一种缓解聚苯乙烯纳米塑料诱导多代毒性的芒果苷应用

本发明涉及芒果苷应用，具体为一种缓解聚苯乙烯纳米塑料诱导多代毒性的芒果苷应用。

背景技术：

1、微纳米塑料是一类新型的有机持久性污染物，由于其在各种环境介质和膳食中均有分布，人们不可避免的会通过各种途径摄入微纳米塑料。因此，微纳米塑料对环境和人类健康的潜在危害也受到越来越多的关注。更重要的是，环境中塑料的降解过程是持续不断的，这导致微纳米塑料将长期、广泛地分布在生物圈中，微纳米塑料对人类和生物体的毒性效应也将持续存在。聚苯乙烯是五大主要高产量塑料之一，被广泛应用于塑料餐具与食品容器加工等领域。其次，聚苯乙烯的化学结构复杂，普通微生物和紫外照射等外力作用通常无法使其完全降解，有研究者估计其可在各种环境介质中持续存在数千年甚至更长时间，因此聚苯乙烯纳米塑料已经成为常见的纳米塑料类型。

2、尽管人们越来越关注纳米塑料的有害影响，但目前几乎还没有关于应对纳米塑料诱导毒性的防御机制的报道。芒果苷(mangiferin，mgf)是一种天然的多酚酸类化合物，广泛存在于漆树科植物芒果(mangifera indicate)的果实、叶、皮，百合科植物知母(anemarrhena asphodeloides bge.)的根茎、地上部分以及鸢尾科植物射干(belamcandachinensis(l.)dc.)的花、叶等植物中，已被证明具有抗肿瘤、降血糖、抗氧化和免疫调节等诸多生理活性，但在干预聚苯乙烯纳米塑料多代暴露下果蝇代谢损伤方面的研究未有报道。果蝇与哺乳动物的能量代谢器官在生物进化上高度保守，近年来，黑腹果蝇成为研究代谢性疾病较好的模式生物。因此，本发明利用黑腹果蝇模型证实芒果苷在延缓聚苯乙烯纳米塑料诱导代谢紊乱毒性上的作用。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种缓解聚苯乙烯纳米塑料诱导多代毒性的芒果苷应用，以解决上述的技术问题。

2、本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

3、缓解聚苯乙烯纳米塑料诱导多代毒性的芒果苷应用实验方法，选材取用高纯度芒果苷标准试剂、常规培养基、聚苯乙烯纳米塑料培养基、芒果苷培养基、在培养基上饲养后的实验果蝇；所述高纯度芒果苷是纯度≥98％的标准试剂。所述聚苯乙烯纳米塑料培养基的浓度为100mg/l，芒果苷培养基的浓度为80mg/l。对实验果蝇的前期饲养培养基为玉米粉培养基，玉米粉培养基配方为：玉米粉9.6g、蔗糖9.6g、酵母粉3.2g、琼脂粉0.8g、尼泊金甲酯0.2g、丙酸0.8ml、无水乙醇2ml、蒸馏水100ml；培养环境为：恒温培养箱，温度为25±1℃，相对湿度为50％～60％，光照周期为12l:12d。

4、实验方法包括以下步骤：

5、s0，在饲养后的实验果蝇中收集羽化8h内未交配的雌雄果蝇，并分装到常规果蝇培养基中，此时的果蝇记为f0代，f0代不加聚苯乙烯纳米塑料；

6、之后时间，挑选果蝇的受精卵并转移到聚苯乙烯纳米塑料实验培养基和未含有聚苯乙烯纳米塑料的标准常规培养基中，此时的果蝇记为f1代；

7、f1代的果蝇羽化后，立即转移到各自对应聚苯乙烯纳米塑料实验培养基中，待f1代果蝇产卵后，弃去成蝇，此时培养基内的果蝇记为f2代；

8、随后的f3、f4和f5按照同样的方法培养。

9、s1，对实验果蝇进行培养，分为三组，即：阴性对照组，在常规培养基中培养且不进行聚苯乙烯纳米塑料暴露；阳性对照组，在聚苯乙烯纳米塑料培养基中培养，聚苯乙烯纳米塑料暴露；实验组，在聚苯乙烯纳米塑料培养基中培养，聚苯乙烯纳米塑料暴露5代后，置于芒果苷培养基中培养。

10、s2，果蝇体重m的测定；将空的1.5ml的离心管用分析天平称重，记为m1(mg)，在离心管内随机放入10只果蝇三龄幼虫，用pbs洗净表面食物后，用滤纸吸干表面水分后再次称重记为m2(mg)，每组实验重复6次，果蝇的体重m根据以下公式计算：

11、

12、s3，葡萄糖和甘油三酯含量的测定；称取50mg果蝇三龄幼虫，加入0.45ml生理盐水机械匀浆，3500rpm离心10min，取上清液，采用葡萄糖检测试剂盒测定葡萄糖浓度；称取50mg果蝇三龄幼虫，加入9倍体积的无水乙醇，冰水浴条件下机械匀浆，3000rpm离心10min，取上清液，采用甘油三酯检测试剂盒测定甘油三酯的含量，样品中甘油三酯含量用蛋白浓度进行均一化处理。

13、s4，果蝇血淋巴中的ros的定性和定量分析；称取100mg果蝇，用pbs缓冲液清洗后用滤纸吸干水分，置于1.5ml离心管中，加入1ml pbs缓冲液，用珠磨机充分匀浆，匀浆液在4000rpm、4℃条件下离心6min，离心完成后，在荧光专用黑色96孔板中加入190μl稀释5～10倍后的匀浆上清液和10μl o12荧光探针；37℃下避光孵育25min，置于连续波长多功能微孔板检测平台中，使用488nm激发波长和526nm发射波长进行定量分析，以荧光强度/蛋白浓度表示组织ros强度；

14、采用dcfh-da荧光探针测定黑腹果蝇三龄幼虫血淋巴中的ros，具体方法如下：取100只果蝇三龄幼虫，在体式显微镜下用解剖镊在1.5ml离心管中刺破果蝇的身体，使果蝇体内的血淋巴溢出，于4℃、8000rpm离心10min，上清液即为果蝇的血淋巴；将血淋巴与5μmol/l的dcfh-da荧光探针在室温下避光孵育30min，以标记含有ros的细胞，使用倒置荧光显微镜定性分析果蝇血淋巴中的ros。

15、s5，测定sod、cat酶活力和mda含量；称取50mg果蝇三龄幼虫，加入1.35ml生理盐水机械匀浆，3000rpm离心10min后取上清，测定sod、cat酶活力和mda含量，各指标采用样本蛋白吸光度进行标准化处理。

16、s6，糖脂代谢相关基因表达测定；收集果蝇三龄幼虫，pbs缓冲液清洗3次后，加入1ml trizol研磨两次；12000g、4℃离心5min，吸取上清液至离心管中，冰上放置5min后加入200μl氯仿，涡旋振荡15s，冰上放置3min；12000g、4℃离心15min，准确吸取含总rna的上层无色水相至另一离心管中，并加入等体积的预冷异丙醇，缓慢颠倒混匀后，放置10min；12000g、4℃离心10min，弃去上清液，获得rna沉淀；向沉淀中加入1ml 75％乙醇，颠倒混匀；7500g、4℃离心5min，弃上清，待rna晾干后，加入20～50μl depc水溶解；通过nanodrop核酸蛋白定量仪测定rna的浓度，并根据浓度对rna进行适当的稀释，最后使用逆转录酶将rna反转录成cdna，采用荧光定量pcr分析rp49、dilp2、dilp3、dilp5的mrna表达情况。

17、对比现有技术，本发明的有益效果在于：

18、本发明所讲到的缓解聚苯乙烯纳米塑料诱导代谢毒性的芒果苷应用，具体提出了其在干预聚苯乙烯纳米塑料多代暴露下果蝇代谢紊乱的新方法，以果蝇为模式生物，测定了芒果苷对聚苯乙烯纳米塑料多代暴露下果蝇的体重、血淋巴中葡萄糖含量、体内甘油三酯含量、体内和血淋巴中ros水平、体内抗氧化酶活性、mda水平和糖脂代谢相关基因mrna表达水平的影响，结果发现浓度为80mg/l的芒果苷具有改善聚苯乙烯纳米塑料多代暴露下果蝇糖脂代谢紊乱的作用，该作用与抗氧化应激及调节糖脂代谢相关基因dilp2、dilp3和dilp5mrna的表达有关。