一种美国红枫组培快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种美国红枫组培快繁方法。
【背景技术】
[0002]美国红枫(Acer rubrum 办)，又名红花槭、北美红枫、加拿大红枫、北方红枫、红糖槭、猩红枫、沼泽枫等，系槭树科槭树属高大落叶乔木，具有适应性强、耐旱、耐温、长势迅猛等特点，是园林绿化的优良树种。春季新叶泛红，与成串的红色花朵相互辉映；夏季枝叶成荫:秋天叶子呈亮红翻黄色，到最后呈现鲜红色，持续时闻长。树形直立而上，树冠圆形，灰色树皮。全年颜色丰富，春天开花，雌雄同株，花红色，果实有翅，红色。美国红枫的移栽成活率很高，生长势强，具有抗性强，能适应街道的特殊环境，栽培管理工作量小，并且美国红枫病虫害很少，发现后及时处理不会对树木造成影响。美国红枫具有悬铃木的许多优点，深受人们的喜爱，美国红枫园艺种已经成为替代香樟与梧桐的优秀绿化景观树种，是新一代的“行道树之王”。
[0003]目前美国红枫主要以种子播种繁殖方式进行种苗繁育，但因种子结实率较低，因此限制了美国红枫大量种苗的供给。植物组织培养具有繁殖快、花费少、增殖系数高等特点，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了美国红枫组织培养再生植株，建立了系统的美国红树组织培养植株再生体系，为实现美国红枫种苗规模化工厂育苗提供参考。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种美国红枫组培快繁方法，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了美国红枫组织培养再生植株，建立了系统的美国红树组织培养植株再生体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种美国红枫组培快繁方法，包括以下的步骤:
(I)外植体消毒:采集回来的茎段以淸水冲洗10?25min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质，在超净工作台中用70%?80%乙醇溶液中消毒10?30s，后用无菌水洗3?5次，再用0.1%?0.3%升萊溶液消毒10?25min,用无菌水冲洗4?6次后用无菌滤纸吸去水分后备用。
[0006](2)诱导培养:将步骤(I)消毒好的茎段切成带I个茎节约1.5cm长的茎段并接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在25?28°C条件下全暗培养5?10天，然后置于每天光照10?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养直至形成不定芽。
[0007](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养2?3天，然后置于每天光照11?15小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养，30天继代一次。
[0008](4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.5?2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养2?3天，然后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根。
[0009](5)炼苗移栽:将长至3?4cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由黄沙土和火碳泥(1:1)混合成的基质中于每天光照10?12小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C，空气湿度为80%?90%的培养箱中培养5?7天，然后移栽定植于大田中。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:WPM+1.0?5.0mg/L 6-BA+0.1?1.0mg/LIBA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:WPM+0.001?0.01mg/L TDZ+0.1?1.0mg/LNAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:MS+1.0?5.0mg/L IBA+1.0?2.0mg/L GA3+0.1 ?0.5mg/L 6-BA+15 ?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]本发明的优点是:美国红枫(Acer rubrum 办)系槭树科槭树属高大落叶乔木，具有适应性强、耐旱、耐温、长势迅猛等特点，是园林绿化的优良树种。目前美国红枫主要以种子播种繁殖方式进行种苗繁育，但因种子结实率较低，因此限制了美国红枫大量种苗的供给。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了美国红枫组织培养再生植株，建立了系统的美国红枫组织培养植株再生体系，为实现美国红枫种苗规模化工厂育苗提供参考。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1
(I)外植体消毒:采集回来的茎段以淸水冲洗1min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质，在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒10s，后用无菌水洗3次,再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分后备用。
[0016](2)诱导培养:将步骤(I)消毒好的茎段切成带I个茎节约1.5cm长的茎段并接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在25°C条件下全暗培养5天，然后置于每天光照10小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25°C的条件下培养直至形成不定芽，平均污染率为仅为4.5%，平均成活率为89.7%，诱导率为85.3%。所述的诱导培养基为:WPM+2.0mg/L 6-BA+0.lmg/LIBA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。
[0017](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25°C条件下全暗培养2天，然后置于每天光照11小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25°C的条件下培养10天即可观察到腋芽的伸长生长，增殖系数为
3.8，30天继代一次。所述的增殖培养基为:WPM+0.005mg/L TDZ+0.5mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.7g/L 琼脂，pH 为 5.5。
[0018](4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.5?2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25°C条件下全暗培养2天，然