一种生防促生的米氏假单胞菌及其应用

本发明涉及农业微生物，具体而言，涉及一种生防促生的米氏假单胞菌及其应用。

背景技术：

1、天麻，兰科天麻属真菌异养型植物，是我国名贵的传统中药材，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络的功效，具有较高的药用和经济价值。由于市场需求增加，野生天麻采挖至资源枯竭，目前天麻主要以人工栽培为主。天麻为腐生植物，无根无叶不能进行光合作用，因此在其生长发育过程中，对根际环境具有很强的依赖性。

2、在陕西汉中略阳县，天麻种植过程中采用“三下窝”的方式，包括天麻、蜜环菌、青冈木树棒。天麻依靠蜜环菌从青冈木菌材中吸收营养，因此青冈木的品质对天麻根际环境和生长发育至关重要。随着天麻栽培面积的不断扩大，对菌材的需求也日渐增多。实地调研和当地种植户反应，青冈木菌材滋生的一种白腐类真菌，会严重制约天麻的生长发育，导致产量降低或绝收。甚至在青冈木育棒期滋生了大量的白腐类真菌病害，种植户不得已弃用很多已砍伐的青冈木树棒，造成了巨大的经济和森林资源损失。

3、植物根际有益菌在根际环境中起着防治植物病害和促进植物生长的作用，是目前绿色、可持续农业提倡的病害生物防治的主要应用策略。一些被报道的植物根际促生细菌，能够固氮、增磷和产生植物生长激素的作用，并且通过合成铁载体、抗生素、水解酶、调节乙烯、诱导系统抗性来减少病原体对植物的伤害。考虑到常用的化学杀菌剂易残留和对蜜环菌潜在的伤害性，利用有益微生物防治是最好的选择。

4、因此，筛选具有生防和促生潜力的有益细菌尤为重要。生防菌和促生菌有助于为天麻种植用菌材滋生的白腐类真菌提供绿色可持续的生物防治策略，在天麻种植中具有较好的应用价值和广泛的应用前景。

5、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种生防促生的米氏假单胞菌及其应用以解决上述技术问题。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供了一种米氏假单胞菌(pseudomonas migulae)物种的细菌在防治植物白腐病害中的应用，米氏假单胞菌的保藏号为cgmcc no.27061。

4、发明人从天麻表面和青冈木棒表面的根际土壤中分离筛选获得一株细菌(r10gs1)，经过鉴定，该菌株的16s rdna近缘序列为pseudomonas migulae straincip105470，相似度达99.25％。因此该菌株r10gs1为米氏假单胞菌。经过实验，该菌株对天麻菌材青冈木滋生的平丝变色卧孔菌(physisporinus lineatus)lyqgmzhao病害具有较好的抑制效果，在天麻筐载试验中防病率为54.55％。菌株r10gs1为革兰氏阴性菌，能够分泌iaa、溶解无机磷和有机磷，具有潜在的促生作用。因此，r10gs1菌株兼具促生和防病作用，施用后可有效防治天麻种植木白腐病害，降低化学农药的使用量，促进天麻产业绿色发展，具有广阔的应用前景。

5、米氏假单胞菌(pseudomonas migulae)r10gs1，于2023年04月11日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.27061。鉴定结果为存活，分类命名为pseudomonas migulae。

6、在本发明应用较佳的实施方式中，米氏假单胞菌物种的细菌的16s rrna与seq idno.1所示的序列具有至少96％的同一性。

7、例如具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性。seq id no.1所示的序列为保藏号为cgmcc no.27061的菌的16s rrna序列。

8、对于微生物而言，菌种是微生物分类的基本单位，由于微生物的种是一个基本分类单元，它是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近、与同属内的其他物种有着明显差异的一大群菌株的总称。同一微生物，会具有该种微生物共有相同或高度类似的表型特征和作用性质；且同一种微生物的不同菌株在作为分类鉴定上，其基因组是高度相似的，其在主要性状上是相同的，功能也是高度类似的。因此，同属于米氏假单胞菌(pseudomonasmigulae)物种的细菌也具有类似的生防效果。

9、在一种可选的实施方式中，米氏假单胞菌物种的细菌的16srrna与seq id no.1所示的序列具有至少99％的同一性，例如100％的同一性。

10、在本发明应用较佳的实施方式中，植物白腐病为天麻种植时天麻种植植物上的白腐病。

11、天麻种植植物选自植物的树干、树枝和树叶中的至少一种。在其他实施方式中，天麻种植植物也可以是植物的锯末、植物基质等。

12、在本发明应用较佳的实施方式中，天麻种植植物选自青冈、栎树、槲栎、桦树、水冬瓜、樱桃树、合欢树、化香树、栗树、槐树、杨树、榆树、柳树、桑树和果树中的任一种。

13、樱桃树包括不限于野樱桃，桦树包括不限于白桦树。

14、在一种可选的实施方式中，将米氏假单胞菌物种的细菌对天麻种植植物进行浸泡、将米氏假单胞菌物种的细菌喷施到天麻种植植物上。

15、通过浸泡能够对天麻种植植物的病原菌进行有效防治，本领域的技术人员容易实施：将天麻种植物完全浸没在生防菌液中，或者先对天麻种植物的其中一端或其中一部分进行浸泡，然后对天麻种植物的另外一端或另外一部分进行浸泡。

16、喷施的方式包括不限于：将待喷施菌的菌粉制备菌液，然后进行喷施；或者将菌液与溶剂配伍后，用于喷施。配伍比例根据病害的严重情况进行调整。

17、在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-120min；浸泡时间为10-60min；在一种可选的实施方式中，天麻种植植物表面干燥后进行天麻的有性种植或无性种植。

18、浸泡时间例如是10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、60min、70min、90min、100min或120min，也可以是选自10-120min之间的任意一个点值。

19、在一种可选的实施方式中，米氏假单胞菌物种的细菌的活菌数为1×106cfu/ml-1×108cfu/ml。在一种可选的实施方式中，米氏假单胞菌物种的细菌的活菌数为1×105cfu/ml、1×106cfu/ml、1×107cfu/ml或1×108cfu/ml。

20、在本发明应用较佳的实施方式中，天麻种植植物白腐病害是指由平丝变色卧孔菌(physisporinus lineatus)引起的白腐病。

21、在本发明应用较佳的实施方式中，米氏假单胞菌物种的细菌是指：米氏假单胞菌物种的细菌或其培养物。

22、在一种可选的实施方式中，培养物是指米氏假单胞菌物种的细菌的发酵液、发酵上清液、菌泥或发酵液的溶出物。

23、在一种可选的实施方式中，上述米氏假单胞菌物种的细菌包括不限于米氏假单胞菌物种的细菌的浓缩物、糊化物、干燥物、液态物、稀释物和破碎物中的至少一种。干燥物包括不限于喷雾干燥物、冷冻干燥物、真空干燥物、滚筒干燥物等。

24、第二方面，本发明还提供了一种米氏假单胞菌物种的细菌在促进天麻生长中的应用，米氏假单胞菌的保藏号为cgmcc no.27061。

25、在一种可选的实施方式中，米氏假单胞菌通过如下至少一种方式促进天麻生长：

26、(1)分泌iaa；(2)溶解有机磷；和(3)溶解无机磷。

27、发明人发现，米氏假单胞菌能够分泌iaa、溶解无机磷和有机磷，具有潜在的促生作用。上述促生包括不限于：略微或明显提高天麻的数量，和/或，略微或明显重量(包括不限于单个天麻的重量)。

28、在一种可选的实施方式中，将米氏假单胞菌物种的细菌对天麻种植植物进行浸泡、将米氏假单胞菌物种的细菌喷施到天麻种植植物上。

29、在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-120min；在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-60min；在一种可选的实施方式中，天麻种植植物表面干燥后进行天麻的有性种植或无性种植。

30、在一种可选的实施方式中，米氏假单胞菌物种的细菌的活菌数为1×106cfu/ml-1×108cfu/ml。

31、第三方面，本发明还提供了一种米氏假单胞菌，其保藏号为cgmcc no.27061。

32、第四方面，本发明还提供了一种菌剂，其包括上述的米氏假单胞菌。

33、在一种可选的实施方式中，菌剂为固体、液体或半固体；

34、在一种可选的实施方式中，菌剂还包括载体和/或辅助材料；

35、在一种可选的实施方式中，载体或辅助材料选自：

36、保护剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、香料、防腐剂、稳定剂、悬浮剂、分散剂和稀释剂中的至少一种。

37、示例包括：赋形剂，例如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙、碳酸钙；粘合剂，例如纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖、淀粉；崩解剂，例如淀粉、水解淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙盐、羟丙基淀粉、乙二醇淀粉钠、碳酸氢钠、磷酸钙、柠檬酸钙；润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、月桂基硫酸钠；香料，例如柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸、橙粉；防腐剂，例如苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯)；稳定剂，例如柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸和来自titriplex系列的多羧酸，例如二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)；悬浮剂，例如甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸铝；分散剂；稀释剂，例如水、有机溶剂；蜡、脂肪和油，例如蜂蜡、可可脂；聚乙二醇；白凡士林等。

38、第五方面，本发明还提供了一种菌剂的制备方法，将上述的米氏假单胞菌进行活化培养后，在28±0.5℃培养。

39、在一种可选的实施方式中，活化培养是将米氏假单胞菌接种于lb液体培养基中，28±0.5℃培养20-24h制成种子液。

40、第六方面，本发明还提供了一种组合物，其包括上述的米氏假单胞菌。

41、组合物的形态包括不限于固体、液体或半固体。半固体例如是膏剂等。将该组合物用于天麻种植植物的生物防治和/或促生。

42、本发明具有以下有益效果：

43、本发明从天麻表面和青冈木棒表面的根际土壤中分离筛选获得一株细菌(r10gs1)，经过鉴定，该菌株的16s rdna近缘序列为pseudomonas migulae straincip105470，相似度达99.25％。因此该菌株r10gs1为米氏假单胞菌。经过实验，该菌株对天麻菌材青冈木滋生的平丝变色卧孔菌(physisporinus lineatus)lyqgmzhao病害具有较好的抑制效果，在天麻筐载试验中防病率为54.55％。菌株r10gs1为革兰氏阴性菌，能够分泌iaa、溶解无机磷和有机磷，具有潜在的促生作用。因此，r10gs1菌株兼具促生和防病作用，施用后可有效防治天麻种植木白腐病害，降低化学农药的使用量，促进天麻产业绿色发展，具有广阔的应用前景。