一种筛选杜鹃花耐旱种质的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物育种领域，具体涉及一种筛选杜鹃花耐旱种质的方法。
【背景技术】
[0002]杜醒花是杜醒花科(Ericaceae)杜醒花属(Rhododendron)植物的泛称，其种质资源极其丰富，目前探明有近千种，栽培品种更是数以万计，具较高的观赏价值和应用价值，是我国传统十大名花和世界三大高山花丼之一，亦是盆栽和园林绿化的重要花丼种类，在世界花丼产业中占有十分重要的地位。杜鹃花根系纤细如发，对水分反映十分敏感。多数杜鹃花种质畏干旱，故杜鹃花在野外生长、园林绿化及室内观赏栽培中，其生长最常受到环境中干旱因素的影响。目前，种植者多采取遮荫、补充叶面水分、加大浇水次数、选用保水基质等措施来缓解干旱危害，但这些园艺措施费工费时、收效甚微，加大了劳动成本。因此，选育抗旱节水的杜鹃花品种并用于生产，是减少干旱危害的最根本途径。
[0003]杜鹃花的耐旱能力因起源、地理环境等的不同存在较大差异，故开展杜鹃花耐旱种质的筛选，是开展杜鹃花耐旱育种的基础。杜鹃花属植物丰富的野生种质资源携带许多优异基因，是杜鹃花遗传改良的重要资源，而实生繁殖则是杜鹃花主要繁殖方式之一，且科研工作者们从杜鹃花种子繁殖的实践认识到，从种子萌发获得的幼苗开始驯化，使之适应当地的气候，是一种有效的引种驯化手段。目前，杜鹃花的研宄多集中在引种驯化、繁殖栽培上，有关耐旱性方面研宄报道较少，如何以种子为材料进行杜鹃花耐旱种质筛选尚属未知。故以种子为材料，选取合适耐旱指标，建立简单、快速的，并能基本上客观反映利用种子繁殖的杜鹃花耐旱真实情况的耐旱筛选方法，筛选耐旱种质资源，为杜鹃花耐旱育种及大量的利用种子繁殖的杜鹃花种质资源和杂交育种后代的耐旱性评价奠定基础。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种以种子为材料，快速可靠、简便易行的筛选杜鹃花耐旱种质的方法。
[0005]为实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案:
[0006]一种筛选杜鹃花耐旱种质的方法，其内容包括:选用杜鹃花种子为对象，利用聚乙二醇6000 (PEG-6000)模拟干旱胁迫，采用培养皿滤纸法进行培养，选择相对发芽率为耐旱指标进行筛选，具体步骤如下:
[0007](I)种子的选取与消毒:选取同一时期的杜鹃花种子，用质量百分含量为10%次氯酸钠或质量百分含量为0.5%的高锰酸钾浸泡消毒lOmin，清水洗净吸干；
[0008](2) 15% PEG-6000模拟干旱胁迫下种子萌发培养:将经步骤(I)消毒处理后的杜鹃花种子均匀排布于培养皿内已浸透15% PEG-6000溶液的滤纸上，每培养皿I份杜鹃花种质，100粒，4次以上重复，置于温度20?25°C的恒温培养箱中进行培养，每天向滤纸加15% PEG-6000溶液数滴，以浸透滤纸并稍有剩余为度，每3d更换I次滤纸；
[0009](3)蒸馏水(对照)下种子萌发培养:将经步骤(I)消毒处理后的杜鹃花种子均匀排布于培养皿内已浸透蒸馏水滤纸上，每培养皿I份杜鹃花种质，100粒，重复次数和培养条件同步骤(2)，每天向滤纸加蒸馏水数滴，以浸透滤纸并稍有剩余为度；
[0010](4)耐旱指标相对发芽率的测定与耐旱种质的筛选:培养20d后，以胚根长度达种子长度的1/2为发芽标准统计发芽种子数，按公式发芽率=(种子发芽总数/供试种子总数(100粒))X100%计算发芽率，按公式相对发芽率=(15%PEG-6000模拟干旱胁迫下的发芽率/对照的发芽率)X 100%计算相对发芽率，比较所测得的相对发芽率，相对发芽率较高的杜鹃花种子判定为较耐旱的杜鹃花种质。
[0011]对上述技术方案进行进一步阐述:
[0012]在本发明中:所述的杜鹃花种子为杜鹃花蒴果采集后经充分风干、筛选去杂后的成熟饱满、贮藏期不超过10个月的种子。
[0013]本发明经过以下多项对比试验，优选总结出上述最佳的技术参数:
[0014]1、种子萌发适宜温度的选择:选择成熟饱满，消毒处理过杜鹃花种子，均与排布于内附浸透蒸馏水滤纸的培养皿内，培养皿分别置于10°c、15°C、20°C、25°C、30°C的恒温培养箱中培养，每处理100粒，重复4次，20d后统计发芽率。结果表明10°C、15°C下杜鹃花种子发芽率不足20%，20°C、25°C萌发率较高，二者差异不显著。
[0015]2、不同贮藏期种子的选择:分别选择贮藏4、6、8、10、12个月的成熟饱满的杜鹃花种子，经消毒处理后采用培养皿滤纸法培养，即将不同贮藏期的种子均匀排布于内附浸透蒸馏水滤纸的培养皿中，20?25°C的恒温培养箱中培养，每处理100粒，重复4次，20d后统计发芽率。结果表明种子发芽率随贮藏时间的延长而降低，贮藏12个月的种子发芽率显著下降，贮藏4到10个月的种子发芽率差异不明显。
[0016]3、PEG-6000模拟干旱胁迫浓度的确定试验:设置6个PEG-6000胁迫浓度，分别为
O(蒸馏水，对照)、5 %、10 %、15 %、20 %和25 %。将贮藏6个月籽粒成熟饱满的杜鹃花种子经消毒后，均匀排布于培养皿内浸透了不同浓度PEG-6000溶液的滤纸上，置于20?25°C的恒温培养箱中培养，每处理100粒，重复4次，20d后统计发芽率。结果表明:当PEG-6000浓度彡10%时，种子发芽率随PEG-6000浓度的增加而降低；iPEG-6000浓度彡15%时，种子发芽率显著低于对照；当PEG-6000浓度多25%，种子发芽率极低或不萌发；PEG_6000浓度为15%时，种子发芽率较对照低40-60%，基本符合耐旱的临界值(比对照低50%左右)，故确定进行杜鹃花耐旱种质筛选的PEG-6000浓度为15%。
[0017]4、耐旱指标的选择:在上述试验1、2、3的基础上，将贮藏6个月籽粒成熟饱满的杜鹃花种子经消毒后，分别置于培养皿内浸透了浓度O (对照)和15% PEG-6000溶液的滤纸上，于20?25°C的恒温培养箱中培养，每处理100粒，重复4次，每天记录种子发芽数，20d后每处理选10株测量幼苗生长量，计算发芽率(种子发芽总数/供试种子总数(100粒)X100