一种檀香三倍体植株的诱导方法
【技术领域】
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[0001]本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种檀香三倍体植株的诱导方法。
【背景技术】
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[0002]擅香(Santalumalbum L.)为擅香科(Santalaceae)擅香属(Santalum)半寄生常绿乔木，为名贵、珍稀植物，主要分布于印度，印度尼西亚，澳大利亚及太平洋的一些群岛。人类利用它已有数千年的历史，因其木材可用于雕刻和提炼檀香油而格外出名，素有“绿色黄金”之称。檀香木是提取檀香油的原材料，它含有α和β檀香醇等成分，其主要用于化妆品、香料、药材和高级工艺雕刻品等的原料；它含有的抗菌和抗肿瘤成分，作为传统中药，可用于安神、洁净空气以及治疗一些顽固疾病。
[0003]多年来，人们一直希望能够以人工栽培方式发展檀香木产业，实现较高的经济回报。国内外研宄人员已经对檀香的组培快繁进行大量的研宄。研宄资料表明:在斐济，檀香和斐济檀香的有性杂交种F1代表现出明显的杂种优势，其生长势比母本斐济檀香高300 %，比父本檀香则高32%;结香方面，檀香需要10年，而杂种檀香则需要6-7年；在心材生长方面，一般每株檀香需要种植25-30年心材达到40-80公斤，而杂种檀香Fl只需种植15-20年。由此可见，培育檀香新品系是提高其经济价值的有效途径之一。目前，我国在檀香属种源筛选、杂交育种、优良品系的创新等方面仍较空白，如不及时进行种质资源和技术创新，势必制约我国檀香产业的发展，无法摆脱完全依赖进口的被动局面。因此，在我国发展檀香产业和寻找其它经济有效的方法以提高檀香的经济效益势在必行。
[0004]多倍体(polyploid)系指生物体体细胞中含有超过2个染色体组的个体。一般地，多倍体植物较二倍体植物的营养器官粗大、营养物质更加丰富、抗逆性强等优良性状。目前，可通过胚乳脱分化培养、二倍体与四倍体杂交两种途径获得三倍体植株。国内，已有柑橘、苹果、枸杞、猕猴桃、玉米、大麦等诱导三倍体植株的报道，但尚无檀香三倍体植株诱导的相关报道。
【发明内容】
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[0005]本发明的目的是提供一种简单、易操作，能获得檀香三倍体植株的诱导方法。
[0006]本发明的檀香三倍体植株的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0007]将檀香(Santalum album L.)成熟种子消毒后，在无菌条件下用250?500mg/L的赤霉素水溶液浸泡消毒后的檀香种子20?24h，然后取出种子用无菌蒸馏水冲洗，接着剥掉外种皮，余下种子接种至诱导培养基上，置于光照强度40?50 μπιο? HT2s'光照时间12?16h/d，培养温度(26±2°C )进行培养，诱导出不定芽，不定芽接种至相同的诱导培养基上，置于光照强度40?50 μ mo I m^V1，光照时间12?16h/d，培养温度(26±2°C )进行继代培养，诱导不定芽分化与生长，然后进行多倍体筛选与鉴定获得檀香三倍体植株；
[0008]所述的诱导培养基每升含有6-BA 0.2?0.5mg、蔗糖20?30g和常量的琼脂，余量为MS培养基，pH 5.5-5.8。
[0009]所述的消毒优选为将檀香种子在无菌条件下先用体积分数75%酒精水溶液浸泡消毒lmin，再用质量分数0.1% HgCl溶液浸泡消毒12min，无菌蒸馏水冲洗3_5遍。
[0010]所述的取出种子用无菌蒸馏水冲洗，优选冲洗3?5次。
[0011]所述的常量的琼脂是使诱导培养基变成固体的量，其量属于本领域常规知识，如每升诱导培养基含有7.5g的琼脂。
[0012]所述的多倍体筛选与鉴定是诱导出的不定芽进行分化和生长出无根幼苗，无根幼苗长高至3?4cm左右时，以檀香体外茎段培养的二倍体苗作为对照，通过形态学观察比较初步筛选出与檀香体外茎段培养的二倍体苗不同的植株，经茎尖染色体压片计数的方法，再次鉴定具细长叶片的苗为三倍体植株。
[0013]所述的MS培养基为国际通用的培养基，其成份和配置方法可参考书籍(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京:中国林业出版社，1991.)。
[0014]本发明经过经高浓度赤霉素预处理的檀香种子接种到含低浓度细胞分裂素的诱导培养基中，就可以使其直接诱导不定芽，经2次继代培养并获得檀香三倍体植株，节省了大量的人力和物力，为檀香六倍体的育种提供技术支持。可望获得更高产量的心材，取得更高的经济收益，并为其它檀香种源的育种提供借鉴。
[0015]因此，本发明通过诱导檀香种子成三倍体植株，为进行檀香多倍体加倍研宄，获得优良的檀香新品种，发展檀香产业提供有效技术途径之一。本发明具有操作简单易行，应用价值高等优点。
【附图说明】
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[0016]图1是檀香二倍体植株；
[0017]图2是檀香三倍体植株，叶片细长；
[0018]图3是檀香中期染色体A，二倍体2n = 20 ;B，三倍体3n = 30，标尺=5 μπι。【具体实施方式】:
[0019]以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0020]实施例1:
[0021]檀香三倍体植株的诱导方法，包括以下的步骤:
[0022](I)外植体选择及其消毒
[0023]采取华南植物园引种栽培20年龄檀香(Santalum album L.)的成熟鲜果，手工剥掉果肉，蒸馏水冲洗干净种子，然后将种子在超净工作台上先用体积分数75%酒精水溶液浸泡消毒lmin，再用质量分数0.1% HgCl溶液浸泡消毒12min，无菌蒸馏水冲洗3遍，最后将消毒后的种子置于超净工作台上的无菌滤纸上吹干。
[0024](2)种子预处理
[0025]无菌条件下用250mg/L的无菌赤霉素水溶液浸泡预处理种子24h，处理后的种子于超净工作台上用无菌水冲洗3遍，接着将其置于无菌滤纸上，用锋利的无菌手术刀片剥掉坚硬的外种皮，余下种子待用。
[0026](3)种胚诱导培养
[0027]诱导培养基，配方为每升含有6-BA 0.5mg、蔗糖30g、琼脂7.5g，余量为MS培养基，pH 5.7。按照上述配方，将其组份混合均匀后，调pH 5.7。再在每瓶中灌装诱导培养基25ml，灭菌备用。将步骤(2)剥去外种皮的种子(余下种子)接种至诱导培养基上，5粒/瓶，共30瓶，置于光照强度50 μ mo I m 2S S光照时间14h/d，培养温度(26±2°C )进行培养，培养4周，外植体可见绿色的芽点，继续培养I周，再继代培养于相同的培养基(诱导培养基)中诱导不定芽的分化与生长出无根幼苗，培养条件为光照强度50 μπιο? HT2s'光照时间14h/d，培养温度(26±2°C )。
[0028](4)多倍体的筛选与鉴定
[0029]当诱导出来的无根幼苗长高至3cm左右时，以檀香体外茎段培养的二倍体苗为对照(图1)，通过形态学观察比较初步筛选出与檀香体外茎