特点，因此得到了广泛研究。目前市场上已经有较为成熟的微生物农药产品，例如苏云金芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。

2、柑橘溃疡病是一种毁灭性的世界检疫性病害，现已在世界多个国家和地区发生，对柑橘产业造成了极大的经济损失。由地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种引起，起源于东南亚，在我国于华南地区首次被发现，之后在全国各个柑橘种植及基地陆续发生，华南地区最为严重，对柑橘产业造成了很大经济损失。

3、柑橘溃疡病的发生是以老叶上病斑为传染源，当温度和空气湿度适宜时溢出，通过风雨、昆虫传播，经寄主的气孔和伤口感染柑橘幼嫩组织。常规防治溃疡病的措施主要是通过及时清园，剪除病枝病叶的方式减轻或者预防溃疡病的发生和蔓延，该方法成本高，效果无保障；药剂防治普遍采用铜制剂，其可降低累积在新叶上的菌源并减轻后续的感染，但铜制剂的过量使用导致柑橘园红蜘蛛爆发，果实铜超标，食用易造成肝损伤，且防治效果越来越差。

4、柑橘溃疡病的表现主要为叶片针头大小的黄色油浸状斑点，大部分在叶片背面随后逐渐扩大为圆形，四周凸起，中间凹陷，形似火山口；在果实上症状与叶片类似，在树枝上的程度较轻，但是无论在何部位，最终都会削弱树势，严重会导致柑橘早期落叶、落花，树势衰退，果实产量减少，品质降低，影响种植户经济收入。

5、随着柑橘种植面积的加大，品种的更新换代等，为柑橘溃疡病的快速传播提供了有利条件，因此，溃疡病的防治工作显得更加重要。

6、经过多年摸索实践，目前在田间仅铜制剂可以一定程度控制柑橘溃疡病的发生，其作用原理如下：（1）建立物理屏障：铜颗粒隔断气孔、水空；（2）干扰酶的正常功能：铜离子与病原菌蛋白结合导致折叠等；（3）产生活性氧ros，刺激脂质过氧化作用，损伤蛋白和核酸致病原菌死亡。铜制剂的使用虽然一定程度上降低了柑橘溃疡病的危害，但是随着铜制剂的连年大量使用，其弊端也不断地显露：（1）降低了土壤和根际细菌的多样性，病原菌耐药性越来越强；（2）增加了土壤重金属污染；（3）果面光洁发亮，诱集螨类害虫，刺激螨类害虫大爆发；（4）果实铜元素超标，引发肝损伤等。

7、微生物作为生物防治的重要组成部分，某些微生物能够通过分泌抗生素等次级代谢产物直接抑制病原菌的生长；某些微生物也可以通过分泌铁载体与病原菌竞争铁离子从而间接实现抑制病原菌的生长；某些微生物可以通过诱导植物产生系统抗性增强植物的抗病能力。但是现有技术中的微生物菌剂防治柑橘溃疡病效果差，见效慢，药效持续时间短，而且对土壤的要求比较高，ph较低或者较高的土壤都不利于微生物的生存。

8、因此，研发一种微生物菌剂，能够在提高对防治柑橘溃疡病效果的同时，还能够实现见效快，药效持续时间长，对土壤的要求低的技术效果，是目前急需解决的问题。

技术实现思路

1、本发明提供一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂对防治柑橘溃疡病效果好，见效快，药效持续时间长，对土壤要求低。

2、为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案如下：

3、一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，由以下步骤组成：菌种活化、制备一级种子液、制备二级种子液、发酵培养、制备菌株粉、制备初级混合液、制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂；

4、所述菌种活化的方法为，将保存的枯草芽孢杆菌菌株接种于lb固体培养基上，于35-37℃下培养35-37h；挑取单菌落转接到lb斜面培养基上，于35-37℃培养19-21h，用无菌水洗下培养基表面菌体作为接种液；

5、所述枯草芽孢杆菌的分类命名为：枯草芽孢杆菌bacillus subtilis，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2022年4月26日，保藏编号为cgmcc no.24778，在专利公开号为cn115927034a，专利名称为一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌、菌剂及其应用的专利中已被公开；

6、所述制备一级种子液的方法为，按照体积百分比为10-12%的接种量向lb种子培养基中接入接种液，控制搅拌速度为220-250rpm，温度为35-37℃，摇床培养20-22h，得到一级种子液；

7、所述制备二级种子液的方法为，按照体积百分比为2-4%的接种量向种子培养基中接入一级种子液，控制通气量为0.9-1.1v／v·min，搅拌速度为210-230rpm，培养18-20h，得到二级种子液；

8、所述种子培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：1.8-2.2份葡萄糖，1.3-1.7份蛋白胨，0.6-1份酵母粉，0.5-0.7份牛肉膏，0.4-0.6份氯化钠，94.5-95份水；

9、所述发酵培养的方法为，按照体积百分比为9-11%的接种量向发酵培养基中接入二级种子液，通气量为0.8-1v／v·min，搅拌速度为210-230rpm，培养26-28h，得到初级菌株发酵液，然后向初级菌株发酵液中加入麦芽糊精和海藻糖，得到菌株发酵液；

10、所述发酵培养基的组成，按重量份计，由以下组成：4.8-5.2份葡萄糖，1.5-1.8份蛋白胨，0.05-0.08份酵母粉，0.9-1.2份豆粕粉，0.02-0.04份硫酸镁，0.02-0.04份硫酸锰，92.1-92.4份水；

11、所述发酵培养中，初级菌株发酵液、麦芽糊精、海藻糖的重量比为68-70:22-25:5-6；

12、所述制备菌株粉的方法为，对菌株发酵液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.05-0.06mpa，进风温度为100-105℃，出风温度为55-60℃，得到菌株粉；

13、所述菌株粉的芽孢率为96.1-96.6%，发酵液活菌数为3.2×1010-3.5×1010cfu/ml；

14、所述制备初级混合液的方法为，将菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水混合后进行真空均质，控制真空均质机的真空度为60-80kpa，转速为2500-2700rpm，均质次数为3-4次，每次均质时间为5-8min，真空均质结束得到初级混合液；

15、所述制备初级混合液中，菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水的重量比为14-16:3-5:15-17:5-7:2-5:2-4:1-3:65-70；

16、所述改性高岭土的制备方法为：对高岭土进行低温低压处理，控制低温低压处理的温度为-10℃至-5℃，压力为0.15-0.2mpa，时间为25-35min；然后将低温低压处理后的高岭土置于50-55℃下，同时以100-120rpm的搅拌速度对低温低压处理后的高岭土进行搅拌，然后向低温低压处理后的高岭土的表面均匀喷淋高岭土改性剂，喷淋结束后在50-55℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30-50khz，超声震荡的时间为30-40min，超声震荡结束得到改性高岭土；

17、所述改性高岭土的制备中，低温低压处理后的高岭土与高岭土改性剂的重量比为10:1-1.5；

18、所述高岭土改性剂的组成，按重量份计，包括：10-15份马来酸酐，5-8份三羟甲基丙烷三丙烯酸酯，12-15份甲基丙烯酸缩水甘油酯，1-2份硅烷偶联剂kh-550；

19、所述制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂的方法为，向初级混合液中加入γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙后在40-45℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30-50khz，超声震荡的时间为30-35min，超声震荡结束得到混合液，将混合液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.06-0.07mpa，进风温度为100-105℃，出风温度为55-60℃，真空喷雾干燥结束得到枯草芽孢杆菌可溶粉剂；

20、所述制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂中，初级混合液、γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙的重量比为50-55:0.5-0.8:0.7-1:1-1.2。

21、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

22、（1）本发明制备的防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂，对防治柑橘溃疡病效果好，见效快，药效持续时间长，在柑橘溃疡病发病初期进行第一次施药，第一次施药结束7天后进行第二次施药，每次施药时枯草芽孢杆菌可溶粉剂用量为0.5g/株，在第二次施药后3d，防治效果为65.20-66.93%，在第二次施药后7d，防治效果为73.16-73.73%，在第二次施药后14d，防治效果为79.13-79.67%，在第二次施药后21d，防治效果为81.72-82.18%，在第二次施药后28d，防治效果为81.00-82.21%；

23、（2）本发明制备的防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂，对土壤要求低，能够适用于ph为5.5的酸性土壤，在柑橘溃疡病发病初期进行第一次施药，第一次施药结束7天后进行第二次施药，第二次施药后14d，防治效果为78.08-79.03%，第二次施药后28d，防治效果为82.88-83.32%；

24、（3）本发明制备的防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂，对土壤要求低，能够适用于ph为8的碱性土壤，在柑橘溃疡病发病初期进行第一次施药，第一次施药结束7天后进行第二次施药，第二次施药后14d，防治效果为76.40-76.83%，第二次施药后28d，防治效果为81.90-82.43%。

25、实施方式

26、为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现说明本发明的具体实施方式。

27、实施例1

28、一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，具体为：

29、1.菌种活化：将保存的枯草芽孢杆菌菌株接种于lb固体培养基上，于35℃下培养35h；挑取单菌落转接到lb斜面培养基上，于35℃培养19h，用无菌水洗下培养基表面菌体作为接种液；

30、所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为cgmcc no.24778，在专利公开号为cn115927034a，专利名称为一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌、菌剂及其应用的专利中已被公开；

31、2.制备一级种子液：按照体积百分比为10%的接种量向lb种子培养基中接入接种液，控制搅拌速度为220rpm，温度为35℃，摇床培养20h，得到一级种子液；

32、3.制备二级种子液的方法为，按照体积百分比为2%的接种量向种子培养基中接入一级种子液，控制通气量为0.9v／v·min，搅拌速度为210rpm，培养18h，得到二级种子液；

33、所述种子培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：1.8份葡萄糖，1.3份蛋白胨，0.6份酵母粉，0.5份牛肉膏，0.4份氯化钠，94.5份水；

34、4.发酵培养：按照体积百分比为9%的接种量向发酵培养基中接入二级种子液，通气量为0.8v／v·min，搅拌速度为210rpm，培养26h，得到初级菌株发酵液，然后向初级菌株发酵液中加入麦芽糊精和海藻糖，得到菌株发酵液；

35、所述发酵培养基的组成，按重量份计，由以下组成：4.8份葡萄糖，1.5份蛋白胨，0.05份酵母粉，0.9份豆粕粉，0.02份硫酸镁，0.02份硫酸锰，92.1份水；

36、初级菌株发酵液、麦芽糊精、海藻糖的重量比为68:22:5；

37、5.制备菌株粉：对菌株发酵液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.05mpa，进风温度为100℃，出风温度为55℃，得到菌株粉；

38、所述菌株粉的芽孢率为96.1%，发酵液活菌数为3.2×1010cfu/ml；

39、6.制备初级混合液：将菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水混合后进行真空均质，控制真空均质机的真空度为60kpa，转速为2500rpm，均质次数为3次，每次均质时间为5min，真空均质结束得到初级混合液；

40、菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水的重量比为14:3:15:5:2:2:1:65；

41、所述改性高岭土的制备方法为：对高岭土进行低温低压处理，控制低温低压处理的温度为-10℃，压力为0.15mpa，时间为25min；然后将低温低压处理后的高岭土置于50℃下，同时以100rpm的搅拌速度对低温低压处理后的高岭土进行搅拌，然后向低温低压处理后的高岭土的表面均匀喷淋高岭土改性剂，喷淋结束后在50℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30khz，超声震荡的时间为30min，超声震荡结束得到改性高岭土；

42、所述改性高岭土的制备中，低温低压处理后的高岭土与高岭土改性剂的重量比为10:1；

43、所述高岭土改性剂的组成，按重量份计，包括：10份马来酸酐，5份三羟甲基丙烷三丙烯酸酯，12份甲基丙烯酸缩水甘油酯，1份硅烷偶联剂kh-550；

44、7.制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂：向初级混合液中加入γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙后在40℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30khz，超声震荡的时间为30min，超声震荡结束得到混合液，将混合液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.06mpa，进风温度为100℃，出风温度为55℃，真空喷雾干燥结束得到枯草芽孢杆菌可溶粉剂；

45、所述制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂中，初级混合液、γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙的重量比为50:0.5:0.7:1。

46、实施例2

47、一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，具体为：

48、1.菌种活化：将保存的枯草芽孢杆菌菌株接种于lb固体培养基上，于36℃下培养36h；挑取单菌落转接到lb斜面培养基上，于36℃培养20h，用无菌水洗下培养基表面菌体作为接种液；

49、所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为cgmcc no.24778，在专利公开号为cn115927034a，专利名称为一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌、菌剂及其应用的专利中已被公开；

50、2.制备一级种子液：按照体积百分比为11%的接种量向lb种子培养基中接入接种液，控制搅拌速度为240rpm，温度为36℃，摇床培养21h，得到一级种子液；

51、3.制备二级种子液：按照体积百分比为3%的接种量向种子培养基中接入一级种子液，控制通气量为1v／v·min，搅拌速度为220rpm，培养19h，得到二级种子液；

52、所述种子培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：2份葡萄糖，1.5份蛋白胨，0.8份酵母粉，0.6份牛肉膏，0.5份氯化钠，94.8份水；

53、4.发酵培养：按照体积百分比为10%的接种量向发酵培养基中接入二级种子液，通气量为0.9v／v·min，搅拌速度为220rpm，培养27h，得到初级菌株发酵液，然后向初级菌株发酵液中加入麦芽糊精和海藻糖，得到菌株发酵液；

54、所述发酵培养基的组成，按重量份计，由以下组成：5份葡萄糖，1.6份蛋白胨，0.06份酵母粉，1份豆粕粉，0.03份硫酸镁，0.03份硫酸锰，92.3份水；

55、初级菌株发酵液、麦芽糊精、海藻糖的重量比为69:24:5.5；

56、5.制备菌株粉：对菌株发酵液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.05mpa，进风温度为102℃，出风温度为58℃，得到菌株粉；

57、所述菌株粉的芽孢率为96.5%，发酵液活菌数为3.4×1010cfu/ml；

58、6.制备初级混合液：将菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水混合后进行真空均质，控制真空均质机的真空度为70kpa，转速为2600rpm，均质次数为4次，每次均质时间为6min，真空均质结束得到初级混合液；

59、菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水的重量比为15:4:16:6:4:3:2:68；

60、所述改性高岭土的制备方法为：对高岭土进行低温低压处理，控制低温低压处理的温度为-7℃，压力为0.18mpa，时间为30min；然后将低温低压处理后的高岭土置于52℃下，同时以110rpm的搅拌速度对低温低压处理后的高岭土进行搅拌，然后向低温低压处理后的高岭土的表面均匀喷淋高岭土改性剂，喷淋结束后在52℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为40khz，超声震荡的时间为35min，超声震荡结束得到改性高岭土；

61、所述改性高岭土的制备中，低温低压处理后的高岭土与高岭土改性剂的重量比为10:1.2；

62、所述高岭土改性剂的组成，按重量份计，包括：12份马来酸酐，6份三羟甲基丙烷三丙烯酸酯，14份甲基丙烯酸缩水甘油酯，1.5份硅烷偶联剂kh-550；

63、7.制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂：向初级混合液中加入γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙后在42℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为40khz，超声震荡的时间为32min，超声震荡结束得到混合液，将混合液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.06mpa，进风温度为102℃，出风温度为58℃，真空喷雾干燥结束得到枯草芽孢杆菌可溶粉剂；

64、初级混合液、γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙的重量比为52:0.6:0.8:1.1。

65、实施例3

66、一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，具体为：

67、1.菌种活化：将保存的枯草芽孢杆菌菌株接种于lb固体培养基上，37℃下培养37h；挑取单菌落转接到lb斜面培养基上，于37℃培养21h，用无菌水洗下培养基表面菌体作为接种液；

68、所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为cgmcc no.24778，在专利公开号为cn115927034a，专利名称为一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌、菌剂及其应用的专利中已被公开；

69、2.制备一级种子液：按照体积百分比为12%的接种量向lb种子培养基中接入接种液，控制搅拌速度为250rpm，温度为37℃，摇床培养22h，得到一级种子液；

70、3.制备二级种子液：按照体积百分比为4%的接种量向种子培养基中接入一级种子液，控制通气量为1.1v／v·min，搅拌速度为230rpm，培养20h，得到二级种子液；

71、所述种子培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：2.2份葡萄糖，1.7份蛋白胨，1份酵母粉，0.7份牛肉膏，0.6份氯化钠，95份水；

72、4.发酵培养：按照体积百分比为11%的接种量向发酵培养基中接入二级种子液，通气量为1v／v·min，搅拌速度为230rpm，培养28h，得到初级菌株发酵液，然后向初级菌株发酵液中加入麦芽糊精和海藻糖，得到菌株发酵液；

73、所述发酵培养基的组成，按重量份计，由以下组成：5.2份葡萄糖，1.8份蛋白胨，0.08份酵母粉，1.2份豆粕粉，0.04份硫酸镁，0.04份硫酸锰，92.4份水；

74、初级菌株发酵液、麦芽糊精、海藻糖的重量比为70:25:6；

75、 5.制备菌株粉：对菌株发酵液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.06mpa，进风温度为105℃，出风温度为60℃，得到菌株粉；

76、所述菌株粉的芽孢率为96.6%，发酵液活菌数为3.5×1010cfu/ml；

77、 6.制备初级混合液：将菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水混合后进行真空均质，控制真空均质机的真空度为80kpa，转速为2700rpm，均质次数为4次，每次均质时间为8min，真空均质结束得到初级混合液；

78、菌株粉、木质素磺酸钠、改性高岭土、亚甲基二萘磺酸钠、硬脂酸、脂肪醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸钙钠、去离子水的重量比为16:5:17:7:5:4:3:70；

79、所述改性高岭土的制备方法为：对高岭土进行低温低压处理，控制低温低压处理的温度为-5℃，压力为0.2mpa，时间为35min；然后将低温低压处理后的高岭土置于55℃下，同时以120rpm的搅拌速度对低温低压处理后的高岭土进行搅拌，然后向低温低压处理后的高岭土的表面均匀喷淋高岭土改性剂，喷淋结束后在55℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为50khz，超声震荡的时间为40min，超声震荡结束得到改性高岭土；

80、所述改性高岭土的制备中，低温低压处理后的高岭土与高岭土改性剂的重量比为10:1.5；

81、所述高岭土改性剂的组成，按重量份计，包括：15份马来酸酐，8份三羟甲基丙烷三丙烯酸酯，15份甲基丙烯酸缩水甘油酯，2份硅烷偶联剂kh-550；

82、7.制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂：向初级混合液中加入γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙后在45℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为50khz，超声震荡的时间为35min，超声震荡结束得到混合液，将混合液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.07mpa，进风温度为105℃，出风温度为60℃，真空喷雾干燥结束得到枯草芽孢杆菌可溶粉剂；

83、初级混合液、γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙的重量比为55:0.8:1:1.2。

84、对比例1

85、采用实施例2所述的防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，其不同之处在于：第6步制备初级混合液步骤中使用高岭土代替改性高岭土。

86、对比例2

87、采用实施例2所述的防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌可溶粉剂的制备方法，其不同之处在于：第7步制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂步骤中省略γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙的加入，即将第7步制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂改为：

88、将初级混合液在42℃下进行超声震荡，控制超声震荡的频率为40khz，超声震荡的时间为32min，超声震荡结束得到混合液，将混合液进行真空喷雾干燥，控制真空喷雾干燥的真空度为0.06mpa，进风温度为102℃，出风温度为58℃，真空喷雾干燥结束得到枯草芽孢杆菌可溶粉剂。

89、试验例1

90、在广西南宁市武鸣区仙湖镇那溪村选取在低洼、潮湿、密闭、管理粗放的历年溃疡病发较重的6个果园用于试验，分别标为1-6号果园，保证每个果园中的柑橘树的树种、树龄、长势及水肥管理等条件一致，每个果园随机选择50棵柑橘树作为试验柑橘树。

91、分别将实施例1-3和对比例1-2制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂稀释成800倍液，然后分别对1-5号果园的试验柑橘树进行喷施处理，不对第6号果园的试验柑橘树喷施任何农药作为空白对照组。在柑橘溃疡病发病初期进行第一次施药，第一次施药结束7天后进行第二次施药，每次施药时枯草芽孢杆菌可溶粉剂用量为0.5g/株。

92、分别于施药前和第二次施药后3d，7d，14d，21d和28d调查防治效果，每株按东，西，南，北，中五点取样，每点调查10个果及两个叶梢上的全部叶片，记录总叶(果)数，各级病叶(果)数，叶(果)危害等级，并计算病情指数和防治效果，记录和计算方式及计算结果如下：

93、叶(果)危害分级方法：0级：无病；1级：每个叶(果)有病斑1-5个；3级：每个叶(果)有病斑6-10个；5级：每个叶(果)有病斑11-15个；7级：每个叶(果)有病斑16-20个；9级：每个叶(果)有病斑21个以上；

94、病情指数＝{[∑(各级病果数×相应级数值)]/调查总果数×9}×100；

95、防治效果(%)＝[1-(空白对照组药前病情指数×喷施处理后病情指数)/(空白对照组药后病情指数×喷施处理前病情指数)]×100；

96、

97、由试验例1的结果可以看出，实施例1-3制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂对防治柑橘溃疡病效果好，见效快，药效持续时间长，对比例1的结果稍差，对比例2的结果最差，说明通过在初级混合液中加入改性高岭土，以及在制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂中加入γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙，能够提高对防治柑橘溃疡病效果，缩短见效时间，延长药效持续时间。

98、试验例2

99、在广西南宁市武鸣区仙湖镇那溪村选取在低洼、潮湿、密闭、管理粗放的历年溃疡病发较重的6个果园用于试验，分别标为1-6号果园，保证每个果园中的柑橘树的树种、树龄、长势及水肥管理等条件一致，每个果园随机选择50棵柑橘树作为试验柑橘树。

100、然后分别将实施例1-3和对比例1-2制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂稀释成800倍液后对1-5号果园的试验柑橘树进行喷施处理，不对第6号果园的试验柑橘树使用任何农药作为空白对照组。首先，在柑橘溃疡病发病初期进行第一次施药，第一次施药结束7天后进行第二次施药，第一次施药前10天使用质量分数为2%的醋酸水溶液将1-6组的土壤的ph调至5.5，喷施处理中枯草芽孢杆菌可溶粉剂用量为0.5g/株。

101、于喷施处理后14d和28d调查防治效果，每株按东，西，南，北，中五点取样，每点调查10个果及两个叶梢上的全部叶片，记录总叶(果)数，各级病叶(果)数，叶(果)危害等级，并计算病情指数和防治效果，记录和计算方式及计算结果如下：

102、叶(果)危害分级方法：0级：无病；1级：每个叶(果)有病斑1-5个；3级：每个叶(果)有病斑6-10个；5级：每个叶(果)有病斑11-15个；7级：每个叶(果)有病斑16-20个；9级：每个叶(果)有病斑21个以上；

103、病情指数＝{[∑(各级病果数×相应级数值)]/调查总果数×9}×100；

104、防治效果(%)＝[1-(空白对照组药前病情指数×喷施处理后病情指数)/(空白对照组药后病情指数×喷施处理前病情指数)]×100；

105、

106、试验例3

107、在广西南宁市武鸣区仙湖镇那溪村选取在低洼、潮湿、密闭、管理粗放的历年溃疡病发较重的6个果园用于试验，分别标为1-6号果园，保证每个果园中的柑橘树的树种、树龄、长势及水肥管理等条件一致，每个果园随机选择50棵柑橘树作为试验柑橘树。

108、然后分别将实施例1-3和对比例1-2制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂稀释成800倍液后对1-5号果园的试验柑橘树进行喷施处理，不对第6号果园的试验柑橘树使用任何农药作为空白对照组。首先，在柑橘溃疡病发病初期进行第一次施药，第一次施药结束7天后进行第二次施药，第一次施药前10天使用草木灰将1-6组的土壤的ph调至8，喷施处理中枯草芽孢杆菌可溶粉剂用量为0.5g/株。

109、于喷施处理后14d和28d调查防治效果，每株按东，西，南，北，中五点取样，每点调查10个果及两个叶梢上的全部叶片，记录总叶(果)数，各级病叶(果)数，叶(果)危害等级，并计算病情指数和防治效果，记录和计算方式及计算结果如下：

110、叶(果)危害分级方法：0级：无病；1级：每个叶(果)有病斑1-5个；3级：每个叶(果)有病斑6-10个；5级：每个叶(果)有病斑11-15个；7级：每个叶(果)有病斑16-20个；9级：每个叶(果)有病斑21个以上；

111、病情指数＝{[∑(各级病果数×相应级数值)]/调查总果数×9}×100；

112、防治效果(%)＝[1-(空白对照组药前病情指数×喷施处理后病情指数)/(空白对照组药后病情指数×喷施处理前病情指数)]×100；

113、

114、由试验例2和试验例3的结果可以看出，实施例1-3制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂对土壤要求低，能够适用于ph为5.5的酸性土壤和ph为8的碱性土壤，对比例1的结果稍差，对比例2的结果最差，说明通过在初级混合液中加入改性高岭土，以及在制备枯草芽孢杆菌可溶粉剂中加入γ-聚谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、乳酸钙，能够降低制备的枯草芽孢杆菌可溶粉剂对土壤的要求。

115、除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

116、最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。