一种露珠杜鹃的组培快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养技术，具体涉及一种露珠杜鹃的组培快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]露珠杜(Rhododendronirroratum Franch)属于杜花科(Ericaceae)杜醒花属常绿无鳞杜鹃亚属，露珠杜鹃亚组中美丽、黄色大花型种类。它主要分布在四川西南部，贵州西北部及云南北部地区海拔1800?2000m的山顶灌木林中或稀草地上，常绿灌木或小乔木，高达4?Sm。花期3?5月，果期9?10月，是美丽的观赏花木。露珠杜鹃是优良的、有待研宄开发的园林绿化树种，可引种驯化成为露地栽培的园艺观赏植物，是杜鹃育种的重要种质资源。
[0003]露珠杜鹃具有很大的观赏价值，近年来，关于同属其他种植物的研宄颇多，但露珠杜鹃的研宄报道很少，主要是在栽培方面。露珠杜鹃的种子和扦插繁殖，由于出苗率低、常绿阔叶杜鹃枝条粗壮、稀少，扦插生根困难，移栽成活率低，又受季节和资源的限制，很难大规模育苗。为了更好的保护、开发、利用露珠杜鹃资源，研宄露珠杜鹃组培快繁技术具有重要意义。由于露珠杜鹃对于生长条件有严格的要求，其组培快速繁殖具有一定的困难，目前未见相关报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种培养周期短、不受季节限制、并且产量较高的露珠杜鹃带芽茎段组培快速繁殖方法，以克服现有技术的不足。
[0005]本发明提供了一种露珠杜鹃组培快速繁殖方法。该方法采用组织培养技术，对种子播种出的无菌苗的带芽茎段进行丛生芽诱导，继而长成完整植物。
[0006]具体而言，本发明提供的方法包括以下步骤:
[0007](I)在无菌条件下，将当年的露珠杜醒种子在75%酒精中浸泡25?35s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2%次氯酸钠溶液中浸泡8?12min，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；
[0008](2)在无菌条件下，将经步骤(I)处理后的种子抖撒在WPM培养基上，在温度24?26°C、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行无菌培养，种子完全萌发至无菌苗长度为2?3cm ；
[0009](3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取I?2cm的带芽茎段接入培养基中，所述培养基包含以下成分:WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?lmg/L ;在温度24?26°C、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行无菌培养，至长出丛生芽；
[0010](4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到培养基上，所述培养基包含以下成分:WPM培养基，TDZ 0.1?0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?0.5mg/L，赤霉素3mg/L ;在温度24?26°C、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行无菌培养，丛生芽增殖、伸长；
[0011](5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置2?3天后，每天打开培养瓶口 I?2h并重复2?3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；在温度19?21°C、湿度60?70%、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行培养，至生根。
[0012]本发明所述步骤⑴中，种子在2%次氯酸钠溶液中浸泡的时间优选为lOmin。
[0013]所述步骤(2)中，优选培养基的组成为:WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L?
[0014]所述步骤(3)中，优选培养基的组成为::WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，鹿糖 30mg/L，琼脂 7.5mg/L。
[0015]所述步骤(4)中，优选培养基的组成为::WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，赤霉素 3mg/L，鹿糖 30mg/L，琼脂 7.5mg/L。
[0016]由于露珠杜鹃在自然状态下生长于酸性土壤中，本发明所述各个步骤的培养基/基质为酸性环境，pH值优选为5.4?5.6。
[0017]本发明提供的方法可以成功实现露珠杜鹃的组培快速繁殖。按照本发明提供的方法进行露珠杜鹃的组织培养，露珠杜鹃种子的萌发率可达45?60%，同时污染率可以控制在35%以下；在丛生芽的诱导阶段，20左右即开始出现不定芽，一个半月后，丛生芽明显增多，诱导率最高可达100% ;在丛生芽的繁殖和伸长培养阶段，芽苗生长健壮，单株可高达3cm，繁殖系数高达4.6 ;在生根培养阶段，15天左右即开始有根长出，40天后生根率可达85%以上，根长可至3?4cm。本发明提供的方法易于控制，效果显著。
【附图说明】
[0018]图1，为实施例1中，步骤(2)所述抖撒在培养基上的种子；
[0019]图2，为实施例1中，步骤(2)所述开始萌发的种子，有少量无菌苗出现；
[0020]图3，为实施例1中，步骤⑵所得无菌苗；
[0021]图4，为实施例1中，步骤(3)所得丛生芽；
[0022]图5，为实施例1中，经步骤⑷培养所得丛生芽；
[0023]图6，为实施例1中，步骤(5)所述在基质中栽培的芽苗；
[0024]图7，为实施例1中，步骤(5)所得40天后生出的须根，根长3?4cm。
【具体实施方式】
[0025]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0026]实施例1
[0027]按照以下步骤快速繁殖露珠杜鹃:
[0028](I)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75%酒精中浸泡30s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2%次氯酸钠溶液中浸泡lOmin，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；
[0029](2)在无菌条件下，将经步骤(I)处理后的种子抖撒在PH5.5的培养基上，所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;在温度25°C、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行无菌培养，种子完全萌发至无菌苗长度为2?3cm ;发芽率为59.7%，污染率为13.2% ;
[0030](3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取长I?2cm的带芽茎段接入pH5.5的培养基中，所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;在温度25°C、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行无菌培养；10天后，芽点开始膨大，培养至20天开始出现不定芽，一个半月后，丛生芽明显增多，诱导率达到了 100%，繁殖系数为3.5 ;
[0031](4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到pH5.5的培养基上，所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;温度25°C、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行无菌培养；40天后基部长出丛生芽，芽苗生长健壮，单株可达3cm左右，繁殖系数为4.6 ;
[0032](5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出颜色嫩绿的健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置3天后，每天打开培养瓶口 Ih并连续重复3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入PH5.5的基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；置于人工气候箱中，在温度25°C、湿度65%、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行培养；15天后，基部开始有根长出，40天后，生根率为85.7%，生根数量大于15条，有须根，根长3?4cm。
[0033]实施例2
[0034]与实施例1相比，区别仅在于，步骤(I)所述在2%次氯酸钠溶液中浸泡的时间为8min ;步骤(2)所得种子的发芽率为61.8%，污染率为36.3%。
[0035]实施例3
[0036]与实施例1相比，区别仅在于，步骤⑴所