一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法

本发明涉及植物保护，尤其涉及一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法。

背景技术：

1、橘小实蝇(bactrocera dorsalis)隶属于双翅目、实蝇科，是我国重要的补充检疫性害虫。橘小实蝇成虫主要在果蔬上产卵，产卵管刺伤果实表皮，造成机械损伤，致使产卵孔周围组织感染病菌为其他病菌的入侵提供条件而引起病变。卵在果实内孵化为幼虫，初孵化幼虫具有群集取食的习性，随着龄期的增加幼虫的食量也逐渐增大，并向果肉深层扩展取食，在果肉组织内形成潜道，常造成落果或使果实腐烂不能食用。

2、待到果实腐烂，老熟幼虫从果实内钻出，以弹跳方式在地面移动寻找适宜地点化蛹，有些未脱离果实的老熟幼虫也可在果实内部化蛹。幼虫潜居果实危害的特性使得实蝇难以察觉，进而随着被害瓜果进行远距离传播。

3、现阶段橘小实蝇的防治主要以化学防治为主，兼以使用性引诱剂诱杀，果实套袋及物理机械防治等。然而，长期不合理地使用化学农药，已导致某些地区的橘小实蝇野外种群产生严重的抗药性。而目前使用的性引诱剂，主要对雄性成虫具有较好的效果；果实套袋等措施不仅费时费力，而且费用较高。

4、虫生真菌寄主广泛，致病能力强，防治效果好，不会对环境造成污染，且对人、作物和害虫天敌无害。作为微生物杀虫剂，具有其他生物制剂无法取代的优势。

5、球孢白僵菌(beauveria bassiana)在害虫生物防治中的应用最为广泛。我国自20世纪50年代开始使用球孢白僵菌防治玉米螟(ostriniafurnacalis)、大豆食心虫(leguminivora glycinivorella)等农业害虫。

6、邓春生等(1995)曾报道，在田间施用球孢白僵菌乳油对能够起到杀死80％花生蛴螬的防治效果。胡本进等(2013)通过固体发酵生产的白僵菌颗粒剂能够用于防治玉米螟，并且能够表现出较高的控制效果。杨弘平等(1992)报道了从东北黑鳃金龟(holotrichiadimphoria)及暗黑鳃金龟(holotrichia morose)尸体上分离、筛选出的对欧州金龟子(melolontha hippocastani)幼虫高毒力的球孢白僵菌菌株。目前，我国已经成为白僵菌生产和应用最多的国家之一。

7、为此，我们设计一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法，用于对上述技术问题提供另一种技术方案。

技术实现思路

1、基于此，有必要针对上述技术问题，提供一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法，用于解决上述背景技术中提出的技术问题。

2、为了解决上述的技术问题，本发明采用了如下技术方案：

3、一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂，所述药剂由球孢白僵菌和添加药物混合制成。

4、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法的一种优选实施方式，所述球孢白僵菌为球孢白僵菌菌株bb-swu10。

5、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法的一种优选实施方式，所述添加药物为阿维菌素和高效氯氰菊酯其中至少一种。

6、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法的一种优选实施方式，所述的球孢白僵菌bb-swu10的培养物为球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液，浓度为1×105～1×108孢子/ml。

7、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法的一种优选实施方式，所述球孢白僵菌孢子悬浮液与阿维菌素的混合溶液按以下配比得到：

8、5ml浓度为2.5×105孢子/ml的球孢白僵菌孢子悬浮液+1ml浓度为9.664mg/l的阿维菌素。

9、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法的一种优选实施方式，所述球孢白僵菌孢子悬浮液与高效氯氰菊酯的混合溶液按以下配比得到：

10、5ml浓度为2.5×105孢子/ml的球孢白僵菌孢子悬浮液+1ml浓度为150mg/l的高效氯氰菊酯。

11、一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂的测试方法，用于如上任意一项，步骤如下：

12、将球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液喷施于橘小实蝇成虫虫体；

13、球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液浸渍橘小实蝇幼虫；

14、球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液浸渍橘小实蝇蛹。

15、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂的测试方法的一种优选实施方式，将球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液喷施于橘小实蝇成虫虫体，步骤如下：

16、挑取橘小实蝇3日龄成虫，-20℃冰箱冷冻1.5min，试虫昏迷后转移至冰上，使其处于持续昏迷状态；

17、将橘小实蝇成虫整齐排列于培养皿中，将培养皿置于喷雾塔载物台上，取1ml的不同浓度药剂进行喷雾，喷雾时长为1min，每次处理30头；

18、将侵染后的试虫放置于10cm×10cm×10cm正方体纱网笼中，室温放置30min待其苏醒；

19、橘小实蝇苏醒后，将正方体纱网笼放置到恒温培养箱中培养观察；

20、每24h统计橘小实蝇存活率，并及时将虫尸移出，连续统计48h。

21、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂的测试方法的一种优选实施方式，球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液浸渍橘小实蝇幼虫，步骤如下：

22、挑取刚跳出玻璃培养皿即将化蛹的橘小实蝇3龄幼虫；

23、将幼虫放入装有3ml孢子悬浮液的无菌培养皿中浸渍，浸渍时长1min，每次处理30头；

24、将浸渍后的幼虫取出并吸干多余水分，然后放入新的无菌培养皿中，最后将培养皿放入培养箱中培养观察；

25、每24h统计幼虫死亡率，并及时移出虫尸，连续统计至幼虫化蛹并羽化。

26、作为本发明提供的所述的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂的测试方法的一种优选实施方式，球孢白僵菌bb-swu10的孢子悬浮液浸渍橘小实蝇蛹，步骤如下：

27、分别挑取化蛹24h、48h、96h、144h后的蛹，用无菌水清洗干净后晾干30min，放入装有1ml孢子悬浮液的1.5ml离心管中浸渍1min，每次处理30头；

28、将浸渍后的蛹取出并吸干多余水分，然后放入新的无菌培养皿中，最后将培养皿放入培养箱中培养观察；

29、每24h统计蛹死亡率，连续统计至蛹羽化后12d。

30、可以毫无疑义的看出，通过本技术的上述的技术方案，必然可以解决本技术要解决的技术问题。

31、同时，通过以上技术方案，本发明至少具备以下有益效果：

32、本发明提供的一种基于球孢白僵菌的防治橘小实蝇药剂及其测试方法，通过球孢白僵菌与阿维菌素或高效氯氰菊酯复配均表现出协同增效作用，极大地提高了防治效果，并可显著减少化学农药的使用剂量、减少环境污染，有效解决农药易产生抗性、药效不明显等问题，具有良好的应用前景和推广价值。